芪苈强心对慢性心力衰竭大鼠肾脏aqp2及心脏功能的影响基础研究课件

芪苈强心对慢性心力衰竭大鼠肾脏AQP 2及心脏功能的影响 Effectsofqiliqiangxinontherenalexpressionofaquaporin 2geneinratswithchronicheartfailure 南方医科大学南方医院心血管内科许顶立邬真力黄鹏 心力衰竭时全身总水量 总Na 量 细胞外容量 血浆容量明显增加 AnandIS HeartFailure 1997 心力衰竭时水钠潴留的机理 血Na 与心力衰竭的预后 充血性心力衰竭时低Na 血症的发生机制 6 aquaporin 2 肾脏AQP2水通道蛋白 Aquaporin AQP 是具有高度选择性水通道的同源蛋白质家族 在维持机体的水平衡中起着重要作用 并且与水平衡紊乱所致疾病有密切关系 AQP2是肾脏在生理条件下最主要的受AVP调节的水通道 是目前唯一发现的其基因突变可导致肾性尿崩症的Aquaporin水通道蛋白 被认为是维持体内水平衡调节的必须物质 NielsenS PhysiolRev 2002 82 205 244 充血性心力衰竭大鼠肾脏AQP2水通道mRNA表达的改变 CCHF1HF1HF2HF2 AQP2 GAPDH XuDL JChinInvest 1997 99 1500 1505 充血性心力衰竭大鼠肾脏内髓质AQP2水通道蛋白表达的改变 CCHF1HF1HF2HF2M XuDL JChinInvest 1997 99 1500 1505 我们的实验研究发现 速尿治疗1周可以显著增加CHF大鼠的尿量 对肾脏AQP 2蛋白表达未发生显著改变 但经过速尿治疗4周 CHF大鼠血浆AVP浓度升高 通过肾脏V2 R上调AQP 2的表达 提示这种代偿机制可能是低Na 血症和 利尿剂抵抗 的原因之一 研究背景 研究背景 CHF大鼠血浆AVP较对照组升高 同时上调肾脏AQP 2的基因和蛋白表达 CHF时水潴留的重要途径 心输出量下降垂体分泌血管加压素 AVP 肾集合管主细胞V2 RAQP 2表达上调集合管水重吸收水潴留 下调肾脏AQP 2的表达 是否可以成为纠正CHF患者水潴留 缓解临床症状 改善心脏功能的靶点之一 XuDL JChinInvest 1997 99 1500 1505 许顶立等 中华医学杂志 1998 78 2 118 120 V2拮抗剂 OPC 31260 对充血性心力衰竭大鼠肾脏AQP2水通道蛋白mRNA表达的影响 CHF2HF VCHF2HF VCHF2HF V 肾皮质肾外髓质肾内髓质 AQP2 GAPDH XuDL JChinInvest 1997 99 1500 1505 V2拮抗剂 OPC 31260 对充血性心力衰竭大鼠肾脏内髓质AQP2水通道蛋白表达的影响 CCHF2HF2HF VHF VM XuDL JChinInvest 1997 99 1500 1505 研究背景 中药芪苈强心的成分主要包括黄芪 附子及苈葶子等中药材 有益气温阳 活血通络 利水消肿的作用 已有研究报道 芪苈强心可以增强心肌收缩力 增加尿量 改善CHF患者的心脏功能 那么芪苈强心是否可以影响CHF大鼠肾脏AQP 2的表达 因此 本研究选用芪苈强心作为干预药物 观察芪苈强心对CHF大鼠尿量及肾脏AQP 2表达的影响 实验动物 在结扎前降支后 观察到前壁供血区心肌变苍白 ECG出现J点抬高 0 2mV 提示结扎冠脉成功 AMI术后4周 存活大鼠经超声心动图检查后 见大鼠心脏前壁变薄 室壁运动减弱 确定CHF大鼠造模成功 CHF模型标准 选用2月龄 雄性SD大鼠 体重200 250g 采用结扎左冠状动脉致急性心肌梗死 AMI 后心力衰竭大鼠模型 实验方法 模型组 CHF 分为CHF 1组 n 9 和CHF 4组 n 9 给予生理盐水注入胃内 芪苈大剂量治疗组 QH 分为QH 1组 n 8 和QH 4组 n 9 给予芪苈强心1 0g kg 1 d 1注入胃内 芪苈中剂量治疗组 QM 分为QM 1组 n 8 和QM 4组 n 9 给予芪苈强心0 5g kg 1 d 1注入胃内 芪苈小剂量治疗组 QL 分为QL 1组 n 9 和QL 4组 n 9 给予芪苈强心0 25g kg 1 d 1注入胃内 另设对照组 CTL 分为CTL 1组 n 10 和CTL 4组 n 10 给予生理盐水注入胃内 结果 芪苈强心治疗CHF大鼠1周后血液生化的变化Biochemicaldataindifferentgroupsafter1weektreatmentwithqiliqiangxin groupK mmol L Na mmol L Cr mol L Osm mosmol kg AVP pg ml BNP pg ml CTL 15 6 0 3148 2 2 728 5 2 7303 4 4 53 0 0 490 5 18 7CHF 15 7 0 3142 7 2 629 6 2 1297 8 7 77 9 1 8 375 1 60 4 QH 15 4 0 4144 7 3 729 0 2 9298 2 4 78 1 1 1 348 1 65 1 QM 15 2 0 3144 0 4 330 5 3 1301 6 5 17 3 1 7 361 0 53 3 QL 15 5 0 4145 2 3 828 2 3 4297 4 4 17 5 1 5 370 9 55 7 F值1 3463 4870 4272 94632 73050 642P值0 2770 0370 7350 0480 0010 001 ComparedtoCTL 1 P 0 01 结果 Thechangesofurinaryvolumeindifferentgroupsratsduring1weektreatment QH 1组 QM 1组 QL 1组大鼠随着用药时间的延长尿量显著增加 实时荧光定量PCR检测各组V2 RmRNA变化 ComparisonofrelativemRNAquantitylevelindifferentgroups 结果 CHF 1组V2 RmRNA表达较CTL 1组显著增加 P 0 01 经过1周芪苈强心治疗后 QH 1组 QM 1组 QL 1组V2 RmRNA表达与CHF 1组相比均比无显著性差异 P 0 05 ComparedtoCTL 1 P 0 01 实时荧光定量PCR检测各组AQP 2 RmRNA变化 ComparisonofrelativemRNAquantitylevelindifferentgroups 结果 CHF 1组AQP 2mRNA表达较CTL 1组显著增加 P 0 01 而芪苈强心治疗1周后 QH 1组 QM 1组 QL 1组AQP 2mRNA表达与CHF 1组相比均无显著性差异 P 0 05 ComparedtoCTL 1 P 0 01 治疗1周后各组大鼠肾脏AQP 2蛋白的表达TherenalAQP 2expressionindifferentgroupsafter1weektreatment 结果 29KD 36 45KD 12345 注 1为CTL 1组 2为CHF 1组 3 4 5分别为QH 1 QM 1 QL 1组 ComparedtoCTL 1 P 0 01 结果 芪苈强心治疗CHF大鼠4周后血液生化的变化Biochemicaldataindifferentgroupsafter4weektreatmentwithqiliqiangxin groupK mmol L Na mmol L Cr mol L Osm mosmol kg AVP pg ml BNP pg ml CTL 45 7 0 2148 4 2 427 3 2 0303 2 4 83 0 0 497 1 16 9CHF 45 4 0 3143 3 2 529 8 2 1297 8 7 57 9 0 5 387 2 71 0 QH 45 6 0 3147 8 3 030 6 3 4299 3 4 46 1 0 5 275 0 63 8 QM 45 5 0 4146 3 3 529 7 3 6298 7 5 16 5 0 4 298 2 57 6 QL 45 4 0 3147 0 3 430 1 2 0297 9 4 56 6 0 7 306 4 65 1 F值1 8327 7941 5182 535144 21441 627P值0 1610 0010 2280 0740 0010 001 P 0 01 ComparedtoCTL 4 P 0 01 ComparedtoCHF 4group P 0 05 ComparedtoQH 4 结果 Thechangesofurinaryvolumeindifferentgroupsratsduring4weektreatment 芪苈强心治疗4周后 QH 4组 QM 4组 QL 4组尿量较治疗前显著升高 差异有统计学意义 实时荧光定量PCR检测各组V2 RmRNA变化 ComparisonofrelativemRNAquantitylevelindifferentgroups 结果 经过4周芪苈强心治疗后 QH 4组 QM 4组 QL 4组V2 RmRNA表达显著降低 与CHF 4组相比均有显著性差异 而且QH 4组较QM 4组 QL 4组下降更显著 ComparedtoCTL 4 P 0 01 ComparedtoCHF 4group P 0 05 P 0 01 ComparedtoQH 4 P 0 05 实时荧光定量PCR检测各组AQP 2mRNA变化 ComparisonofrelativemRNAquantitylevelindifferentgroups 结果 芪苈强心治疗4周后 QH 4组 QM 4组 QL 4组显著降低AQP 2mRNA表达 与CHF 4组相比均有显著性差异 而且QH 4组较QM 4组 QL 4组下降更显著 ComparedtoCTL 4 P 0 01 ComparedtoCHF 4group P 0 05 P 0 01 ComparedtoQH 4 P 0 05 治疗4周后各组大鼠肾脏AQP 2蛋白的表达TherenalAQP 2expressionindifferentgroupsafter4weektreatment 结果 29KD 36 45KD 12345 ComparedtoCTL 4 P 0 01 ComparedtoCHF 4group P 0 01 ComparedtoQH 4 P 0 05 注 1为CTL 4组 2为CHF 4组 3 4 5分别为QH 4 QM 4 QL 4组 芪苈强心降低肾脏水通道蛋白2 AQP2 的表达 肾脏水通道蛋白2 AQP2 增加集合管对水的重吸收 对CHF时水潴留起着重要的作用各组大鼠肾脏髓质AQP2免疫荧光表达 假手术组肾脏表达很少 CHF组表达明显增加 芪苈强心组较心衰组表达减少 但速尿组表达增加 QL中剂量组QL小剂量组速尿组 假手术组心衰组QL大剂量组 讨论 本研究发现 QH 1组 QM 1组 QL 1组大鼠随着用药时间的延长 大鼠尿量逐渐增多 说明芪苈强心具有利尿作用 QH 1组 QM 1组 QL 1组大鼠的血浆AVP和肾脏AQP 2表达未发生显著改变 提示芪苈强心可以显著增加CHF大鼠尿量 但是其利尿作用并非直接改变肾脏AQP 2表达所致 在经过4周芪苈强心治疗后 QH 4组 QM 4组 QL 4组大鼠血浆BNP较CHF 4组显著降低 提示经过4周芪苈强心治疗 CHF大鼠心脏功能