芳酸及其酯类药物的分析.ppt

典型药物分析 1 学习目标 1 掌握典型药物的鉴别和含量测定的原理 方法2 熟悉典型药物中主要特殊杂质的来源及检查方法3 了解典型药物的结构特征和主要理化性质4 学会根据药品质量标准 对典型药物进行鉴别 检查和含量测定操作 学会正确计算和判断检验结果5 具有强烈的质量观念 认真负责的工作态度 科学严谨的工作作风 2 第四章芳酸及其酯类药物的分析 3 苯甲酸 羟苯乙酯 丙磺舒 4 芳酸及其酯类药物 水杨酸类 羧基直接与苯环相连 并且邻位有羟基取代 苯甲酸类 羧基直接与苯环相连 其它芳酸及其酯类 酸性基团为磺酸基或羧基通过烃氧基等与苯环相连 二 芳酸及其酯类药物 5 一 典型药物 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第一节典型药物的分类与性质 一 苯甲酸类 苯甲酸丙磺舒甲芬那酸 6 性质 1 固体 具有一定的熔点 2 具有紫外和红外特征吸收光谱 本类药物结构中的苯环及其取代基 具有特征的紫外和红外吸收光谱 可用于鉴别和含量测定 3 溶解性游离芳酸类药物几乎不溶于水 易溶于有机溶剂 芳酸碱金属盐及其它盐易溶于水 难溶于有机溶剂 苯甲酸药物结构中 羧基直接与苯环相连 因此具有较强的酸性 可用于含量测定 1 物理性质 第一节典型药物的分类与性质 7 2 酸性pKa 3 6 水杨酸 pKa 2 95 阿司匹林 pKa 3 49 苯甲酸 pKa 4 26 8 芳酸中有如下取代基使酸性 X NO2 OH COOH芳酸中有如下取代基使酸性 CH3 NH2 9 水杨酸 pKa 2 95 邻位羟基对羧基的邻位效应邻位羟基与羧基形成分子内氢键 阿司匹林 pKa 3 49 羟基被乙酰化 不与羧基生成分子间内氢键 10 水杨酸类多可用酸碱滴定法测定含量 在中性乙醇中 以酚酞为指示剂以标准氢氧化钠滴定液测定含量 芳酸碱金属盐易溶于水 水解 溶液呈碱性 但碱性太弱 所以其含量测定方法为双相滴定法或非水碱量法 11 3 水解特性 1 芳酸酯可水解 利用其水解得到酸和醇的性质可进行鉴别 2 利用芳酸酯水解定量消耗氢氧化钠的性质 芳酸酯类药物可用水解后剩余滴定法测定含量 3 芳酸酯类药物还应检查因水解而引入的特殊杂质 12 4 取代基特性 取代芳酸类药物可利用其取代基的性质进行鉴别和含量测定 如具有酚羟基的药物可用FeCl3反应鉴别 具芳伯氨基的药物可用重氮化 偶合反应鉴别 亚硝酸钠滴定法测定含量 13 第一节水杨酸类药物分析 14 预习提示 阿司匹林的结构特点阿司匹林的鉴别方法有哪些 阿司匹林需要检测哪些杂质 阿司匹林含量测定的方法与计算 15 一 典型药物的结构与性质 阿司匹林 苯环 紫外吸收 羧基 酸性 16 一 典型药物的结构与性质 苯环 紫外吸收 17 酚羟基 三氯化铁显色反应 对氨基水杨酸钠 苯环 紫外吸收 有机酸的钠盐 钠盐的鉴别反应 一 典型药物的结构与性质 18 二 阿司匹林及其制剂的分析 一 性状1 外观与臭味白色结晶或结晶性粉末 无臭或微带醋酸臭 味微酸 遇湿气即缓缓水解 19 二 阿司匹林及其制剂的分析 一 性状2 溶解度本品在乙醇中易溶 在三氯甲烷或乙醚中溶解 在水或无水乙醚中微溶 在氢氧化钠溶液或碳酸钠溶液中溶解 但同时分解 为什么阿司匹林难溶于水 却可溶解在氢氧化钠溶液或碳酸钠溶液中 20 二 鉴别 1 三氯化铁反应方法 取本品约0 1g 加水10ml 煮沸 放冷 加三氯化铁试液1滴 即显紫堇色原理 阿司匹林结构中无游离的酚羟基 其水解产物水杨酸有酚羟基 在中性或弱酸性条件下 可与三氯化铁试液反应 将溶液煮沸的目的是什么 21 二 鉴别 反应式 紫堇色配位化合物 22 二 鉴别 2 水解反应方法 取本品约0 5g 加碳酸钠试液10ml 煮沸2分钟后 放冷 加过量的稀硫酸 即析出白色沉淀 并发生醋酸的臭气原理 阿司匹林分子结构中具有酯键 与碳酸钠试液共热 水解生成水杨酸钠和醋酸钠 放冷后用稀硫酸酸化 析出白色的水杨酸沉淀 并产生醋酸的臭气 23 二 鉴别 白色沉淀 醋酸臭气 反应式 24 二 鉴别 3 红外分光光度法阿司匹林供试品的红外吸收图谱应与 药品红外光谱集 中对照的图谱 光谱集第5图 一致 25 二 鉴别 4 高效液相色谱法在含量测定项下记录的色谱图中 供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致 中国药典 2010年版阿司匹林片 阿司匹林肠溶片 阿司匹林肠溶胶囊 阿司匹林泡腾片等均采用高效液相色谱法鉴别 26 水杨酸 炽灼残渣 有关物质 易碳化物 溶液的澄清度 重金属 Aspirin 三 杂质检查 27 三 杂质检查 1 溶液的澄清度 1 检查的杂质 无羧基的杂质 如未反应的酚类 副产物醋酸苯酯 水杨酸苯酯及乙酰水杨酸苯酯等 28 三 杂质检查 1 溶液的澄清度 2 检查方法 取供试品0 50g 加温热至约45 的碳酸钠试液10ml溶液后 溶液应澄清 3 检查原理 利用有无羧基 在碳酸钠试液中溶解行为的差异 29 三 杂质检查 2 游离水杨酸 1 杂质来源 阿司匹林在生产过程中乙酰化不完全或贮藏过程中水解产生水杨酸 水杨酸对人体有毒性 而且分子中的酚羟基在空气中被逐渐氧化成一系列醌型有色 如淡黄 红棕甚至深棕色 物质 使阿司匹林成品变色 30 三 杂质检查 2 游离水杨酸 2 检查方法 高效液相色谱法按外标法以峰面积计算 游离水杨酸限量不得超过0 1 31 三 杂质检查 2 游离水杨酸 2 检查方法 高效液相色谱法供试品溶液的制备 取本品约0 1g 精密称定 置10ml容量瓶中 加1 冰醋酸甲醇溶液适量 振摇使溶解 并稀释至刻度 摇匀 作为供试品溶液 对照品溶液的制备 取水杨酸对照品约10mg 精密称定 至100ml容量瓶中 用1 冰醋酸甲醇溶液适量使溶解并稀释至刻度 摇匀 精密量取5ml 至50ml容量瓶中 用1 冰醋酸甲醇溶液稀释至刻度 摇匀 作为对照品溶液 32 三 杂质检查 阿司匹林中游离水杨酸的检查对照品 水杨酸对照品固定相 C18流动相 乙腈 四氢呋喃 冰醋酸 水 20 5 5 70 流速 1 0ml min进样体积 10 l检测波长 303nm 33 三 杂质检查 阿司匹林制剂中游离水杨酸的限量 34 三 杂质检查 3 有关物质方法 高效液相色谱法主成分自身对照法结果判断 供试品溶液的色谱图中如有杂质峰 除水杨酸峰外 其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积 0 5 35 三 杂质检查 色谱柱 C18流动相 乙腈 四氢呋喃 冰醋酸 水 20 5 5 70 为流动相A 乙腈为流动相B 按下表进行线性梯度洗脱 流速 1 0ml min进样体积 10 l检测波长 276nm柱温 室温 36 四 含量测定 1 阿司匹林的含量测定 1 原理 利用阿司匹林游离羧基的酸性 用氢氧化钠滴定液直接滴定 37 四 含量测定 1 阿司匹林的含量测定 2 方法 直接酸碱滴定法取本品约0 4g 精密称定 加中性乙醇 对酚酞指示液显中性 20ml溶解后 加酚酞指示液3滴 用氢氧化钠滴定液 0 1mol L 滴定 每1ml氢氧化钠滴定液 0 1mol L 相当于18 02mg的C8H9O4 38 四 含量测定 1 阿司匹林的含量测定 3 注意事项 阿司匹林在水中溶解度小 同时阿司匹林酯键在滴定时易水解 致使测定结果偏高 因此不用水为溶剂 而用中性乙醇溶液溶解样品 本品为有机酸 酸性较弱 用强碱进行滴定时 化学计量点偏碱性 故选用碱性区变色的酚酞作为指示剂 中性乙醇的配制是取一定量乙醇加酚酞指示剂几滴 用氢氧化钠滴定液 0 1mol L 滴至显粉红色 39 四 含量测定 阿司匹林片的含量测定方法 高效液相色谱法外标法流动相 乙腈 四氢呋喃 冰醋酸 水 20 5 5 70 检测波长 276nm 阿司匹林肠溶片 阿司匹林肠溶胶囊 阿司匹林泡腾片 阿司匹林栓等均用此法测定含量 40 四 含量测定 41 点滴积累 42 目标检测 一 单项选择题 A型题 1 阿司匹林与三氯化铁试液反应生成紫堇色 是因为阿司匹林结构中具有 A 羧基B 酚羟基C 氨基D 苯环E 酯键水解产生水杨酸2 阿司匹林与碳酸钠试液共热 放冷后用稀硫酸酸化 析出的白色沉淀是 A 乙酰水杨酸B 醋酸C 水杨酸钠D 水杨酸E 苯甲酸 43 目标检测 一 单项选择题 A型题 3 阿司匹林与碳酸钠试液共热 放冷后用稀硫酸酸化 产生的臭气为 A 硫酸B 醋酸C 水杨酸钠D 苯甲酸E 水杨酸4 检查阿司匹林中游离水杨酸 中国药典 2010年版采用的方法是 A 薄层色谱法B 气相色谱法C 高效液相色谱法D 紫外 可见分光光度法E 旋光法 44 目标检测 一 单项选择题 A型题 5 中国药典 2015年版阿司匹林及其制剂都需要检查的特殊杂质是 A 游离水杨酸B 有关物质C 溶液的澄清度D 重金属E 易炭化物6 可用直接酸碱滴定法测定阿司匹林含量 是因为阿司匹林结构中具有 A 羧基B 酚羟基C 氨基D 苯环E 酯键 45 目标检测 一 单项选择题 A型题 7 用酸碱滴定法测定阿司匹林含量时 使用酚酞指示液 用氢氧化钠滴定液 0 1mol L 进行滴定 滴定终点时溶液的颜色是 A 紫红色B 粉红色C 粉红色褪去D 蓝绿色E 蓝色 46 目标检测 二 配伍选择题 B型题 A 直接酸碱滴定法B 两步酸碱滴定法C 比色法D 比浊法E 高效液相色谱法8 阿司匹林片的含量测定 中国药典 2015年版采用的方法是 9 阿司匹林的含量测定 中国药典 2015年版采用的方法是 47 目标检测 二 配伍选择题 B型题 A 直接酸碱滴定法B 两步酸碱滴定法C 比色法D 比浊法E 高效液相色谱法10 检查阿司匹林中游离水杨酸 中国药典 2015年版采用的方法是 11 检查阿司匹林在碳酸钠试液中的不溶物 中国药典 2015年版采用的方法是 48 目标检测 三 多项选择题 X型题 12 阿司匹林需要检查的特殊杂质有 A 氯化物B 重金属C 溶液的澄清度D 游离水杨酸E 有关物质13 下列药物中 加热水解后可与三氯化铁试液反应 产生颜色反应的有 A 水杨酸B 贝诺酯C 苯甲酸D 阿司匹林E 对氨基水杨酸钠 49 目标检测 三 多项选择题 X型题 14 酸碱滴定法测定阿司匹林含量时 所用的试剂溶剂有 A 乙醇B 中性乙醇C 盐酸滴定液D 氢氧化钠滴定液E 酚酞指示液 50 目标检测 三 多项选择题 X型题 15 在药品质量标准的检查项下 检查内容主要包括 A 物理常数B 有效性C 均一性D 安全性E 纯度要求16 对药品检验原始记录的要求是 A 真实B 完整C 清晰D 可以补记E 可以用修正液涂改 51 1 对氨基苯甲酸酯类药物本类药物分子中都具有对氨基苯甲酸酯的母体 结构通式如下 典型药物有 苯佐卡因 盐酸普鲁卡因和盐酸丁卡因等局部麻醉药 三 胺类药物 52 主要化学性质 芳伯氨基特性显重氮化 偶合反应 与芳醛缩合反应 易氧化变色等 用亚硝酸钠滴定法进行含量测定 53 水解特性含酯键 或酰胺键 易水解 其水解的快慢受光线 热或碱性条件的影响 水解产物主要为对氨基苯甲酸 PABA 利用水解产物的性质来进行鉴别 注 水解速度受空间位阻 光线 热或碱性条件的影响 54 2 酸性pKa 3 6 水杨酸 pKa 2 95 阿司匹林 pKa 3 49 苯甲酸 pKa 4 26 55 弱碱性除苯佐卡因外 因其脂烃胺侧链为叔胺氮原子 故具有弱碱性 因此能与生物碱沉淀剂发生沉淀反应 但在水溶液中不能用标准酸直接滴定 在非水溶剂中能滴定 56 其它特性本类药物的游离碱多为碱性油状液体或低熔点固体 难溶于水 可溶于有机溶剂 其盐酸盐均系白色结晶性粉末 具有一定的熔点 易溶于水和乙醇 难溶于有机溶剂 57 其它特性本类药物的游离碱多为碱性油状液体或低熔点固体 难溶于水 可溶于有机溶剂 其盐酸盐均系白色结晶性粉末 具有一定的熔点 易溶于水和乙醇 难溶于有机溶剂 58 二 主要性质苯甲酸溶解后以氢氧化钠溶液调节成的中性溶液与三氯化铁试剂反应 可生成赭色沉淀 含硫的丙磺舒受热可分解成亚硫酸盐等均可用于本类药物的鉴别 第五章芳酸及其酯类药物的分析 一 苯甲酸类 59 一 典型药物 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第一节典型药物的分类与性质 二 水杨酸类 水杨酸阿司匹林二氟尼柳 60 一 典型药物 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第一节典型药物的分类与性质 二 水杨酸类 对氨基水杨酸钠双水杨酯贝诺酯 61 二 主要性质本类药物的基本结构为邻羟基苯甲酸 由于羧基邻位的羟基取代 能与羧基形成分子内氢键 增强羧基中氧氢键的极性 使其酸性增强 因此水杨酸的酸性 pKa 2 95 比苯甲酸 pKa 4 26 强 邻位羟基如被酯化 则酸性下降 对氨基水杨酸钠结构中含有游离芳伯氨基 可采用亚硝酸钠滴定法测定含量 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第一节典型药物的分类与性质 二 水杨酸类 62 二 主要性质贝诺酯无游离羧基 但其取代苯环在紫外区有特征吸收可用于含量测定 其结构中有乙酰化的芳伯氨基 经酸水解后可显芳香第一胺的鉴别反应 由于邻位的羟基取代 使本类药物在弱酸性溶液中可与三价铁离子生成紫色配位化合物 为本类药物的特征鉴别反应 亦可用于水杨酸酯类药物中游离水杨酸的检查 水杨酸酯类结构易于水解 生成游离水杨酸 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第一节典型药物的分类与性质 二 水杨酸类 63 一 典型药物 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第一节典型药物的分类与性质 三 其它芳酸类 布洛芬氯贝丁酯 64 1 水杨酸及其盐类在中性或弱酸性条件下 可与三氯化铁试液反应 生成紫色配位化合物 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第二节鉴别试验 一 与铁盐的反应 该反应适宜的pH值为4 6 在强酸性溶液中此配位化合物可分解 65 2 苯甲酸盐的中性或碱性溶液 与三氯化铁试液可生成碱式苯甲酸铁盐的赭色沉淀 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第二节鉴别试验 一 与铁盐的反应 66 3 丙磺舒加少量氢氧化钠试液生成钠盐溶解后 pH约5 0 6 0 与三氯化铁试液反应 生成米黄色沉淀 产物的结构式为 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第二节鉴别试验 一 与铁盐的反应 67 4 布洛芬的无水乙醇溶液 加入高氯酸羟胺的无水乙醇试液及N N 双环己基羧二亚胺 DDC 的无水乙醇溶液 混合 在温水中加热20min 冷却后加高氯酸铁的无水乙醇溶液 呈紫色 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第二节鉴别试验 一 与铁盐的反应 68 5 氯贝丁酯的乙醚溶液数滴 加盐酸羟胺的乙醇饱和溶液与氢氧化钾的乙醇饱和溶液各2 3滴 水浴加热约2min 冷却 加稀盐酸使呈酸性 加1 三氯化铁溶液1 2滴 显紫色 其反应产物为羟肟酸铁配位化合物 该反应多用于羧酸及其酯类的鉴别 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第二节鉴别试验 一 与铁盐的反应 69 贝诺酯具有潜在的芳伯氨基 加酸水解后产生游离芳伯胺基结构 在酸性溶液中 与亚硝酸钠试液进行重氮化反应 生成重氮盐 再与碱性 萘酚偶合生成橙红色沉淀 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第二节鉴别试验 二 重氮化 偶合反应 三 氧化反应 甲芬那酸的硫酸溶液 加热后显黄色 并有绿色荧光 与重铬酸钾试液反应 呈深蓝色 随即变为棕绿色 70 1 阿司匹林与碳酸钠试液加热水解 得水杨酸钠及醋酸钠 加过量稀硫酸酸化后 生成白色水杨酸沉淀 并产生醋酸的臭气 分离的沉淀物可溶于醋酸铵试液中 于100 105 干燥后 熔点为156 161 2 双水杨酯与氢氧化钠试液煮沸 水解生成水杨酸盐 对水杨酸盐的鉴别反应呈阳性 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第二节鉴别试验 四 水解反应 71 1 苯甲酸盐可产生苯甲酸 苯甲酸受热后可升华 此性质可用于鉴别 如苯甲酸钠置于干燥试管中 加少量硫酸 加热 不炭化 试管壁上可观察到白色升华物 2 含硫的药物可分解后鉴别 如丙磺舒高温加热时 可产生二氧化硫的特殊臭味 与氢氧化钠共熔融 可分解生成亚硫酸钠 经硝酸氧化成硫酸盐 显硫酸盐反应 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第二节鉴别试验 五 分解产物的反应 72 中国药典 采用紫外分光光度法鉴别本类的药物有 丙磺舒 布洛芬 贝诺酯 甲芬那酸 氯贝丁酯 二氟尼柳等 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第二节鉴别试验 六 紫外分光光度法 73 中国药典 采用红外分光光度法鉴别苯甲酸 丙磺舒 甲芬那酸 水杨酸 阿司匹林 二氟尼柳 对氨基水杨酸钠 贝诺酯以及布洛芬和氯贝丁酯 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第二节鉴别试验 七 红外分光光度法 苯甲酸的红外吸收图谱 溴化钾压片 74 药物制剂中由于有大量的辅料存在 常对原料药所采用的某些鉴别方法产生一定的干扰 可采用色谱法分离后进行鉴别 薄层色谱法 TLC 设备简单 操作方便 故较为常用 中国药典 采用TLC法鉴别二氟尼柳胶囊 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第二节鉴别试验 八 薄层色谱法 75 当含量测定项下采用高效液相色谱法 HPLC 时 可直接使用含量测定项下记录的色谱图进行鉴别 中国药典 鉴别阿司匹林肠溶胶囊与泡腾片的方法如下 在含量测定项下记录的色谱图中 供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第二节鉴别试验 九 高效液相色谱法 76 一 合成工艺 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第三节特殊杂质检查 一 阿司匹林中特殊杂质的检查 77 二 检查1 溶液的澄清度检查碳酸钠试液中的不溶物 此类不溶性杂质包括未反应的酚类 或水杨酸精制时温度过高 发生脱羧副反应而生成的苯酚 以及合成工艺中由其它副反应生成的醋酸苯酯 水杨酸苯酯和乙酰水杨酸苯酯等 这些杂质均不溶于碳酸钠试液 而阿司匹林可溶于碳酸钠试液中 利用杂质与阿司匹林在碳酸钠试液中的溶解性差异控制限量 具体方法取本品0 50g 加温热至约45 的碳酸钠试液10ml溶解后 溶液应澄清 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第三节特殊杂质检查 一 阿司匹林中特殊杂质的检查 78 二 检查2 水杨酸生产过程和贮藏过程中均可能引入杂质水杨酸 由于水杨酸分子中的酚羟基在空气中容易被氧化生成一系列对人体有害的醌式结构的有色杂质 因此在所有能引入水杨酸杂质的药物及制剂 游离水杨酸都是必须检查的项目 中国药典 2005年版 采用比色法和高效液相色谱法检查游离水杨酸 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第三节特殊杂质检查 一 阿司匹林中特殊杂质的检查 79 一 合成工艺与间氨基酚的产生对氨基水杨酸钠的合成工艺有很多 其中以间氨基酚为原料的生产工艺最为常见 因此在成品中可能含有未反应完全的原料 另外 对氨基水杨酸钠不稳定 在潮湿的环境中 暴露日光或受热时容易脱羧生成间氨基酚 间氨基酚在体内可致癌 因此对氨基水杨酸钠中需要对间氨基酚这一特殊杂质进行检查 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第三节特殊杂质检查 二 对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查 80 81 二 双相滴定法及其原理利用间氨基酚易溶于乙醚而对氨基水杨酸钠不溶于乙醚的特性 用乙醚提取后 在提取液中加入适量水和指示剂后 用盐酸滴定液滴定 生成的间氨基酚盐酸盐不溶于乙醚层 以消耗一定量盐酸滴定液来控制其限量 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第三节特殊杂质检查 二 对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查 82 三 高效液相色谱法在此方法中 选用氢氧化四丁基铵为离子对试剂 同时采用磷酸盐缓冲体系 检测波长为254nm 反相离子对色谱法是指在采用反相分配色谱进行分离可能离解生成有机离子的有机化合物时 在流动相或者在样品中加入与有机离子带相反电荷的有机物 使其与待分析的有机离子形成离子对然后进行分析 从而调整色谱保留行为 提高样品保留值和色谱峰的对称性 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第三节特殊杂质检查 二 对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查 83 一 合成工艺 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第三节特殊杂质检查 三 二氟尼柳中特殊杂质的检查 84 二 有关物质检查由于二氟尼柳有多条合成路线 因此可能存在多种合成中间体及副产物 且结构与性质相差较大 单一的检测方法难以完全检出有关物质 因此 中国药典 采用TLC 正相 和反相HPLC法 以自身对照法检查有关物质A和B 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第三节特殊杂质检查 三 二氟尼柳中特殊杂质的检查 85 一 合成工艺 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第三节特殊杂质检查 四 甲芬那酸中特殊杂质的检查 1 由于合成工艺中使用铜作催化剂 因此 中国药典 规定检查铜 采用原子吸收分光光度法 86 2 有关物质的检查 中国药典 采用高效液相色谱法测定 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第三节特殊杂质检查 四 甲芬那酸中特殊杂质的检查 87 一 合成工艺 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第三节特殊杂质检查 五 氯贝丁酯中特殊杂质的检查 88 二 对氯酚的检查 GC取本品10 0g 加氢氧化钠试液20ml 振摇提取 分取下层液 用水5ml振摇洗涤后 留作挥发性物质检查用 上述水洗液并入碱性提取液中 用三氯甲烷振摇洗涤2次 每次5ml 弃去三氯甲烷液 加稀盐酸使成酸性 用三氯甲烷提取2次 每次5ml 合并三氯甲烷提取液 并加三氯甲烷稀释成10ml 作为供试品溶液 另取0 0025 对氯酚的三氯甲烷溶液作为对照品溶液 照气相色谱法 用2m玻璃色谱柱 以甲基硅橡胶为固定液 涂布浓度为5 在柱温160 测定 含对氯酚不得过0 0025 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第三节特殊杂质检查 五 氯贝丁酯中特殊杂质的检查 89 一 直接滴定法本类药物的游离羧基有较强酸性 因此可用碱滴定液直接滴定 中国药典 采用直接滴定法对苯甲酸 丙磺舒 水杨酸 二氟尼柳 双水杨酯 布洛芬和阿司匹林原料药的含量进行测定 滴定应该在不断振摇下快速进行 否则会因碱局部浓度过大引起阿司匹林水解 温度控制在0 40 之间为宜 本法缺乏专属性 易受水杨酸及醋酸的干扰 因此不宜用于水杨酸含量较高样品的测定 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第四节含量测定 一 酸碱滴定法 90 二 水解后剩余滴定法利用阿司匹林在碱性溶液中易于水解的特性 加入定量过量的氢氧化钠滴定液 加热使其酯键水解 剩余氢氧化钠滴定液用硫酸滴定液返滴定 碱液在受热时易吸收二氧化碳 用酸返滴定时 酸滴定液的消耗将减少 使得测定结果偏高 故需在相同条件下用空白试验校正 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第四节含量测定 一 酸碱滴定法 91 三 两步滴定法1 阿司匹林片含量测定因为片剂中除加入了少量的酒石酸或枸橼酸作稳定剂外 制剂工艺中又有可能产生水杨酸与醋酸 因此不能直接采用氢氧化钠滴定法或水解后剩余滴定法测定 而需要首先中和供试品中共存的各种酸 同时中和了阿司匹林的游离羧基 然后再照 水解后剩余滴定法 测定 因本法分两步进行 所以称为 两步滴定法 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第四节含量测定 一 酸碱滴定法 92 三 两步滴定法2 氯贝丁酯含量测定氯贝丁酯具有酯结构 可采用加碱水解后剩余滴定法测定其含量 但在合成过程中易引入酸性杂质 从而使测定结果偏高 因此 为消除供试品中共存酸性杂质的干扰 采用两步滴定法测定 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第四节含量测定 一 酸碱滴定法 93 对氨基水杨酸钠具有芳伯氨基 用盐酸酸化后可与亚硝酸钠定量发生重氮化反应 生成重氮盐 因此可以用亚硝酸钠滴定法 永停法指示终点 测定对氨基水杨酸钠及其制剂的含量 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第四节含量测定 二 亚硝酸钠滴定法 94 苯甲酸钠为芳酸碱金属盐 易溶于水 其水溶液呈碱性 可用酸碱滴定液滴定 但在滴定过程中析出的游离苯甲酸微溶于水 使溶液浑浊 且由于其具有一定的酸性 可形成一定的缓冲体系而使滴定终点pH突跃不够明显 干扰滴定终点的准确判断 因此 利用苯甲酸能溶于有机溶剂的性质 在水相中加入与水不相混溶的有机溶剂 将滴定过程中产生的苯甲酸不断萃取入有机溶剂中 降低苯甲酸在水相中的量 使滴定反应完全 终点易于判断 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第四节含量测定 三 双相滴定法 95 一 直接紫外分光光度法如贝诺酯的测定方法如下 取本品适量 精密称定 加无水乙醇溶解并定量稀释制成约含7 5 g ml 1的溶液 照紫外 可见分光光度法 在波长240nm处测定吸光度 另取贝诺酯对照品 精密称定 同法测定 计算 即得 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第四节含量测定 四 紫外分光光度法 96 二 离子交换 紫外分光光度法氯贝丁酯在波长226nm处有最大吸收 可用紫外 可见分光光度法测定含量 但对氯酚等有关杂质亦有吸收 对测定有干扰 由于对氯酚 对氯苯氧异丁酸等显酸性 可发生离解的性质 USP 29 采用阴离子交换色谱分离后 再用紫外 可见分光光度法测定含量 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第四节含量测定 四 紫外分光光度法 97 三 柱分配色谱 紫外分光光度法USP 29 采用柱分配色谱 紫外分光光度法测定阿司匹林胶囊中阿司匹林和水杨酸的含量 1 水杨酸限量测定色谱柱的制备标准溶液的制备供试溶液的制备测定法 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第四节含量测定 四 紫外分光光度法 98 三 柱分配色谱 紫外分光光度法2 阿司匹林的含量测定色谱柱的制备填充剂为硅藻土3g和新制碳酸氢钠液 1 12 2ml的混合物 标准溶液的制备取阿司匹林对照品 以冰醋酸的三氯甲烷溶液 1 100 为溶剂 制成含50 g ml 1的溶液 供试溶液的制备测定法 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第四节含量测定 四 紫外分光光度法 99 以 中国药典 测定布洛芬缓释胶囊为例 测定法取装量差异项下的内容物 混合均匀 精密称取适量 约相当于布洛芬0 1g 置200ml容量瓶中 加甲醇100ml 振摇30min 加水稀释至刻度 摇匀 滤过 取续滤液20 l注入液相色谱仪 记录色谱图 另取布洛芬对照品适量 精密称定 同法测定 按外标法以峰面积计算 即得 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第四节含量测定 五 高效液相色谱法 100 经临床验证 低剂量口服阿司匹林 ASA 可抑制血小板过度凝集 预防缺血性脑血管病的作用 而阿司匹林口服时剂量小 且容易水解 因此可以采用LC MS MS方法灵敏地进行测定 样品处理方法将血浆样品于室温下解冻并混匀后 取200 L加入1 5ml离心管中 再加入50 L1mol L 1的盐酸和200 L的内标 混匀后加入600 L乙酸乙酯 振荡1min 13000r min 1离心5min 取上层清液 氮气吹干 加入300 L流动相复溶 10 L进样 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第五节体内药物分析 一 血浆中阿司匹林和水杨酸的LC MS MS定量测定法 101 结果表明 HPLC MS MS测定方法灵敏度高 特异性强 满足了准确测定人血浆中阿司匹林和水杨酸浓度的要求 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第五节体内药物分析 一 血浆中阿司匹林和水杨酸的LC MS MS定量测定法 102 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第五节体内药物分析 二 人血浆中布洛芬对映体的柱切换高效液相色谱测定法 布洛芬是一类应用广泛的非甾体解热镇痛药 其左右旋体在体内的药理活性及代谢过程存在显著的差异 体外实验表明其右旋体的药理作用是左旋体的160倍 但在体内仅为1 4倍 主要原因是在体内无活性的R 布洛芬转化为活性的S 布洛芬 因此布洛芬对映体的拆分测定十分必要 采用手性色谱柱来检测手性异构体是一种非常有效的分析方法 实验结果显示柱切换HPLC法测定人血浆中布洛芬对映体浓度 血浆用量少 重现性好 准确度高 血样预处理操作简便易行 103 第五章芳酸及其酯类药物的分析 第五节体内药物分析 三 血浆中二氟尼柳的固相萃取 反相HPLC测定法 采用固相萃取方法 以大孔网格树脂小柱净化样本 用快速 灵敏的反相HPLC法测定人血