自身抗体的检测及其临床意义1.ppt

自身抗体检测及其临床意义 重庆医科大学附一院检验科陈瀑 自身抗体的概念 conceptionofautoantibodies 由各种原因造成的机体B淋巴细胞产生针对自身组织 细胞及其成分的抗体 称为自身抗体 自身抗体可以是生理性的 也可以是病理性的 正常人群中生理性的自身抗体的存在相当普遍 其作用之一就是净化体内衰老及死亡的细胞 1 生理性的自身抗体往往滴度很低2 与相应抗原的亲和力弱 大多为IgM型 受免疫抑制功能控制 含量低 3 一般不造成病理性的损害 1 病理性的自身抗体滴度高 2 与相应抗原的亲和力强 大多为IgG型 体内含量高 3 造成病理性的损害 自身抗体检测的临床意义1 临床疾病诊断 鉴别诊断 疾病标记性抗体或特异性抗体 2 判断疾病的活动性及预后 观察疗效 指导临床治疗 3 进一步研究和阐明自身免疫性疾病的发病机制 国内现状 自身抗体的测定不普遍欠规范对其意义了解尚少缺乏研究 本课主要讲解以下三类自身抗体 本课的重点 抗核抗体谱 ANAS 类风湿因子和抗CCP抗体自身免疫性肝病相关自身抗体 抗核抗体谱 ANAS ANA主要用于诊断风湿病 风湿病是以皮肤 关节 血管及多系统损害为主或伴免疫功能异常的一类疾病 与ANA关系较大的风湿病 结缔组织病 类风湿关节炎RA系统性红斑狼疮SLE硬皮病SD皮肌炎PM DM干燥综合征SS混合性结缔组织病MCTD血管炎AS 骨科 呼吸 肾内 消化 风湿病 神内 皮肤 血液 风湿病的相关学科 急诊 大量误诊病例 风湿病的诊断 临床特征症状 发热 雷诺现象 晨僵等体征 关节肿胀 皮疹 肌无力等辅助检查自身抗体 ANA dsDNA RF AnuA 免疫球蛋白 补体及常规化验影像学等 概述 抗核抗体谱检测 抗核抗体 ANA 概念ANA 指抗细胞核成分 DNA RNA 蛋白质和酶 的抗体 ANA存在一个谱ANA新概念 抗核酸 Nucleicacid 和核蛋白 Nucleoprotein 抗体的总称 对ANA的理解已不再局限于核成分 它指的是抗细胞内所有成分的自身抗体的总称 靶抗原分布 细胞核 细胞核 细胞浆 细胞骨架 细胞分裂周期 ANA分类 根据细胞内靶抗原的理化特性和分布 抗DNA dsDNA ssDNA 抗组蛋白 Histone 抗非组蛋白 抗可溶性核抗原抗体ENA和抗着丝点抗体ACA 抗核仁 Nucleolus ANA在各种结缔组织疾病中的阳性率疾病ANA阳性率系统性红斑狼疮 SLE 活动期95 100 非活动期80 100 药物诱导性红斑狼疮 DLE 100 混合结缔组织病 MCTD 100 类风湿性关节炎 RA 20 40 进行性系统性硬化症 PSS 85 95 多发性肌炎及皮肌炎 PM DM 30 50 干燥综合症 SS 70 80 ANA的检测通过两级实验完成总ANA检测 水平1测定 筛选实验dsDNA 抗ENA抗体 水平2测定 特异性实验对实验结果进一步确认许多抗原不易纯化 且许多抗体确切抗原至今未知 实际上只有一部份的ANA能进行进一步的特异性检测 单独的 水平2测定 将会漏掉某些ANA 故应同时进行 水平1测定 间接免疫荧光法测总ANA 原理 WesternblotHEp 2cellextract 免疫印迹法检测ANA 原理 ANA 均质型 EUROIMMUN 抗核抗体 抗可溶性核抗原 ENA 抗体 抗可溶性核抗原 ENA 抗体 Sm U1RNP SSA SSB Scl 70 Jo 1 rRNP pM 1 PCNA RANA Ku Mi 1 2抗体 DNP抗体等 几种ENA的由来及同义词 Sm 病人名 SmithRNP u1RNP或nRNPNuclearRibonucleoproteinSSA ROSjogren ssyndromeASSB La Ha Sjogren ssyndromeBJo 1 病人JohnScL 70 Scleroderma 抗Sm 是SLE标记抗体 帮助前瞻性和回顾性诊断 对早期 不典型的SLE诊断意义大 经治疗缓解后SLE回顾性诊断 SLE的诊断标准之一 缺点 灵敏度不高 抗u1RNP 在多种结缔组织病中存在 是一种疾病相关性抗体 高效价的抗u1RNP抗体 且无其它特异性的ANA 是诊断混合结缔组织病的重要血清学依据 抗rRNP抗体 抗rRNP抗体与SLE有关 尤其有精神神经症状的SLE阳性率较高 抗SSA和抗SSB 疾病相关性抗体 常见于干燥综合征 Sjogren sSyndrome SS 也见于SLE 两者同时出现与干燥综合征相关性大 有研究发现SSA可造成新生儿狼疮和先天性心脏传导阻滞 抗ScL 70 硬皮病SD的标记抗体 抗Jo 1 PM DM的标记抗体 抗Jo 1阳性的肌炎患者 伴关节炎 技工手 雷诺症 肺间质变等称合成酶抗体综合征 抗组蛋白抗体 有助于药物性狼疮的诊断 抗着丝点抗体 ACA 与雷诺现象和CREST综合征有关 为系统性红斑狼疮 SLE 血清学特异性抗体 SLE的诊断标准之一 SLE患者中阳性率为30 40 左右 抗体滴度的变化与SLE疾病活动程度相关 可用于SLE疾病活动期判断和药物疗效观察 阳性的病人90 以上处在疾病的活动期 抗双链DNA抗体临床意义 抗双链DNA参与SLE发病机理 DNA介导的免疫复合物病 狼疮肾炎所致的血管炎 典型的喋形红斑非SLE和正常人抗ds DNA多为阴性 有时其它结缔组织病患者可为阳性 如SS DIL MCTD 但阳性率低 含量也低 而且此类病人一般是SLE重叠综合征 ANA检测的意义 有助于疾病的诊断 如抗Sm是SLE标记抗体 抗ScL 70是SD的标记抗体 抗Jo 1是PM DM的标记抗体 抗双链DNA抗体是SLE特异性抗体 观察疾病活动度和治疗反应研究发病机理 类风湿因子 RheumatoidFactor 抗人或动物的IgG的FC片段抗体 其本身是免疫球蛋白 因此 RF有IgG IgM IgA型等 类风湿因子如何评价类风湿因子 是诊断RA的标准之一 不是唯一标准 并非RA特有作为血清阴性脊柱关节病区分标准正常人2 阳性 老年人可达5 阳性RF与其他蛋白 半抗原有交叉反应多种结缔组织病 SLE SD SS PM DM 感染疾病 SBE TB hepatitis 肝硬化 弥漫性肺纤维化 结节病等均可阳性病后半年才产生 有关节外表现者 滴度高 持续高滴度RF预示疾病严重 预后差 多种自身抗体联合检测提高RA诊断准确性 抗核周因子 APF 抗角蛋白抗体 AKA 抗Sa抗体抗RA33 36抗体抗环瓜氨酸多肽 CCP 抗体 对RA诊断高度敏感和特异 对RA的早期诊断和预后评估都很有意义 抗环瓜氨酸多肽 CCP 抗体 1998年证实抗filaggrin相关抗体识别的主要抗原决定簇成分是瓜氨酸2000年合成环瓜氨酸肽 CCP 并将抗CCP抗体用于RA检测ELISA法检测对RA诊断高度敏感和特异阳性者骨破坏较阴性者严重对RA的早期诊断和预后评估都很有意义 类风湿关节炎的自身抗体 名称 敏感性 特异性 类风湿因子RA33 36抗体Sa抗体抗角蛋白抗体抗核周因子抗CCP抗体抗CB10抗体抗BiP抗体 50 7025 45373338 6260 707270 8693 678 9787 9270 909670 8892 自身抗体与风湿病 系统性红斑狼疮的自身抗体 抗体敏感性 特异性 抗核抗体 ANA dsDNA抗体抗Sm抗体膜DNA抗体核小体抗体U1RNP抗体SS A抗体SS B抗体抗心磷脂抗体类风湿因子PCNA抗体组蛋白抗体核蛋白抗体 809599949287 9470407530955050 99702578855025 351520 4025530 8058 自身抗体与风湿病 其他风湿病的自身抗体 硬皮病 PSS 皮肌炎 多肌炎 DM PM 混合性结缔组织病 MCTD Scl 70抗体抗着丝点抗体 ACA 抗核抗体 ANA PM 1抗体Jo 1抗体抗核抗体 ANA U1RNP抗体 70kd 抗核抗体 ANA 自身抗体与风湿病 自身免疫性肝病与自身抗体 主要包括三种与自身免疫密切相关的 以肝 胆损伤为主的疾病 特殊类型的肝病 其诊断和治疗完全不同于一般慢性病毒性肝炎 自身免疫性肝炎 AIH autoimmunehepatitis 原发性胆汁性肝硬化 PBC primarybiliarycirrhosis 原发性硬化性胆管炎 PSC primarysclerosingcholangitis 自身免疫性肝病发病情况 欧美 一般认为 AILD好发于欧美白人 AIH 西欧和北美患病率0 1 1 9 10万人占所有慢性肝炎的20 左右 PBC 西方国家患病率为10 20 10万人 PSC 欧美地区患病率至少为2 7 10万人其中70 左右合并有溃疡性结肠炎 遗传背景 主要组织相容性复合物 MHC 的易感基因与HLADR2 DR3 DR4 DRw8 DR8基因型相关 自身免疫性肝病发病情况 日本 一般认为AILD在亚洲黄种人中患病率较低 情况并非如 日本厚生省难治性肝病调查组于1990年至1996年 全国性临床流行病学调查 研究结果显示 日本人中AIH并不少见 占慢性肝炎的5 PBC在日本亦不是少见病 至1997年全国累积病例报道达6000例 发病率为5 16 10万 AILD近年发病有上升趋势 自身免疫性肝病发病情况 中国 2000年前 研究资料少见 有关AILD的基础研究 流行病学研究及临床研究报道少见 被认为是一种少见病 可能原因 病毒性肝炎发病率占有绝对高的比率慢性乙肝2000万 2002年底 AILD诊断标准中的重要因素 血清自身抗体谱检测 开展的很不普及 严重影响诊断 治疗 自身免疫性肝病 发病上升趋势 在中国并不少见 病例报告 临床病理讨论 相关自身抗体阳性 临床高度重视 消化科 风湿免疫科 感染科实验室 检验 病理 自身免疫性肝病发病情况 中国 1995 2004中国报告病例AIH 589例PBC 1152例01年以后报告占98 AILD诊断中最重要的一点 要想到此种疾病的存在 目前运用较多的自身抗体 ANASMA 抗平滑肌抗体 抗线粒体抗体 AMA M1 M9型抗LKM1 抗肝肾微粒体抗体1 抗可溶性肝抗原抗体 抗SLA抗体 抗肝细胞胞浆抗原1型抗体 抗LC1抗体 AIH分为三型 型AIH 即经典的AIH 最常见 约占80 可检出ANA ASMA 型AIH 少见 儿童多见 仅抗 LKM1阳性 而ANA及SMA均为阴性 型AIH 仅见抗可溶性肝细胞浆抗原 SLA 自身免疫性肝炎AIH的自身抗体谱 即经典的AIH 最常见 约占80 可检出ANA ASMA 抗平滑肌抗体 ANA不具有诊断特异性 可见于AIH 也可见于多种CTDANA常与ASMA同时出现 且滴度高时 表明AIH的可能性大 型AIH 抗平滑肌抗体 ASMA SMA 临床意义 见于多种肝脏疾病及非肝脏疾病 无疾病诊断特异性 对I型AIH诊断有重要意义 高滴度的SMA对AIH诊断敏感性相当高 至少90 以F 肌动蛋白为靶抗原的SMA为AIH特异性抗体 在AIH中阳性率高达97 诊断敏感性至少90 型AIH 抗肝 肾微粒体抗体 抗LKM1抗体 anti liver kindreymicrosomaltype1antihodies 型AIH 少见 儿童多见 抗 LKM1 抗肝肾微粒体抗体1 阳性 抗LC1阳性 与疾病活动性具有相关性 两者常同时阳性而ANA及SMA均为阴性 患者中约2 10 抗 LKM1阳性 抗肝细胞胞浆抗原1型抗体 抗LC1抗体 anti livertytosolantigentype1antibodies 型AIH 仅见抗可溶性肝细胞抗体 SLA 约11 25 在其它肝脏疾病或非肝脏疾病中为阴性 自身免疫性肝炎 AIH 诊断标准 临床诊断主要根据 长期进行性肝炎 转氨酶 血清碱性磷酸酶升高 高丙球蛋白血症 自身抗体检测阳性 肝活检为慢性活动性肝炎病理改变 各种肝炎病毒学指标均阴性 应排除药物诱导性 酒精性或代谢性肝病 主要累及女性 所有AIH病例的75 应用免疫抑制剂可缓解病情 原发性胆汁性肝硬化的自身抗体谱 抗线粒体抗体 AMA AMA M2 M4 M8 M9 抗板层素抗体 抗核点抗体 抗着丝点抗体 抗GP210抗体 抗胃壁细胞抗体 是以自身免疫介导的肝内胆管损伤 以后呈肝纤维化 最终导致肝功能衰竭为特征的一类病因不明的自身免疫性肝脏疾病 抗线粒体抗体 AMA 1965年Walker应用IIF法发现PBC血清中存在AMA AMA检查已成为PBC诊断的重要检查项目 PBC阳性率 90 80年代后期研究 AMA存在若干亚型 M1 M9 近年与PBC相关AMA亚型抗体检测应用于临床诊断 M2 M4 M8 M9 AMA M2被认为是PBC敏感 特异的诊断标志抗体 AMA M2 临床意义 PBC特异 敏感的诊断抗体 阳性率 90 AMA滴度与