MM_FS_CNJ_0101 出口肉及肉制品中黄体酮残留量检验方法.DOC

MM_FS_CNJ_0101出口 肉 肉制品 黄体酮 残留量 气相色谱/质谱法 外标法定量 MM_FS_CNJ_0101 出口肉及肉制品中黄体酮残留量检验方法1.适用范围 本方法适用于出口牛肉中黄体酮残留量的检验。2.原理概要 用甲醇-水混合溶液提取试样中的黄体酮，提取液经过滤、加氯化钠溶液后，用二氯甲烷抽提。二氯甲烷提取液经脱水后浓缩，残渣用甲醇溶解。甲醇溶液经用正己烷抽提以去除杂质，再与二氯甲烷液液分配，使被测物进入二氯甲烷层。二氯甲烷溶液经浓缩、定容后，用配有质谱检测器的气相色谱仪测定，外标法定量。3.主要试剂和仪器3.1.主要试剂 甲醇、二氯甲烷、正己烷：重蒸馏； 氯化钠溶液：10，将100g氯化钠溶于1000mL水中； 混合提取液：甲醇-水(8020)； 无水硫酸钠：650灼烧4h置于干燥器中备用； 黄体酮标准品：纯度98； 黄体酮标准溶液：准确称取适量的黄体酮标准品，用甲醇配成浓度为0.10mg/mL的标准储备液，根据需要再用甲醇稀释成适当浓度的标准工作液。3.2.仪器 气相色谱仪：配有质谱检测器和毛细管不分流进样系统； 振荡机； 旋转蒸发器； 分液漏斗：250mL； 三角烧瓶：100mL； 硫酸钠柱：7.5cm1.5cm(内径)，内装5cm高无水硫酸钠； 浓缩瓶：150mL； 离心管：10mL； 微量注射器：10L。4.试样的抽取与制备4.1.检验批 以不超过2500件为一检验批。 同一检验批的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。4.2.抽样数量批量，件最低抽样数，件1251261005101250102515001550110001710012500204.3.抽样方法 按规定的抽样件数随机抽取，逐件开启。从每件内取一袋作为原始样品，原始样品总量不少于1kg。放入清洁容器内，加封后，标明标记，及时送交实验室。如每件中无小包装，或有小包装但重量超过2kg者，则可用灭菌锋利刀在抽出的包件中，每件割取不少于100g。混合后置于清洁容器内，作为混合原始样。混合原始样的重量不少于2kg。加封后，标明标记，及时送交实验室。4.4.试样制备 从所取原始样品中缩分出1kg，经捣碎机充分捣碎均匀，均分成两份，分别装入洁净容器内作为试样。密封并标明标记。4.5.试样保存 将试样于18以下冷冻保存。注：在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。5.过程简述5.1.提取和净化 称取约10g试样(精确至0.1g)置于100mL锥形瓶中，加入30mL混合提取液，振荡提取30min，过滤。残渣用30mL混合提取液，再提取一次。滤液合并于250mL分液漏斗中，加入50mL氯化钠溶液，用40mL、10mL二氯甲烷提取两次。合并二氯甲烷层，过无水硫酸钠柱脱水，收集流出液，于45水浴上旋转浓缩至近干。加5mL甲醇以溶解残渣，并将溶液转移至10mL离心管中。加1mL正己烷和1.5mL水，充分混匀，于2000r/min离心2min，弃去正己烷层。再加入1mL正己烷，混匀，离心，弃去正己烷层。加1mL二氯甲烷，再加水至10mL，充分混匀，于2000r/min离心2min。将二氯甲烷层转入另一支离心管中。水相再用1mL二氯甲烷提取一次，合并二氯甲烷层。用氮气流吹至近干后，加二氯甲烷并定容到1.00mL，供气相色谱/质谱检测器测定。5.2.测定5.2.1.气相色谱/质谱条件色谱柱：HP-1，12m0.2mm(内径)0.25m(膜厚)，石英毛细管柱；载 气：氦气，纯度99.99；1.0mL/min；柱 温：程序升温，60(2min) 20/min 250 10/min 280(5min)；进样口温度：250；色谱-质谱接口温度：280；进样方式：无分流进样，1min后开阀；电离方式：电子轰击电离(EI)；电离能量：70eV；测定方式：选择离子监测方式(SIM)；选择监测离子(m/z)：314，272amu；溶剂延迟：12min；进样量：2L。5.2.2.气相色谱/质谱测定根据样液中黄体酮含量情况，选定浓度相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中黄体酮响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。在上述气相色谱/质谱条件下，黄体酮的保留时间约为14min。5.3.空白试验 除不加试样外，均按上述测定步骤进行。6.结果计算用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中黄体酮残留含量： XAcV(1)Asm式中：X试样中黄体酮的残留含量，mg/kg；A样液中黄体酮的峰面积，mm2；As标准工作溶液中黄体酮的峰面积，mm2；c标准工作溶液中黄体酮的浓度，g/mL；V样液最终定容的体积，mL；m最终样液所代表的试样量，g。注：计算结果需扣除空白值。7.低限、回收率的测定7.1.测定低限 本方法的测定低限为0.003mg/kg。7.2.回收率