2005年北京地区神经内科学术年会论文汇编.doc

2005年北京地区神经内科学术年会论文汇编、72小时睡眠剥夺小鼠海马组织的氛化应激反应北京 友 谊 医 院 神 经 内科瞿蕾王得新背景 和 目的研究 表 明 睡眠剥夺是疾病发生的危险因素之一，但其致病的生理生化机制目前仍不清楚。有一种理论说在正常的睡眠过程中可以清除清醒时产生的氧自由基，也就是说睡眠剥夺可以祠肠弓脑的抗氧化能力。大量文献已经证实了睡眠剥夺导致氧化应激的观点，而且发现睡眠剥夺对脑组织不同部位的影响并4陶一的，其中海马、下丘脑、脑干等部位是比较容易招受氧化应激影响的部位。另外，很多研究均表明多种能引起氧化应激的因素如缺氧、氧自由基、血红素、重金属离子、内毒素和炎症因子均可使血红素氧合酶HO-1表达卜调，其广泛存在于各种细胞的微粒体内，具有细胞保护作用，在机体抗氧化过程中发挥着重要的作用，故HO-1又称为应激蛋白。HO-1分子量32KD,热休克可使其表达增加，属热休克蛋白家族，又称HS?-32。有研究表明睡眠剥夺可以使同属于热休克蛋白家族的HSP60表达水平上调，但有关睡眠剥夺与HO-1之间的相关性未见文献报道。本研 究 的 目的是:(1)通过检测海马部位丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)两个指标，证实氧化应激的存在: (2)通过半定量PCR的方法了解睡眠剥夺72小时后血红素氧合酶HO-1的表达。材 料 和 方 法选用 雄 性 ICR小鼠，体重35g士，随机分为3组，:小平台睡眠剥夺组;大平台对照组;笼养对照组。采用多平台水环境法(flower pot)制作小鼠的睡眠剥夺动物模型，大平台组作为应激对照组，经过72小时睡眠剥夺后快速断头取脑，分离出海马，其中每组8只制成10%的海马组织匀浆，-30保存待测。然后按丙二醛、超氧化物歧化酶、组织蛋白定量试剂盒的说明书进行检铡，检测结果经计算得出SOD的活性值以及MDA的含量。另外取睡眠剥夺组与笼养组各5只小鼠采用TR工zol试剂盒提取海马组织中的总RNA,选用p-action作为内参照，采用一步法RT-PCR试剂盒进行HO-1mRNA的半定量PCR检测，HO-1mRNA表达以HO-1的相对表达量即HO-1/ D - action计算。实验 结 果单纯 睡 眠 剥夺组与笼养对照组及大平台应激对照组相比SOD的活性均显著下降，单纯剥夺组与其它两组相比MDA含量均无显著性差异。HO-IudNA在笼养组低水平表达，72小时睡眠剥夺后表达量显著增高。讨 论本研 究 发 现72小时睡眠剥夺后小鼠海马部位SOD的活性降低，HO-1表达水平显著增高。SOD活性的降低与Ramanathan-I报道大鼠睡眠剥夺后在海马和脑干内Cu/Zn-SOD的活性显著下降结果一致，其原因可能是睡眠剥夺后活性氧簇水平的增高所致。MDA含量在睡眠剥夺前后无显著性改变可能与睡眠剥夺的时间短有关。本研究结果证实了72小时睡眠剥夺后海马部位氧化应激的存在。据笔 者 所 知，本研究是第一次讨论研究睡眠剥夺后HO-1的表达。HO-1是机体降解血红素产生内源性一氧化碳(CO)及胆色素的一种限速酶。有研究表明，HO-1/CO在中枢神经系统起着重要的生理和病理作用，如:参与突触可塑性(长时程增强，突触传递)、运动通路的调节、以及大脑血流的局部调节、神经内分泌的调节、学习和记忆等过程的调节。另有研究表明，HO-1参与神经系统的多种疾病如老年性痴呆、帕金森综合征以及癫痛的发生。根据报道，无论是失眠还是认知损害在老年人中的发生率