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文档简介

毕业设计(论文)外文资料翻译系 : 建筑工程学院 专 业: 给水排水工程 姓 名: 刘圣将 学 号: 0803120123 外文出处: SciVerse ScienceDirect 附 件: 1.外文资料翻译译文;2.外文原文。 指导教师评语: 签名: 年 月 日附 件:1、外文资料翻译译文低密度大肠杆菌的测定和幽门螺杆菌在水中的悬浮性张燕燕,莱拉K赖利,林梦诗,华志强土木与环境工程系,密苏里堪萨斯大学,哥伦比亚,MO65211,美国兽医病理学系,密苏里堪萨斯大学,哥伦比亚,MO65211,美国食品科学计划,食物分析系统与生物工程,密苏里堪萨斯大学,哥伦比亚,MO65211,美国(2011年9月14日收到;2012年1月23日修订的形式接受;网上公布于2012年1月28日)关键词:化学絮凝、浓度、EDTA解散、氯化镧系、实时PCR测定低密度的细菌,特别是那些致病株水,已经证明了充满困难和挑战。在这里,我们开发和评价镧基浓度的方法加上定量实时聚合酶链反应集中检测细菌(大肠杆菌和幽门螺杆菌)在水中浓度。提高定量PCR效率,絮体与纠缠后细菌化学絮凝需要溶解聚合酶链反应检测之前。乙二胺四乙酸(乙二胺四乙酸)盐成功溶解的絮体絮凝过程从镧为基础,而不是那些从传统的过程中使用化学物质如FeCl 3或Al 2(SO4)3。镧基浓度加上实时聚合酶链反应成功地测定了大肠杆菌在浓度15个细胞/毫升在原材料和成品水和幽门螺杆菌在浓度约1个细胞/毫升成品水消毒之前。幽门螺杆菌检测灵敏度可容易增加到60个细胞/减少最后量的样本从3毫升到60微升。为了消除膜堵塞中常遇到的问题,常通过直接膜过滤,再加上定量PCR的镧基进行化学絮凝,这是一种很有前途的方法用来测定低密度的微生物悬浮在水中的低密度微生物。1、简介检测低密度细菌的水已经证明是困难的,也很有挑战性。这是真实的,当处理病原体在大量的饮用水(2007年的希尔和2003年的莫拉莱斯等人)。 饮用水余氯水使得检测低浓度的菌悬液更难(杜瑟若等人,2008年;希尔等,2007年)。然而,检测的病原体,如隐孢子虫和隐性幽门螺旋杆菌(H. pylori)感染对于水质和安全监测是很重要的,美国环保局提出的(例如,办法 1623)(朱克曼和Tzipori,2006年)。虽然琼脂平板方法通常用于检测细菌,并非所有的物种都是可培养的,并且不是任何特定物种的细胞都将产生菌落。例如,幽门螺旋杆菌可能改变到次优条件下的非可培养的形式,尽管它保留了一些代谢活动(尼尔森等。2002年)。因此,平板计数是一个低估培养细胞的总数量的方法。聚合酶链反应(PCR)为基础的细菌检测并不需要培养步骤(Behets等,2007; Hwang等,2007;柯等人,2005年;Schwab等,2001; Tanriverdi等,2002)。虽然PCR检测细菌的最低检测限不同,实际的限制是103个细胞/ mL或更高,因为各种干扰因素可能会降低检测灵敏度量级(威尔逊,1997年)。由于水样中的细菌数量,在许多情况下,低于PCR扩增检出限,所以在检测细菌浓度之前,需要进行PCR检测。 为了使低密度微生物集中悬浮在水中,常采用膜过滤的方法。(Brichtaharhay等人,2007年。盖伊等,2006;卡玛等,2008;schets等人,2005年,。Sobsey等2004)。这是目前微生物检测的标准方法(例如,方法1603e1605)由美国环保局提出的。然而,过滤大水样卷是费时,有时是很困难的,这是因为迅速堵塞滤膜在水中的胶体和有机物质的存在(法拉等,1976)。高级(更昂贵)墨盒过滤方法,如中空纤维超滤(山等,2007;马尔山,2009;,。Rutjes等,2005),NanoCeram,阳电1MDS微滤(卡里姆等,2009)有被用来集中在水中的细菌和病毒。在这些方法,细菌复苏取决于洗脱仍可能堵塞程序和数百毫升的洗脱液二次过滤膜孔(马尔和希尔,2009年)。因此,需要成本效益更好和更有效的检测细菌浓度的方法。化学混凝/絮凝,在许多情况下,再配合过滤,是一种流行的方法用来去除胶体和在水处理中的微生物(Havelaar等,1995;纳赛尔等人,1995年。Rapala等,2006)。化学絮凝过程可以消除水中超过90的细菌和病毒(Bulson等人,1984年。尔塔斯等,2003)。通过絮凝剂水解/聚合,电荷中和和扫描凝固(段和Gregory,2003; Stumm摩根,1996),胶体和细菌都集中陷入成絮状物。因此,应用混凝可以扩展到絮凝过程中细菌的浓度和检测。内絮体的细胞可以通过酸中溶解的絮状物释放或金属离子螯合前进行细菌检测。在化学絮凝的细菌浓度中,絮凝金属阳离子也主要集中在絮体当中。尽管众所周知的,Fe3可以减少产量DNA的提取(Braid等,2003)和抑制PCR反应(Kreader,1996年,威尔逊,1997年),目前尚不清楚是否高浓度的其他如La3和Al3的三价阳离子和他们的氢氧化物会出现相同的行为。我们最近开发出一种化学絮凝对细菌浓度,的方法来检测细菌,实验表明,采用化学絮凝剂氯化镧(镧),比传统的絮凝剂(例如,三氯化铁和Al2(SO4)3)(Zhang等,2010)取得了较高的细菌浓度恢复效果。该方法,但不适用于特定的细菌的定量检测。 “本研究的目的是推广这项最近的工作用来评估基于镧的细菌浓度的检测方法加上实时定量PCR(QPCR)检测水中的细菌。大肠杆菌是经过挑选的因为它作为一个理想的指标为饮用水的污染监测(Juhna等,2007)。粪大肠菌群和大肠杆菌细菌的存在,表明水可能被人类或动物的废物所污染。幽门螺旋杆菌也是被选择作为指标,因为它是在人类身上最流行的病原体之一。它可以生存于加氯消毒中,并一直在培养研究方法中不易察觉到(阿泽维多等,2008; GIAO等,2010)。2、材料和研究方法2.1、制备原料和成品的水样水源和成品水都是收集于准备扣球水后的细菌样本。直接从哥伦比亚附近的密苏里河取水,密苏里州担任源(原始)水,其中载79.9毫克/ L的化学需氧量(COD)和90 mg / L的总悬浮固体(TSS)的标准方法测定(APHA,2005)。成品水氯消毒前收集了从哥伦比亚水厂(哥伦比亚,MO)。 在原水的研究中,将大肠杆菌系统培养群添加到来自密苏里河的水,准备样品(1升体积)含有已知浓度的大肠杆菌(从10e104细胞/毫升),10倍稀释。在此之前,原始水消毒灭菌,以消除现有细菌可能造成干扰的测定检测下限(检测后没有大肠杆菌高压灭菌,数据未显示)。 在成品水研究,水样中含有大肠杆菌或幽门螺旋杆菌的细菌,准备加入等分(0.1毫升)细菌到一系列含1000毫升成品水(无细菌检测由前扣球与大肠杆菌或幽门螺旋杆菌的qPCR)玻璃烧杯中。窗体顶端2.2、细菌的群落培养和枚举 将大肠杆菌MG1655(ATCC 47076)(LB)培养在卢里亚-Bertani媒介中经过一个晚上,在37 C环境下并且采用琼脂列举 板法(细胞浓度范围从到细胞/毫升)。所需的大肠杆菌浓度 准备在磷酸盐缓冲液(PBS)中 稀释。幽门螺旋杆菌(ATCC 43504)胰酶大豆种植 5羊血琼脂(TSA)的板下微需氧 条件(5氧气,10的二氧化碳和85的氮气) 在一个BD GasPak简易煤气发电系统(Becton Dickinson公司, 火花,MD)。菌落从媒介收集后在37度条件下生长。他们被暂停1? PBS溶液和 调整在600 nm的光密度值(OD值)为0.10,获得 细菌的群落,其中有幽门螺旋杆菌的平均浓度 (1.6 0.3)细胞/ mL基于标准的琼脂 板法。所需的幽门螺旋杆菌的浓度分别准备在1*PBS硫化铅以1:10系列稀释。 2.3、在化学絮凝水中的大肠杆菌细胞浓度将含有大肠杆菌的水样(1000毫升) 准备在一系列玻璃烧杯中。对选定的絮凝剂的等分地加入在最终浓度为0.2毫米(Zhang等,2010)阳离子中(La3,Fe3或Al3单独添加)。将水中的细菌集中 混凝,絮凝,水在水中的细菌 样品以1分钟300转迅速混合,接着再 以20分钟60转的混合速度用磁力搅拌器转速。 絮凝阳离子(La3,Al3和Fe3)去通过水解 和聚合(王等人,2002年),而金属氢氧化物将在混凝和絮凝(贝奇和Gregory,2007;段后形成的氢氧化物(固体和非晶相)和Gregory,2003)后形成。虽然镧,氯化铁或下Al2(SO4)3絮凝后形成的絮体的处理相似,但是其形态完全不同,根据电子显微镜观察(张等,2010),镧絮凝后形成比较厚,致密的絮体。经过1沉淀,在上清液(900毫升)进行了仔细吸气并且不影响底部的固定絮状物。等分(1毫升),上清液,固定态的絮体(完全用盐酸溶解)和对照样本进行DNA提取和PCR检测。3、结果与讨论3.1、不同絮凝剂在水中的细菌细胞的浓度3.2、DNA提取的镧离子,EDTA和HCl的影响和定量PCR检测 3.3、镧的浓度和大肠杆菌PCR在原水和成品水中的检测4、结论总之,使用镧基絮凝,检测水中的细菌浓度是一种新的方法,并且成功研制。EDTA的完全溶解的絮状物从镧基絮凝过程与额外的,通过过滤和离心两步进行絮凝检测细菌浓度。这项研究的提出证明了细菌浓度的概念实施进展,这可能产生新的集中和检测水中具有较大体积混合微生物的成果。这项研究是由美国环保局来完成的结果(STAR)计划批准号83384001。任何意见,结果,结论或建议在本文中所表述的任何意见,结果,结论或建议都是是作者个人观点,并不代表环保局的意见。参考文献2005年,按照APHA。为检验水和标准方法废水,21版。美国公共卫生协会,华盛顿特区。阿泽维多,NF,阿尔梅达,C,费尔南德斯,一,Cerqueira,甘蓝型油菜,迪亚斯,学,维埃拉,基维尔,C.W.,兆焦耳,2008年。胃癌的生存和肝肠螺杆菌。在水的影响传输。应用与环境微生物学74(6)1805e1811。八坼,D.H.,格雷戈里,R.,2007。在水处理中的絮状物。 IWA的伦敦出版。behets,Delaedt研究,Declerck,体育,研究,Verelst,甘蓝型油菜,Ollevier,楼,2007。一个全双工实时PCR检测,定量检测水样naegleria fowleri。水研究41(1)118e126。博尔夏特,文学硕士,:斯宾塞,S.K.,2002年。浓度隐孢子虫,微孢子虫和其他水性通过不断的分离通道离心病原体。应用微生物学92(4),649e656。bordner,河,冬,J.,Scarpino,P.,1978年。微生物学方法环境监测:水和废物。美国环保局,俄亥俄州辛辛那提市。Brad,医学博士,丹尼尔斯,L.M.,圣基茨,C.L.,2003年。去除的PCR通过化学絮凝土壤DNA的抑制剂。 微生物方法52(3),389e393。brichta Harhay,DM,亚瑟,以旧换新,Bosile

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