DNA的粗提取和鉴定.ppt

专题5DNA和蛋白质技术 陇县第二高级中学郑杜娟 人教版生物选修一 课题1DNA的粗提取与鉴定 基础知识 提取DNA的基本思路 利用DNA与蛋白质等在物理和化学性质方面的差异 提取DNA 去除其他成分 1 不同浓度NaCl中DNA溶解度不同 2 DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同 DNA不溶于酒精 细胞中某些蛋白质则溶于酒精 3 DNA和蛋白质对酶耐受性不同 酶的专一性 蛋白酶水解蛋白质 但是对DNA没有影响 4 DNA和蛋白质对高温耐受性不同 蛋白质 DNA热稳定性不同 大多数蛋白质不能忍受60 80 高温 而DNA在80 以上才会变性 5 DNA和蛋白质对洗涤剂耐受性不同 洗涤剂能够瓦解细胞膜 但对DNA没有影响 DNA的粗提取实验原理 案例一 以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取 1 实验原理 实验案例 1 不同浓度NaCl中DNA溶解度不同 2 DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同 DNA不溶于酒精 细胞中某些蛋白质则溶于酒精 2 实验材料 动物 提醒 人和哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核 也没有DNA 不适于作为DNA提取的材料 但却是提取血红蛋白的理想材料 鸡血细胞液的优点 鸡血红细胞 白细胞中都有细胞核 含大量的DNA 既经济又易取 植物 洋葱 新鲜菜花 蒜黄 菠菜等 6 3 方法与过程 1 制鸡血细胞液 500mL烧杯中 玻棒搅拌 离心或静置沉淀 离心或静置后去掉上清液 血浆 血细胞 提取细胞核物质 溶解核内DNA 析出DNA DNA黏稠物再溶解 提取较纯净的DNA DNA的鉴定 滤取DNA黏稠物 过滤含DNA的NaCl溶液 2 实验方法步骤 在上述溶液中缓缓加入蒸馏水 并沿一个方向轻轻搅拌 出现丝状物 当丝状物不在增加时 停止加水 此时NaCl溶液的浓度相当于0 14mol L 用多层纱布过滤 含DNA的粘稠物留在纱布上 用两层纱布过滤 滤液中含有DNA 所得的滤液 体积分数为95 的冷却酒精50mL 用玻棒沿一个方向轻缓搅拌 溶液中 析出 出现乳白色丝状物 用玻棒将丝状物卷起 利用细胞吸水破裂 细胞核内物质释放出来 用纱布过滤取其滤液 在滤液中加2mol L的NaCl溶液并搅拌 使染色质中DNA与蛋白质分离 DNA充分溶解 过滤 除杂质 在烧杯中用2mol L的NaCl溶液溶解DNA DNA与二苯胺试剂反应使溶液呈现蓝色 鉴定 均加入 4mL二苯胺试剂 2mol LNaCl溶液5mL 自变量 你能采用其他方法对DNA进行鉴定吗 取少许丝状物 置玻片中央 加1滴甲基绿溶液 丝状物变成绿色 注意 鉴定所用的试剂是二苯胺或甲基绿 用二苯胺须加热 用甲基绿不用水浴加热 注意事项 制备鸡血细胞液时 要在取鸡血的同时加入柠檬酸钠 静置后上层是血清 下层为所需要的血细胞 整个实验中加入 两次蒸馏水 三次NaCl溶液 一次酒精 两次加蒸馏水的目的不同 一是涨破细胞 二是稀释溶液 酒精最好用95 的冷酒精 加蒸馏水或加入酒精用玻棒搅拌时 动作要轻缓且朝一个方向 保证DNA分子的完整性 使用时注意玻璃棒不要碰到烧杯底 鉴定DNA时需沸水浴加热 二苯胺试剂要现配现用 否则会影响鉴定的效果 二苯胺是一种有毒性的试剂 使用时注意不要让药液接触到皮肤或身体的其他部位 盛放鸡血细胞的容器最好是塑料容器 鸡血细胞破碎后释放的DNA 容易被玻璃容器吸附 造成提取过程中DNA的损失 小结 练习 1 下列图示中能反映DNA溶解度与NaCI溶液浓度之间关系的是 2 在DNA的粗提取和鉴定的实验中 提取鸡血细胞的核物质和析出含DNA的粘稠物的操作过程中均用到蒸馏水 其作用在于 A 前者用来溶解血细胞 后者用来溶解DNAB 前者使血细胞吸水破裂 后者用来稀释NaCl溶液C 前者用来分离细胞核与细胞质 后者用来提取DNAD 前者使DNA从核中分离出来 后者使DNA析出 C B 3 下图为 DNA粗提取和鉴定 实验的相关操作 这些操作目的正确的是 A 是洗涤血细胞 去除血细胞表面的杂质B 是溶解DNA 去除不溶于酒精的杂质C 是溶解DNA 去除