贵州省猪弓形虫血清学调查.doc

贵州省猪弓形虫血清学调查洪尼宁，钱德兴，张登祥，华莹，李涛，冉隆仲，田海蓉，刘霞，虞天德 （贵州省动物疫病预防控制中心，贵阳550008）摘要：为全面了解贵州省猪弓形虫感染情况，对采自9个市（州、地）261个养猪场（户）的2906份血清用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测猪弓形虫抗体，总体阳性率为65.83，变化范围为27.8885.42%。采集65份猪血清做ELISA和间接血凝试验（IHA）比较测定，两种方法总体符合率为58.46%。用IHA方法补充检测177份猪血清，弓形虫抗体阳性率为27.68%。血清学调查表明猪弓形虫抗体阳性率与国内部分省（市）报道相符。关键词：猪；弓形虫；血清学调查；阳性率SEROLOGICAL SURVEY OF PORCINE TOXOPLASMA INFECTIONIN GUIZHOU PROVINCEHONG Ni-ning, QIAN De-xing, ZHANG Deng-xiang, HUA Ying, LI Tao, RAN Long-zhong, TIAN Hai-rong, LIU Xia, YU Tian-de(Guizhou Provincial Center for Animal Disease Prevention and Control, Guiyang 550008, China)Abstract: To monitor the present status of porcine Toxoplasma infection in Guizhou province, a serologic survey was conducted. In this survey, 2906 swine sera were collected from 261 farms in 9 regions and tested for Toxoplasma antibody by using ELISA kit. The result showed that 65.83 % of the sera were positive with a fluctuation of 27.8885.42%. 65 swine sera from a farm were examined comparatively by using ELISA and IHA (indirect hemagglutination assay) kits, which showed that the coincidence rate of the two methods was 58.46%. Additional 177 swine sera were tested with IHA and the positive rate was 27.68%. Analysis of the positive rate among several provinces or municipalities indicated that the seroprevalence of Toxoplasma antibody was coincident.Key words: swine; Toxoplasma; serologic survey; positive rate作者简介：洪尼宁（1968-），男，湖南人，博士，微生物学专业。E-mail: ，电话传真形虫病(Toxoplasmosis)是由刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)引起的、包括人在内的350多种脊椎动物易感的寄生虫病1,1908年Nicolle和Manceaux在北非鼠体、Splendore在巴西兔体中分别独立发现该寄生虫2。T. gondii是目前世界范围内视网膜感染的主要原因3，欧洲孕妇血清学调查证实30%63%的弓形虫感染和食用猪肉有关4。近二十年来世界各地陆续发现和报告了大量临床及隐性感染的猪弓形虫病5，国内部分省（市）猪弓形虫抗体间接血凝试验（IHA）检测阳性率为29.70-66.7%6-10，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测阳性率达60.42%11。为全面了解贵州省猪弓形虫感染的情况，我们对省内9个市（州、地）的养猪场（户）的猪进行了弓形虫血清学调查，同时对部分养猪场周边的牛、羊和鸡也进行了调查。1 材料与方法 1.1 血清及诊断试剂和仪器 按常规方法采血、分离血清，-20储存。动物弓形虫IgG抗体酶联免疫检测试剂盒，海泰生物制药有限公司生产，光吸收值（A）采用SUNRISE酶标仪（奥地利TECAN）获取。弓形虫冻干致敏红细胞抗原及阳性、阴性血清，购自兰州兽医研究所。1.2 检测方法 按相应试剂盒说明书进行。1.3 结果判断 ELISA检测当阳性对照A值平均值0.50，阴性对照A值平均值0.10，临界对照A值平均值介于0.120.35时实验成立。样品A值临界对照A值平均值1.1判为阳性，样品A值临界对照A值平均值0.9则判为阴性。IHA检测滴度1:64判为阳性。1.4 数据分析 2检验使用下载（/soft/24016.html）软件卡方检验计算器的四格表格式，将发生数（阳性数）和未发生数（阴性数）输入相应位置，即可得2值及p范围。2 结 果2.1 不同地区猪血清抗体ELISA检测结果 9个市（州、地）共采集血清2906份，ELISA检测猪弓形虫抗体阳性血清1913份，总体抗体阳性率为65.83%。铜仁地区、黔南州、遵义市和毕节地区高于全省总体水平（2值分别为63.95、44.73、 33.65和14.00，p值均小于0.01），贵阳市、黔西南州低于全省总体水平（2值分别为7.76、249.75，p值都小于0.01），安顺市、六盘水市、黔东南州与全省总体水平一致（2值分别为0.13、0.01、0.76，p值都大于0.05）（表1）。表1贵州省9个市（州、地）猪血清弓形虫抗体ELISA检测结果Table 1 Test of swine sera from 9 regions in Guizhou for Toxoplasma antibody with ELISA 场（户）数样本数阳性数（百分率）疑似数（百分率）阴性数（百分率）贵阳市30300168（56.00）22（7.33）110（36.67）遵义市42420341（81.19）6（1.43）73（17.38）安顺市18180112（62.22）13（7.22）55（30.56）六盘水市1212483（66.94）2（1.61）39（31.45）黔东南州51490320（65.31）8（1.63）162（33.06）黔南州33343293（85.42）2（0.58）48（13.99）黔西南州24495138（27.88）35（7.07）322（65.05）铜仁地区30314266（84.71）21（6.69）27（8.60）毕节地区24240192（80.00）0（0.00）48（20.00）合计26129061913（65.83）109（3.75）884（30.42）2.2 猪弓形虫抗体ELISA和IHA比较测定 选取某发生过不明原因流产的猪场，按猪群结构采集血清做ELISA和IHA比较测定 （表2），猪弓形虫抗体阳性率分别为83.07%（54/65）和44.62%（29/65）（2=20.83， p0.01），两种方法总体符合率为58.46%（28+10/65）。表2 猪血清样品弓形虫抗体ELISA和IHA比较测定Table 2 A comparative examination of swine sera for antibodyto Toxoplasma with ELISA and IHA 猪样本数ELISAIHA阳性数阴性数阳性数阴性数种公猪1616097种母猪25250151030日龄以下仔猪6422430-90日龄仔猪102801090日龄以上仔猪87135合计6554112936符合数28102810非符合数2611262.3 畜禽弓形虫抗体IHA检测 IHA补充检测部分畜禽血清表明：猪弓形虫抗体阳性率为27.68%，牛、羊弓形虫抗体阳性率分别为15.38%和18.78%，鸡抗体阳性率为2.17%（表3）。表3畜禽弓形虫抗体水平IHA检测Table 3 Detection of animal sera for Toxoplasma antibody with IHA 畜禽样本数IHA阳性数（百分率）阴性数（百分率）猪17749（27.68）128（72.32）牛13020（15.38）110（84.62）羊16531（18.78）134（81.22）鸡2305（2.17）225（97.83） 3 讨论3.1 省内猪弓形虫抗体阳性率与部分国内报道相符 本次猪弓形虫血清学调查是在全省所有县（市）进行的，猪群整体弓形虫抗体ELISA检测阳性率为65.83%，与重庆17个区县总体阳性率60. 42 %11相比差异不显著（2=0.19， p0.05）。考虑到国内很多省（市）猪弓形虫血清学调查采用IHA方法，我们做了ELISA和IHA的比较测定，初步试验表明两种方法的符合率较低，不便于比较各地阳性率异同。采用IHA补充检测部分畜禽血清，猪弓形虫抗体阳性率为27.68%（49/177），与1984年28.08%（469/1670）12、1995年30.94%（845/2731）13的调查结果吻合，也与部分省（市）的报道相符6-10。3.2 不同日龄阶段猪弓形虫抗体情况不同 对一个猪场采样检测显示：种猪阳性率较高（ELISA，100%；IHA，58.54%），30日龄以下仔猪部分保有母源抗体（6头仔猪ELISA检出4头，IHA检出2头），30至90日龄仔猪抗体检出减少（10头仔猪ELISA检出两份，IHA未检出），90日龄以上仔猪检出增高（8头仔猪ELISA检出7份，IHA检出3份）（表2）。考虑到不同猪场种猪来源、饲养管理等都不相同，需要进一步调查才能摸清弓形虫抗体的变化规律。3.3 弓形虫病防控 省内猪弓形虫抗体阳性率较高，牛、羊存在一定程度的抗体阳性率，鸡抗体阳性率较低（表3），这些可能与自然生态环境和饲养方式有关：一方面，我省冬无严寒、夏无酷暑的气候条件总体上适宜于弓形虫生长、发育；另一方面，不同畜禽养殖场（户）在场地选择、人力物力投入、圈舍卫生、安全隔离、饲料储备及加工等方面的条件各不相同。荷兰Kijlstra A研究组报道室内水泥地圈养及改善卫生条件能显著降低感染，而室外活动及室内草垫圈养的动物友好式饲养模式存在弓形虫感染增多的风险14。因此，控制畜禽弓形虫病流行除了需要治疗或淘汰阳性及发病畜禽外，还需从改善饲养条件、隔离不同畜禽圈舍等多方面采取综合预防措施。致谢 9个市（州、地）动物疫病预防控制中心及部分猪场参与采样或检测，在此深表谢忱！参考文献1 Dubey, JP, Beattie, CP. 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