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眼视光专业本科之眼科学基础p236第十三章 眼科实验室检查郑美琴温医 眼视光学院 第三临床教研室导语n 眼科病原生物学n 眼科遗传学n 眼科分子生物学技术n 全身疾病与眼科的关系大纲要求n 掌握： 微生物学检查。眼科微生物标本采取法。n 熟悉： 免疫学检查，生物化学检查。n 了解：血液流变学检查。3主要内容n 微生物学检查n 免疫学检查n 生化检查n 血液学检查一、微生物学检查方法n 标本采集：n 原则：发病初期或使用抗生素之前，采用刮取、涂抹、穿刺等方法，标本采集成功与否直接影响检查结果的阳性率与准确性。结膜组织刮片方法（1）刮去前，先滴表面麻醉药如0.5%丁卡因眼水，对结膜进行表面麻醉。（2）若结膜病变处分泌物多时，可先用灭菌湿棉签将分泌物沾去，或用生理盐水冲洗。（3）翻转眼睑暴露睑结膜。（4）左手固定睑结膜，右手持灭菌刮匙/刀片。（5）根据病变情况和检查需要，选择刮取部位并刮取标本。（6）刮取标本后，滴用抗菌药物滴眼液。角膜组织刮片方法（1）结膜囊滴用表面麻醉药，进行表面麻醉。（2）若病变处分泌物多时，可先用灭菌生理盐水湿棉签将分泌物沾去。（3）用手指将睑裂开大，轻压眼球使其固定，或用开睑器撑开眼睑，以镊子或棉签固定眼球。（4）选角膜溃疡的进行缘或基底部刮取标本。（5）刮取标本后，滴抗菌药物滴眼液。刮片采集小铲刮刀手术刀片标本保存与送检压片检查眼睑及睑缘等处皮肤病变区的刮片方法（1）若病变区处分泌物多时，可先用灭菌生理盐水湿棉签将分泌物沾去，或用生理盐水冲洗，把表面分泌物去除干净。（2）刮刀刮取标本。结膜涂片采集方法（1）先滴用表面麻醉药，对结膜进行表面麻醉。（2）若结膜病变处浮游性分泌物多时，可先用灭菌湿棉签将浮游性分泌物沾去，或用生理盐水冲洗。（3）翻转眼睑暴露睑结膜。（4）左手固定睑结膜，右手持灭菌拭子，用拭子自一端向另端水平方向涂拭穹隆部结膜；旋转拭子的另一面与结膜接触，往返再涂擦1次。（5）采集标本后，滴用抗菌药物滴眼液。泪道标本的涂抹法采集n （1）采集泪囊标本时，用手分开近内眦上下眼睑，压挤泪囊区，使囊内容物流进入结膜囊，再用灭菌拭子采集结膜囊标本。n （2）采集泪小管标本时，先局部行表面麻醉，而后将一拭子放置在泪小管区后方，压迫泪小管皮肤面，用另一拭子擦取泪小点处泪小管反流物。前房液、玻璃体液接种保存流程0.1ML0.2ML前房液、玻璃体液（量尽可能多）加0.05ML标本至无菌肉汤，0.05ML标本至真菌培养管内（注意无菌操作并做好标记，注明标本类型、患者姓名等信息） 剩余标本直接滴于洁净玻片上，适当涂开成1.0-1.5cm直径的近圆形，并做好标记(注明标本类型、患者姓名等信息)，室温下自然干燥 开化验单并打印条形码 将标本及条形码一并送至检验科微生物室（休息时间置于室温保存）适应症1. 怀疑细菌性结膜炎。2怀疑细菌性角膜炎。3怀疑眼睑及睑缘等处皮肤有细菌感染导致的炎症。4怀疑泪道的细菌感染。5内眼手术前结膜囊细菌培养。注意事项（一）1. 用刮匙刮取标本应使刮刀与组织表面垂直，刮取时动作要轻柔准确。2在病变组织的同一部位不要反复刮取。3若需刮取角膜溃疡基底组织时，勿过度向下用力，以防造成角膜穿孔。4尽量在发病初期，使用抗菌药物之前刮取标本，以提高阳性检出率。注意事项（二）5根据细菌种类不同选择固定和染色的方法。6采集标本时，注意无菌操作。7标本量少时易于干燥，应及时固定后立刻送检，送检中应避免污染。8. 刮取标本时，注意观察溃疡面坏死组织性状。一般来说，真菌性溃疡面的坏死组织呈“苔垢”或“牙膏”样，质地疏松，缺少粘性；而细菌性溃疡面的坏死组织呈“胶冻”样，富于粘性。注意事项（三）9采集标本的器械注意消毒处理，应注意无菌操作。10每位患者的标本至少涂两张玻片，以避免漏诊。涂片后立即在玻片一端标上编号。11保证标本新鲜，取材后尽快制片。12涂操作要轻巧，避免挤压以防止损伤细胞。涂片要均匀，厚薄要适度，太厚细胞堆叠，太薄细胞过少，均影响诊断。直接显微镜检查方法n 染色后直接镜检：革兰染色、抗酸染色、吉姆萨染色、K10%OH溶解、棉酚兰、荧光染色、PAS染色、荚膜染色、墨汁等染色后镜检，根据不同需要选择不同的染色方法。n 暗视野显微镜检查革兰染色液革兰染色结果（细菌）革兰染色结果（真菌）PAS染色结果角膜刮片糖原染色发现大量菌丝抗酸染色棉（酚）兰染色暗视野显微镜检查荧光染色后显微镜检查荧光抗体染色的大肠埃希菌 支原体感染的细胞荧光染色结果培养鉴定n 培养基（根据不同目的选择合适的培养基）n 细菌培养多用血琼脂、巧克力琼脂、液体增菌培养基（营养肉汤、血液增菌培养基、厌氧培养基等）n 真菌培养多用血琼脂、沙氏/土豆葡萄糖培养基、柯玛嘉显色培养基（念珠菌）n 病毒多用鸡胚卵黄囊等。血平板上各种不同的细菌29真菌培养基上不同的菌落科玛嘉琼脂平板 TTC沙保弱琼脂其他各种不同的培养基微生物学检查生化鉴定试验：挑取基础培养基上的菌种接种至各种不同的生化反应管中，一定时间后，观察反应结果，并与标准菌株进行比对，明确所检测的微生物种类。血清学反应：根据细菌菌体抗原、鞭毛抗原不同制备血清抗体，利用凝集反应，快速鉴定菌种或亚型。药敏试验：培养阳性标本，进行定性或定量检测该菌对某些特定药物的敏感性。生化鉴定各种辅助试剂微生物学检查n 借助其他方法鉴定微生物虫卵查找明确寄生虫感染免疫学相应抗体检测血清凝集试验细菌血清型鉴定物理法电子显微镜直接观察分子生物学方法分子水平鉴定微生物种类药敏试验病毒的培养与检测n 病毒必须在活细胞内才能增殖，应根据病毒的不同，选用动物接种、鸡胚接种、组织培养等方法进行（组织培养法有器官培养、移植培养、细胞培养），以死亡、发病或病变等作为病毒繁殖的直接观察指标，或以血细胞凝集、抗原测定等作为间接指标。病毒检测方法n 除了利用病毒的致病性定量检测病毒外，还可应用物理方法，如在电子显微镜下计数病毒颗粒，或用紫外分光光度计测定提纯病毒的蛋白和核酸量，这些方法所测得的数据包括了有感染性和无感染性的病毒粒。当然还有血清学的指标（抗体、抗原的检测）检测等。其他病原体检查n 衣原体n 螺旋体n 寄生虫多数利用免疫学检查方法（检测相应的抗原或抗体成分）；找特殊的包涵体；特定部位找虫体或虫卵其他寄生虫微生物检查结果分析注意事项n 采样成功与否直接影响结果（时间、部位、标本量、送检及时与否）n 标本保存于运输的规范性n 实验室操作的规范性n 方法学本身的因素（敏感性、特异性等）n 仪器设备的稳定性等二、免疫学检查细胞免疫功能检测n 淋巴细胞功能检测：T细胞转化试验、B细胞转化试验、玫瑰花环试验等n T细胞亚群分析：利用流式细胞术，直接检测各种淋巴细胞的比率及绝对数，包括T、B、NK等细胞n 皮肤试验：结核菌素试验（OT/PPD）、植物血凝素试验（PHA）流式细胞仪体液免疫功能检测n 免疫球蛋白（IgA、 IgG、 IgM、 IgD、 IgE）测定、补体（C3、C4）测定、抗O、RF、CRPn HLA测定、免疫复合物测定等n 抗风疹病毒抗体、各种肝炎病毒抗体、TP抗体、HIV抗体、弓形虫抗体、衣原体抗体、其他寄生虫抗体检测（包括IgM、IgG）等各种特异性抗体及各种自身抗体测定利用抗原抗体特异性反应特点，检测相应的抗原或抗体，可用比浊法、ELISA法、流式细胞术、分子生物学法等细胞因子检测n IL、INF、TNF、TGF等，多用ELISA法n 各种细胞因子的作用具有网络性的特点，即每种细胞因子可作用于多种细胞；每种细胞可受多种细胞因子的调节；不同细胞因子之间具有相互协同或相互制约的作用，由此构成了复杂的细胞因子免疫调节网络。特殊项目检测n 各种药物浓度检测n 内分泌相关项目检测n 肿瘤标志物检测n 各种激素及代谢产物检测n 输血相关项目检测n 采用化学发光、免疫比浊、放免等方法免疫学检查结果分析注意事项n 考虑方法的敏感性和特异性n 考虑采样的规范性n 多个检查结果的综合分析n 检查结果分析必须与临床症状及体征相结合免疫学检查结果分析注意事项n IgG（唯一能通过胎盘的Ig）与IgM（新近感染）的关系n 抗体效价的动态变化观察n 交叉反应n “网络效应”三、生物化学检查n 肝功能n 肾功能n 心功能n 糖代谢n 血脂n 电解质n 特殊酶及代谢产物测定器官特异性指标n 肝功能（ALT、AST、ALP、GGT、TP、ALB、胆红素等）n 肾功能（BUN、CR、UA、NAG、2-MG、-MG等）n 心功能（CK、CKMB、AST、HBDH、CTN等）代谢相关指标n 脂代谢相关（TG、TC、HDL、LDL、APOA、APOB、LP(a)等）n 糖代谢相关（GLU、GHb、GSP、INS、C肽等）n 蛋白质代谢相关酸碱平衡相关指标n 电解质测定（K、Na、Cl、CA、P、Mg）n 血气分析（PH、PaO2、PaCO2、SaO2、AB、SB、CO2CP、BE、BB）特殊项目检测n 肝纤维化指标检测n 心肌缺血修饰蛋白n 特殊酶类检测n 微量元素检测n 贫血相关项目n 四、常规血液学检查n 血常规检查炎症、血液病、血小板数量n 出凝血项目检查凝血常规、纤溶系统功能检测n 血液流变学检查血粘度、红细胞流变性、血小板功能等检测五、其他检查n 尿液n 脑脊液n 浆膜腔积液n 各种分泌物（眼部、生殖泌尿道、呼吸道等）n 各种穿刺液（玻璃体、房水等）n 粪便检查n 分子生物学检测实验室检查结果需综合分析n 分析前因素（患者准备、生理变化、药物因素、采集过程、标本保存与运输等）n 分析中因素（操作者经验、方法学、仪器性能、实验室条件、试剂质量）n 分析后因素（主动联系临床医护人员、与患者交流，综合分析结果，使检验结果能为临床更好地服务）。临床检验分析过程质量控制检验分析的全过程分析前 分析中 分析后检验申请 标本处理 审核发放患者准备 标本分析 临床解释标本采集 质量控制 投诉建议标本运送 报告结果 信息反馈57饮 食 因 素据报道，一次标准餐后TG增加50%，AST增加20%，BIL、P和GLU增加15%，ALT和K增加10%，ALB、BUN、CA和TC增加5%左右。高脂肪餐饮会使TG大幅度升高，高蛋白饮食会使氨、UA和BUN升高较多。58VC对实验项目测定值的干扰浓度mg/l2.5 5 7.5 15 22.5 30 75 150 2250-10 GLU LDH-20TG-30TC-40-50UA-60-7059青霉素对干化学检测尿蛋白的影响药物剂量 给药前 给药后0.5 1 2 3 4 5 6240万 + - + +240万 + - + + +320万 + - + + +320万 + - - + +480万 + - - - +480万 + - - - - + +6060对血糖的影响n 由于红细胞酵解葡萄糖的作用，标本放置室温下时间越长，影响越大。最好是在半小时之内送到检验科，红细胞和血清分离后（离心处理），可以大大减少影响。文献报道，血糖采血后2 h检测结果比1 h下降8.6%，3 h比1 h下降16.0%。发现APPT延长时如何分析？内源性凝血因子及共同途径：（）延长：主要见于血友病，血中有抗凝物，以及其他疾病如肝病、DIC、大量输入库血。APTT还可用于监测肝素治疗，要注意APTT测定结果必须与肝素治疗范围的血浆浓度呈线性关系，否则不宜使用。一般在肝素治疗期间，APTT维持在正常对照的1.5-3.0倍为宜。心血管疾病临床检验项目：项目 出现/升高时间 达峰时间 恢