MM_FS_CNJ_0073 出口禽肉中二氯二甲吡啶酚残留量检验方法.DOC

MM_FS_CNJ_0073出口 禽肉 二氯二甲吡啶酚 残留量 乙酰化-气相色谱法 内标法定量 MM_FS_CNJ_0073 出口禽肉中二氯二甲吡啶酚残留量检验方法1.适用范围 本方法适用于出口冻鸡中二氯二甲吡啶酚残留量的检验。2.原理概要 用甲醇提取样品中二氯二甲吡啶酚，经氧化铝和阴离子交换树脂柱净化。与乙酸酐反应，转化成相应的酯，用气相色谱电子俘获检测器测定，内标法定量。3.主要试剂和仪器3.1.主要试剂 甲醇：分析纯，经全玻璃装置重蒸馏，收集6465馏分； 正己烷：分析纯，经全玻璃装置重蒸馏，收集6769馏分； 无水硫酸钠：分析纯，经650灼烧4h，置于干燥器内备用； 氧化铝：中性，净化用，100200目；300灼烧4h，置于干燥器备用； 阴离子交换树脂：Dowex 1-x8 100200目，Cl型； 助滤剂：Celite 545，使用前用甲醇清洗； 乙酸酐：重蒸馏； 吡啶； 苯； 氢氧化钠； 氢氧化钠溶液：1mol/L；取40.0g氢氧化钠溶解于1000mL去离子水中； 乙酸钠； 乙酸钠溶液：0.5mol/L；溶解68.0g乙酸钠于1000mL去离子水中； 四硼酸钠； 四硼酸钠溶液：0.1mol/L；取38.1g四硼酸钠溶于1000mL去离子水中； 冰乙酸； 乙酸-甲醇溶液：0.5%；将2.5mL冰乙酸加到477.5mL甲醇中； 硫酸钠溶液：2%；取2g硫酸钠溶解于100mL去离子水中； 二氯二甲吡啶酚和六氯苯标准品：纯度99%； 二氯二甲吡啶酚标准溶液：准确称取适量的二氯二甲吡啶酚标准品，用甲醇配成浓度为100g/mL的标准储备溶液，根据需要再配成适当浓度的标准工作溶液； 内标溶液：准确称取适量的六氯苯标准品，用苯配成浓度为100g/mL的标准储备溶液，根据需要再用正己烷配成适当浓度的内标工作溶液。3.2.仪器 气相色谱仪，配有电子俘获检测器； 组织捣碎机； 均质器； 离心机； 离心管：具磨口塞，5mL； 氧化铝柱：20cm20mm(id)玻璃柱，柱底部填约0.5cm高的脱脂棉，装89cm高的氧化铝，用前经甲醇淋洗； 阴离子交换树脂柱：15cm10mm(id)玻璃柱，将阴离子交换树脂伴以去离子水装入柱内，高度为2cm，注入100mL氢氧化钠溶液淋洗，然后用去离子水洗涤至中性。再用100mL乙酸钠溶液淋洗，用去离子水洗涤至中性。最后用50mL甲醇水溶液80%(V/V)洗涤后备用(流速为2mL/min)； 微量注射器：10L、100L。4.试样的抽取与制备4.1.检验批 以不超过2500件为一检验批。 同一检验批的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。4.2.抽样数量批量，件最低抽样数，件1251261005101250102515001550110001710012500204.3.抽样方法 按规定的抽样件数随机抽取，逐件开启。每件至少取500g或一袋作为原始样品，原始样品总量不得少于2kg。放入清洁容器内，加封后，标明标记，及时送实验室。4.4.试样制备 将所取原始样品缩分出1kg，取可食部分，经组织捣碎机捣碎均匀，均分成两份，装入洁净容器内，作为试样。密封，并标明标记。4.5.试样保存 将试样于18以下冷冻保存。注：在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。5.过程简述5.1.提取 称取试样20g(精确到0.1g)于均质杯中，加入50mL甲醇和3g助滤剂，高速均质3min。在布氏漏斗上敷上2g助滤剂，抽滤均质后的样品，用45mL甲醇分3次洗涤均质杯并移入布氏漏斗中抽滤。将滤液并入100mL容量瓶中，用甲醇定容，并混匀。5.2.净化 将阴离子交换柱置于氧化铝柱下，吸取50mL提取液注入氧化铝柱内，控制提取液在阴离子交换柱的流速为1mL/min，用20mL甲醇冲洗两柱。除去氧化铝柱，弃去全部的流出液。用20mL乙酸-甲醇溶液(0.5%)洗脱二氯二甲吡啶酚，洗脱液收集于25mL容量瓶中，用甲醇定容。5.3.乙酰化 吸取5.0mL洗脱液于离心管中，在5060水浴中，用氮气吹干。加4mL四硼酸钠溶液(0.1mol/L)溶解残渣，离心管置于50水浴中5min。依次加入1.0mL内标工作溶液、10L吡啶和75L乙酸酐，加塞，振摇1min，2000r/min离心5min。将正己烷相转入另一离心管中，加无水硫酸钠脱水后供气相色谱测定。5.4.标准物的乙酰化 取适用浓度的标准工作溶液，用氮气吹干，按5.3进行乙酰化反应。5.5.测定5.5.1.色谱条件色谱柱：玻璃柱，2m3mm(id)，填充物为3%OV-173.3%QF-1涂于Chromosorb WhP(100120 目)；色谱柱温度：150；进样口温度：220；检测器温度：250；氮气：纯度99.99%，65mL/min。5.5.2.色谱测定 分别准确注入5L经乙酰化后的样液和标准工作溶液于气相色谱仪中，按5.5.1的条件进行分析。响应值均应在仪器检测的线性范围之内。 在上述色谱条件下，二氯二甲吡啶酚的保留时间约为4.0min，六氯苯约为11min。5.6.空白试验 除不加试样外，按上述测定步骤进行。6.结果计算 用色谱数据处理机或按下式计算试样中二氯二甲吡啶酚残留含量：Xcshhsimicsihihsm式中：X试样中二氯二甲吡啶酚残留量，mg/kg；cs标准工作溶液中二氯二甲吡啶酚的浓度，g/mL；csi标准工作溶液中六氯苯的浓度，g/mL；h样液中二氯二甲吡啶酚乙酯的峰高，mm；hi样液中六氯苯的峰高，mm；hs标准工作溶液中二氯二甲吡啶酚乙酯的峰高，mm；hsi标准工作溶液中六氯苯的峰高，mm；mi样液中的六氯苯添加量，g；m最终样液所代表的样品重量，g。注：计算结果