浙科版选修1 实验2 分离以尿素为氮源的微生物 课件（24张）.pptx

第一部分微生物的利用 实验2分离以尿素为氮源的微生物 学习目标 1 使用专一的培养基 含有尿素 分离专一的细菌 有脲酶的细菌 2 利用指示剂颜色的变化检知 脲酶 所催化的反应 新课导入 尿素是一种重要的农业氮肥 分子式为h2nconh2 不能直接被农作物吸收 土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用 今天我们来学习如何分离以尿素为氮源的微生物 微生物的代谢 同化作用 生物体从外界获取营养物质 转化为自身组成物质的过程 异化作用 生物体自身物质分解 放出能量 排出废物的过程 微生物的代谢类型是配制培养基及培养的基础 1 同化作用类型 自养型 直接利用环境中的无机物合成自身所需要的有机物 如进行光合作用的绿色植物 蓝细菌 硝化细菌 化能合成作用 异养型 直接利用环境中的有机物合成自身所需要的有机物 如各种动物 大多数细菌等 2 异化作用类型 有氧呼吸型 需氧型 c6h12o6 6o2 6h2o 6co2 12h2o 能量无氧呼吸型 厌氧型 c6h12o6 2c2h5oh 2co2 能量c6h12o6 2c3h6o3 能量 实验原理 尿素在被脲酶催化分解前是中性的 由于尿素在脲酶的催化下分解产生了nh3 溶液会呈碱性 本实验中 酚红作为酸碱指示剂被添加到了培养基中 其变色范围是ph6 4 8 2 在中性情况下呈黄色 碱性情况下呈红色 尿素nh3中性碱性酚红颜色 黄色红色 细菌 思考讨论 一 哪些土壤中含有这种以尿素为氮源的微生物多 二 此实验用到的选择培养基必需含有哪些物质 三 可用什么指标认定不同土壤中选择出的微生物对尿素分解能力的高低 没硬化 腐殖质丰富的土壤 碳源 尿素 无机盐 水 酚红 培养基红色的深浅 五 用稀释涂布平板法计数时 菌落数在30 300 20以内 计数 重复性原则 对照原则 做一系列浓度梯度实验 探究合适的稀释度 六 实验设计要遵循的原则 四 统计微生物的数量可用哪些方法 稀释涂布平板法 显微镜直接记数法 制备空白平板 1 制备细菌悬液 2 涂布法分离细菌 3 观察菌落数 4 实验操作 制备空白平板 1 取2个三角瓶 分别装入已灭菌的全营养lb固体培养基和尿素固体培养基 放在超净工作台上 冷却至60 左右时 在酒精灯旁把上述两种培养基分别倒至2个培养皿中 做两组 共4个空白平板 轻轻摇匀 平放至凝固 制备细菌悬液 2 在无菌条件下 在将1g土样加到装有99ml无菌水的三角瓶中 振荡10min 即成10 2土壤稀释液 并依次制备出10 3 10 7稀释液 例如 若想制备10 6的稀释液 可取0 5ml10 5的稀释液 取样时 尽量只取悬液 倒入有4 5ml无菌水的有盖试管中 摇匀 放在试管架上 1个99ml无菌水2个4 5ml无菌水 得10 210 3 10 4的菌悬液 1g土壤 涂布法分离细菌 3 在无菌条件下 分别取0 1ml的稀释度为10 4和10 5的土壤稀释液 细菌悬液 分别加到装有全营养lb培养基和尿素培养基的培养皿 空白平板 中 再将保存在70 酒精中的玻璃刮刀放在酒精灯火焰上 待刮刀上火焰熄灭后 在酒精灯火焰旁打开培养皿 将前面已加入的土壤稀释液 细菌悬液 均匀涂布到整个平面上 取0 1ml菌悬液 高浓度 低浓度 换枪头 低浓度 高浓度 可不用换枪头 接种 涂布分离 观察菌落数 4 将培养皿倒置摆放在37 恒温箱中培养24 48h 观察菌落数 微生物计数方法活菌计数 样品稀释度足够高时 培养基表面只生长1个菌落 来源于样品稀释液中的1个活菌 根据平板上菌落数 推测样品中大约含有多少活菌 结果一般用菌落数而不是活菌数表示 显微观察计数 红细胞计数板 观察数量 再根据浓度比例计算出菌体数量 随堂检测 1 从土壤中分离能分解尿素的细菌 可以利用选择培养基 其成分中一定有 尿素 有机氮化合物 无机盐 有机碳化合物 水 无机碳化合物a b c d a 2 不同种类的细菌菌落表现为不同的特征 下列属于菌落特征的是 菌落大小 菌落形状 菌落的