固体曲糖化酶活力的测定.doc

固体曲糖化酶活力的测定l 实验原理：1. 固体曲在酿造过程中将原料淀粉转化为可发酵糖类的重要酶源。其中其主要作用的是糖化酶，它可将淀粉水解为葡萄糖供微生物 发酵，生成酒精及其它各种相应的白酒成分。固体曲质量好，糖化活力高，原料淀粉利用率高，出酒率也高。故糖化酶活力的高低是衡量固体曲质量的重要指标。 2. 固体曲糖化酶活力定义为：1g绝干固体曲，在30、PH=4.6条件下，1h内水解可溶性淀粉为葡萄糖的毫克数。其测定的方法可用修正的蓝-艾农法.l 实验试剂：1. 斐林试剂2. 0.1%葡萄糖标准溶液（准确称取1g无水葡萄糖(预先烘干)，用水溶解，加5ml浓盐酸，用水稀释至1000ml3. 乙酸-乙酸钠缓冲溶液（PH=4.6）4. 0.01mol/L NaOH溶液 称取4g NaOH ,用水溶解并稀释至1000ml5. 2%可溶性淀粉溶液 准确称取2g可溶性淀粉（预先于100105烘干），加少量水调匀，倾入80ml沸水中，继续煮沸至透明，冷却后用水稀释至100ml.l 实验步骤：1. 5%固体曲沁出液的提取 称取5.6702g固体曲（以绝干曲计），置于250ml烧杯中，加入90ml水和10ml,PH=4.6的缓冲溶液，摇匀，于30水浴中保温沁取1h，每隔15min搅拌一次，有脱脂棉过滤，滤液为5%固体曲沁出液。2. 固体曲糖化液的制备 吸取25ml 2%可溶性淀粉溶液，置于50ml容量瓶中，于30水浴中预热10min.准确加入5ml 5%固体曲沁出液，摇匀，立即计时。于30水浴中准确保温1h。迅速加入15ml 0.1mol/LNaOH溶液，终止酶解反应。冷却至室温，用水定容至刻度。同时制作一空白液：准确吸取25ml 2%可溶性淀粉溶液，置于50ml 容量瓶中，先加入15ml 0.1mol/LNaOH 溶液，然后准确加入5ml空白液，用水定容至刻度。3. 测定 吸取斐林甲液、乙液各5ml，置于锥形瓶中，准确加入5ml空白液，并用滴定管预先加入适量的0.1%葡萄糖标准溶液（使后滴定时消耗0.1%葡萄糖标液在1ml以内，且在1min时间以内），摇匀，于电炉上加热至沸腾，立即用0.1%葡萄糖标准溶液滴定至蓝色消失，此次滴定操作需在1min内完成。记录所消耗0.1%葡萄糖标准溶液的体积。 准确吸取5ml糖化液代替5ml空白液，其余操作同上。l 计算公式： 糖化酶活力=c(V0-V) 式中V0-5ml空白液消耗0.1%标准葡萄糖溶液的体积，mlV-5ml糖化液消耗0.1%标准葡萄糖溶液的体积，ml-5ml糖化液换算成50ml糖化液中的糖量，g-5ml沁出液换算成100ml沁出液的糖量，gm-绝干固体曲样品质量，50gl 实验记录： 糖化酶活力的测定空白1空白2空白3试样1试样2试样3绝干固体曲质量（g）5葡萄糖浓度(mol/L)0.05555预加葡萄糖体积(ml)7.008.009.007.008.009.00消耗葡萄糖标样的体积(ml)0.870.610.580.680.590.47l 结果计算：糖化酶活力1=0.005555（7.87-7.68）10糖化酶活力2=0.005555（8.61-8.59）糖化