大肠菌群检测方法.doc

厦门富竑工贸有限公司大肠菌群测定方法 文件编号：起草人 年 月 日颁发部门：品管部审核人 年 月 日生效日期： 年 月 日批准人 年 月 日分发部门：各部门起草原因：新订 修订 说明：一.检验范围本标准适用于出口食品及其原料。二.设备和材料1.超净工作台：琼脂平板在工作台上暴露15min,每平板不得超过15个菌落。2.恒温培养箱：361。3.恒温水浴箱：451。4.吸管：1mL、10mL，具0.1mL刻度。5.稀释瓶：300 mL三角锥形瓶。6.显微镜。7.试管：150x150，18 x 180mm三.培养基和试剂1.月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）2.煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）3.8.5生理盐水四.样品制备（以上述平板菌落制备的样品为测定大肠菌群的样品匀液）五.大肠菌群的测定1.大肠菌群MPN值的测定（1） 对每个样品，选择适宜的三个连续稀释度的样品稀释液。1：10稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管10ml；1：100和1：1000稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管1ml。（2） 将接种管置于361培养482h。（3） 观察试管的产气情况：检查导管内是否有气泡产生，如所有LST肉汤管均未产气，则可报告为大肠菌群阴性；如有产气者，则进一步作证实试验。2. 大肠菌群的证实试验（1） 将所有产气管用直径为3mm的接种环移种到煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管中。（2） 置BGLB肉汤管于361培养482h。（3） 记录所有BGLB肉汤管的产气管数。（4） 结果报告：按BGLB肉汤管产气管数，查MPN表报告每克（毫升）样品大肠菌群的MPN值。六.MPN检索表阳性管数MPN100m（g）阳性管数MPN100m（g）1ml（g）3 0.1ml（g）3 0.01ml（g）31ml（g）3 0.1ml（g）3 0.01ml（g）3 0 0 00 0 10 0 20 0 30 1 00 1 10 1 20 1 30 2 00 2 10 2 20 2 30 3 00 3 10 3 20 3 31 0 01 0 11 0 21 0 31 1 01 1 11 1 21 1 31 2 01 2 11 2 21 2 31 3 01 3 11 3 21 3 3303060903061921206293120160941301601903672110150731101501901101502002401602002402902 0 02 0 12 0 22 0 32 1 02 1 12 1 22 1 32 2 02 2 12 2 22 2 32 3 02 3 12 3 22 3 33 0 03 0 13 0 23 0 33 1 03 1 13 1 23 1 33 2 03 2 13 2 23 2 33 3 03 3 13 3 23 3 39114020026015020027034021028035042029036044053023039064095043075012001600930150021002900240046001100011000注：1.本表采用3个稀释度1ml（g），0.1 ml（g），0.01 ml（g），每稀释度3管。2.表内所列检样量如改用10 ml（g），1ml（g），0.1ml