人教版 选修一 微生物的实验室培养 课件（41张）.ppt

专题2微生物的培养与应用 课题1微生物的实验室培养 课题背景 微生物研究和应用的前提 如何获得纯净培养物 防止杂菌入侵 获得纯净的培养物 合适的营养和环境条件 确保其他微生物无法混入 一基础知识 1 概念 人们按照微生物对营养物质的不同需求 配制出供其生长繁殖的营养基质 2 类型 按物理性质划分 按化学成分划分 按用途划分 一 培养基 固体培养基 液体培养基 有无凝固剂琼脂 分离鉴定 工业生产 1 按物理性质划分 单个或少数菌体 2 特征 大小 形状 光泽度 颜色 透明度等 3 意义 1 定义 鉴定菌种的重要依据 固体培养基上 大量繁殖 子细胞群体 菌落 天然培养基 合成培养基 化学成分不恒定的天然有机物 如 牛肉膏蛋白胨培养基 马铃薯培养基 化学成分完全了解的物质配制而成的培养基 如 高氏1号培养基 查氏培养基 用于分类和鉴定 2 按化学成分划分 基础培养基 鉴别培养基 含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物质 将某种类微生物从混杂的微生物群体中分离出来 用于鉴别不同类型微生物的培养基 选择培养基 3 按用途划分 几种选择培养基 加入青霉素的培养基 分离酵母菌 霉菌等真菌 不加氮源的无氮培养基 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基 分离自养型微生物 3 基本成分 碳源 氮源 水 无机盐 碳源 无机碳源 有机碳源 co2 co32 hco3 牛肉膏 蛋白胨等 自养微生物 异养微生物 氮源 无机氮源 有机氮源 nh4 no3 牛肉膏 蛋白胨 酵母膏 尿素等 注 含c h o n的有机物是异养型微生物的碳源 氮源 能源 4 配制原则 1 目的明确 2 营养全面 浓度适宜 比例恰当 3 适宜的ph值 有机碳源 异养型 根据微生物的种类 培养目的选择原料 自养型 不加碳源 加入缓冲剂 细菌偏碱 真菌偏酸 co2碳源 微生物生长不可缺少的微量有机物如 维生素 氨基酸 碱基等 4 特殊营养 蛋白胨 动物蛋白初步消化的产物 富含有机氮化合物 也含有一些维生素和糖类 主要提供氮源和维生素 牛肉膏 新鲜牛肉经过剔除脂肪 消化 过滤 浓缩而成 含有多肽类 氨基酸类 核苷酸类 有机酸类 矿物质类及维生素类的水溶性物质 提供碳源 氮源 能源 磷酸盐和维生素 二 无菌技术 防止外来杂菌的污染 1 哪里需要无菌 2 如何控制无菌 无菌的意义 1 实验操作的空间 操作者的衣着和手 进行清洁和消毒 2 培养的器皿 接种用具和培养基等器具进行灭菌 3 为避免周围环境中微生物的污染 实验操作应在酒精灯火焰附近进行 4 实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触 1 无菌的范围 1 消毒 2 灭菌 概念 较为温和理化方法杀死部分有害微生物 不包括芽孢和孢子 强烈的理化因素杀死所有的微生物包括芽孢和孢子 常用方法 煮沸消毒法 巴氏消毒法 化学药剂消毒法 紫外线消毒法 灼烧消毒法 干热灭菌 高压蒸汽灭菌 适用对象 操作空间 液体 双手等 接种环 接种针 玻璃器皿 培养基等 2 无菌的方法 芽孢 在某些细菌生长的一定阶段 细胞内形成一个圆形 椭圆形或柱形的 抗逆性强的休眠体 孢子 真菌所产生的一种有繁殖或休眠作用的细胞 能直接发育成新个体 接种室内空气 接种箱 超净工作台 用紫外线照射30min 紫外线消毒 实验者的手臂 实验台等 酒精 氯气 石炭酸 煤酚皂溶液 化学药剂消毒 牛奶等不宜高温消毒灭菌的 70 75 30min 75 15min 巴氏消毒 日常食物 罐装食品 100 5 6min 煮沸消毒法 适用范围 条件 方法 1 消毒 15 30min 100kpa 121 培养基 实验器材 高压蒸汽灭菌 1 2h 干热灭菌箱 160 170 耐高温需干燥的物品 玻璃器皿等 干热灭菌 烧红 酒精灯火焰充分燃烧层灼烧 接种的工具 试管口 瓶口 灼烧灭菌 灭菌时间 所需条件 适用对象 灭菌方法 灼烧灭菌 干热灭菌箱 高压蒸汽灭菌锅 2 灭菌 请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌 如果需要 请选择合适的方法 1 培养细菌用的培养基与培养皿 2 玻棒 试管 烧瓶和吸管 3 实验操作者的双手 思考 微生物实验室培养的基本操作程序 1 器具的灭菌2 培养基的配制3 培养基的灭菌4 倒平板5 微生物接种6 恒温箱中培养7 菌种的保存 大肠杆菌的纯化培养 一 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 二实验操作 二 纯化大肠杆菌 1 计算 培养基用量 依配方计算各成分的用量 2 称量 3 溶化 牛肉膏黏稠 用称量纸称取 牛肉膏 蛋白胨易吸潮 要快 加盖 牛肉膏 称量纸 少量水加热溶解 取纸 蛋白胨 nacl 琼脂 搅拌 补水定容 4 调ph 分装 封口 5 灭菌 6 倒平板 加棉塞 包牛皮纸 橡皮筋勒紧 一 制备培养基 培养基高压蒸汽灭菌 培养皿干热灭菌 计算 称量 溶化 调节ph 灭菌 倒平板 一 制备培养基 1 将培养皿放在火焰旁的桌面上 右手拿装有培养基的锥形瓶 左手拨出棉塞 1 2 3 4 2 右手拿锥形瓶 使瓶口迅速通过火焰 3 用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙 右手将锥形瓶中的培养基 约10 20ml 倒入培养皿 左手立即盖上皿盖 4 等待平板冷却凝固 约需5 10min 然后 将平板倒过来放置 使皿盖在下 皿底在上 1 培养基灭菌后 需要冷却到50 左右时 才能用来倒平板 你用什么办法来估计培养基的温度 问题讨论 答 可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶 感觉温度下降到刚刚不烫手即可 2 为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰 答 通过灼烧灭菌 防止瓶口的微生物污染培养基 3 平板冷凝后 为什么要将平板倒置 4 在倒平板的过程中 如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位 这个平板还能用来培养微生物吗 为什么 答 防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染 避免培养基中水分过快蒸发 答 最好不要用这个平板培养微生物 防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生 无菌检查 将灭菌的培养基放入37 的温室中培养24 48小时 观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底 5 怎么确定所倒平板未被杂菌污染 单个或少数菌体 1 定义 固体培养基上 大量繁殖 子细胞群体 肉眼可见 菌落 2 特征 大小 形状 光泽度 颜色 透明度等 二 纯化大肠杆菌 单个细胞 单个菌落 二 纯化大肠杆菌 从混杂的微生物群体中获得只含某一种微生物的过程 何为分离纯化 如何纯化 接种常见方法 平板划线法 操作核心 防止杂菌污染 保持培养物纯度 如何分散成单个细胞 稀释涂布平板法 斜面接种 穿刺接种 微生物群 分散 1 平板划线法 分区划线法 连续划线法 1 概念与原理 聚集的菌群 连续划线 稀释分散 单个细胞 菌落 生长繁殖 2 平板划线 实验操作 第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环 灭菌接种环 1 为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环 在划线操作结束时 仍然需要灼烧接种环吗 为什么 问题讨论 杀死接种环上残留的菌种 避免细菌污染环境和感染操作者 接种结束后 杀死上次划线时残留菌种 使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端 从而使每次划线时菌种数目逐渐减少 直至得到单个细胞 每次划线前 杀死接种环上原有微生物 取菌种前 目的 灼烧时期 2 在灼烧接种环之后 为什么要等其冷却后再进行划线 答 以免接种环温度太高 杀死菌种 3 在作第二次以及其后的划线操作时 为什么总是从上一次划线的末端开始划线 答 线条末端细菌的数目比线条起始处要少 每次从上一次划线的末端开始 能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少 最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落 3个划线平板 1个不划线平板 重复实验 空白对照 3 培养 放入37 恒温箱中培养12h 24h 2 稀释涂布平板法 菌液的梯度稀释 涂布平板操作 1 概念与原理 聚集的微生物 单个细胞 菌液梯度稀释 菌落 涂布平板 2 操作 生长繁殖 系列梯度稀释操作 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 注意 移液管需要经过灭菌 试管口和移液管离火焰1 2cm处 涂布平板操作 1 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行 结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求 想一想 第2步应如何进行无菌操作 答 应从操作的各个细节保证 无菌 例如 酒精灯与培养皿的距离要合适 吸管头不要接触任何其他物体 吸管要在酒精灯火焰周围等等 问题讨论 各梯度分别涂布3个平板 1个不涂布作空白对照 放入37 恒温箱中培养12h 24h 3 培养 1 临时保藏 试管固体斜面培养基上 4 2 长期保存 菌种易被污染 变异 甘油管藏 1ml甘油 1ml菌液 20 三菌种的保存 3 6个月 转移培养 四成果评价 如果未接种的培养基在恒温箱中保温1 2d后无菌落生长 说明培养基的制备是成功的 否则需要重新