常用的电泳液.doc

学习资料收集于网络，仅供参考常用染料、电泳缓冲液、凝胶加样液和杂交液的配制：1.1%溴酚蓝（bromophenol blue）:加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。2.1%二甲苯青FF（xylene cyanole FF）:溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。3.5mg/ml的溴化乙锭（EB，ethidium bromide）：小心称取0.5g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4储存。工作浓度0.5mg/L水溶液。一、DNA电泳1. Tris-乙酸（TAE：Tris/Acetate/EDTA） 浓贮存液/L（50）：2mol/L Tris-碱，1 mol/L 乙酸，50 mmol/L EDTA 方法： 242.2 g Tris-碱，用300mL水加热搅拌溶解后，加57mL冰乙酸，加入100mL 0.5mol/L EDTA（pH8.0），用冰乙酸调pH值至8.0，定容为1L。2. Tris-硼酸（TBE：Tris/Borate/EDTA）浓贮存液/L (5) : 90mmol/L Tris-碱，890mmol/L 硼酸盐，20mmol/L EDTA(pH8.0)方法：54g Tris碱、27.5硼酸、20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)，水定容至1L。使用液：（0.5）：0.045mol/L Tris-磷酸，0.001mol/L EDTA注：进行聚丙烯酰胺凝胶电泳使用的是1TBE，琼脂糖凝胶电泳使0.5TBE，这是因为聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，需加强离子强度，提供稍高一些的电流。3. Tris-磷酸（TPE）浓贮存液/L（10）：0.9mol/L Tris-磷酸、0.02mol/L EDTA方法：108g Tris碱、15.5ml 85%磷酸（1.679g/ml）、40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)， 水定容至1L。使用液（1）：0.09mol/L Tris-磷酸、0.002mol/L EDTA4. Tris-甘氨酸（Tris-甘氨酸缓冲液用于SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。）浓贮存液/L（5）：125mmol/L Tris 、1.25mol/L EDTA、0.5%SDS方法：15.1g Tris碱、9.4甘氨酸（电泳级）（pH8.3）、50ml 10%SDS（电泳级）使用液（1）：25mmol/L Tris 、250mmol/L EDTA、0.1%SDS5.TBS 电泳缓冲液：100ml TBE，0.5ml的10% SDS。6.6上样液：0.25%溴酚蓝（BPB），40%蔗糖，10mmol/L EDTA（pH8.0）。即2.5ml 1%溴酚蓝，2.5ml 1%二甲苯青FF，4g蔗糖，补足水到10ml，4保存。二、RNA电泳1.RNA标准相对分子质量：如28S和18SrRNA以及9S兔-球蛋白mRNA，其RNA大小为6333、2366和710个核苷酸。2.DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水：0.1% DEPC，水，即加1ml DEPC（diethlpyrocarbonate）于1L水中，使DEPC的体积分数为0.1%。在37温浴至少12h，然后在15psi条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺其反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。3.5FGRB（formaldehyde gel-running buffer）：100mmol/L 3-（N-吗啉代）-丙磺酸（MOPS，pH7.0），40mmol/L醋酸钠，5mmol/L EDTA（pH8.0）。即准确称取20.93g MOPS用DEPC处理水溶解，再加入13.3ml的3 mol/L NaAc（pH7.0），10ml的0.5 mol/L EDTA（pH8.0），最后定容至1000ml，过滤灭菌后避光保存（pH7.3）。4.RNA凝胶上样缓冲液：50%甘油、1mmol/L EDTA（pH8.0）、0.25%溴酚蓝、0.25%二甲苯青FF。即2.5ml甘油、10L 0.5 mol/L EDTA（pH8.0），1.25ml 1%溴酚蓝，1.25ml 1%二甲苯青FF，用DEPC处理水定容至5ml，分装后-70保存。5.RNA胶（1%）:1g琼脂糖加62ml DEPC水，加热溶化后冷却至60，再加20ml的5FGRB和17.8ml的37%甲醛，混匀后制胶。6.甲酰胺（去离子）：将10ml甲酰胺和1g离子交换树脂混合，室温搅拌1h后用Whatman滤纸过滤，等分成1ml于-70贮存。7.其他试剂：37%甲醛、80%乙醇（利用DEPC处理水配制）。三、蛋白质电泳1.电泳用标准蛋白Marker2.10%（M/V）过硫酸铵（APS）：1g APS加ddH2O至10ml。使用时尽量现配现用，4存则两周内用完，最多不能超过一个月。-20可存两个月，但一旦解冻后尽快用完。3.TEMED和DTT（dithiothretol）：置于棕色瓶中,存放在4冰箱。蛋白质样品溶解液：SDS 100mg，巯基乙醇0.1 mL，甘油1.0mL，溴酚蓝2mg，Tris-HCL缓冲溶液2mL，加蒸馏水至总体积10mL。4.30%胶母液（Acr-Bis）：30% Acrylamide、0.8%bis，即Acrylamide 30g、bis 0.8g定容至100ml，可在4存放数月。5.分离胶缓冲液（pH8.8）：3mol/L Tris，即Tris 36.3g，加入1mol/L HCl溶液48.0mL，pH8.8，定容100ml。6.浓缩胶缓冲液（pH6.8）：1mol/L Tris，即Tris 12.1g，pH6.7，定容100ml。7.10电极缓冲液：50mmol/L Tris、384mmol/L甘氨酸、1%SDS。即Tris 6g、Glycine28.8g、SDS 10g，调pH至8.3，定容至1L。8.4SDS上样缓冲液：200mmol/L Tris-HCl（pH6.8）、8%SDS、0.04%溴酚蓝、40%甘油、400mmol/L DTT（或8%-巯基乙醇），4保存。9.2SDS上样缓冲液：0.1 mol/L Tis（pH6.8）、4%SDS、0.02%溴酚蓝、20%甘油、200mmol/L DTT（或4%-巯基乙醇），4保存。10.染色液：1g考马斯亮蓝R-250、500ml甲醇、100ml冰醋酸，定容至1L。11.脱色液：50ml甲醇、75ml冰醋酸，加水定容至1L。蛋白电泳试剂及其配制分离胶缓冲溶液：Tris 36.3g，加入1mol/L HCl溶液48.0mL，再加入蒸馏水到100mL，pH8.9。浓缩胶缓冲溶液：Tris 5.98g，加1mol/L HCL溶液48.0mL，加蒸馏水到100mL，pH6.7。凝胶贮液：Acr 30.0g，Bis0.8g，加蒸馏水到100mL。电极缓冲溶液：SDS 1g，Tris