中医药大学开题报告模板.doc

.广州中医药大学 科学学位硕士研究生学位论文开题报告姓 名袁智先院、所研究生进修班2010级学号201001018导师姓名专 业中医骨伤研究方向中药药效研究拟定学位论文题目麻杏石甘治疗过敏性哮喘的药效研究本研究题目是否属导师课题的一部分？如果是的话，属哪一部分？并注明该课题名称、编号、经费来源 国家计委，科委项目/国家经贸委项目（ ） 教育部人文、社会科学研究项目 （ ） 国家自然科学基金项目 （ ） 省(自治区、直辖市)项目 （ ） 学校级项目 （ ） 国际合作项目/与港、澳、台合作项目（ ） 导师课题 （ ） 自选课题 （ ） 其它 （ ）学位论文的类型（）1 基础研究（ ）2 应用基础（ ）3 应用研究（ ）4 其 他（ ）;.一、 选题依据（包括研究目的、意义，国内外研究现状和发展趋势评述，并附参考文献）：（一） 研究目的和意义麻杏石甘汤记载于伤寒论辨太阳病脉证并治，原文说”发汗后，不可更行桂枝汤，汗出而喘，无大热者，可与麻黄杏仁甘草石膏汤。”本条所指的发汗后，是指太阳病发汗不得法，或发汗太过，或误用下法，均可使邪热内传，病情转重。因其邪热内传，则表示大热，汗出而喘是肺热壅盛所致。因肺主气，外合皮毛，热壅于肺，津液外走毛窍，故汗出；肺司呼吸，热盛则气逆，故喘，由此可见，汗出而喘，症候已发生改变，不可再用桂枝汤，而应以麻杏石甘汤清热宣肺止喘。其中的麻黄配石膏，清热透邪，宣肺定喘，且石膏用量多于麻黄，以制约麻黄辛温之性而为平凉之用，故汗出不忌麻黄，无大热不忌石膏，正所谓治病必求其本。杏仁宣降肺气，配麻黄则增强治喘之力，甘草安胃和中，调和诸药。后世用于风寒化热，或风热犯肺，以及内热外寒，但是邪热壅肺之身热喘咳，口渴脉数，无论有汗、无汗，皆可以本方加减而获效。而风寒咳喘，痰热壅盛不可用此方。本课题所研究的麻杏石甘汤方由麻黄、杏仁、甘草、甘草、石膏，理研究表明，麻杏甘石汤临床上用于治疗哮喘、荨麻疹等疾病，取得较好疗效，从现代免疫学角度分析，哮喘和荨麻疹均属第一型变态反应性疾病，防治第一型变态反应性疾病，首先要控制其发生的几个主要环节，其中防止过敏原进入机体外，在机体方面，可控制IgE的产生；阻断IgE与肥大细胞的嗜酸性粒细胞结合，抑制肥大细胞释放生物活性物质；阻止生物活性物质作用于效应器官以及解除效应器官反应等。本文采用Schwartz等法进行大白鼠腹腔肥大细胞脱颗粒实验，说明麻杏甘石汤有抑制肥大细胞脱颗粒作用，证明本方还有一定的抑制效应器官反应的作用，可缓解由于抗原刺激而增强的肠管蠕动，能保护肠管中肥大细胞免受抗原的攻击。上述实验表明，麻杏甘石汤对肥大细胞脱颗粒、抗原刺激致敏肠管释放组织胺以及对致敏肠管蠕动的影响，可在一定程度上说明本方治疗第一型变态反应的机理。国内外研究现状1 中医对麻杏石甘汤的认识1.1麻杏石甘汤用法麻黄、杏仁、甘草、石膏四味，以水七升，煮麻黄，减二升，去上沫，内诸药，煮取二升，去滓。温服一升（现代用法：水煎温服）。1.2麻杏石甘汤功用辛凉宣泄，清肺平喘：用于外感风热，或风寒郁而化热，热壅于肺，而见咳嗽、气急、鼻煽、口渴、高热不退，舌红苔白或黄，脉滑数者。常用本方配伍鱼腥草、黄芩、瓜蒌、贝母等，治疗急慢性支气管炎、肺炎以及麻疹合并肺炎。1.3麻杏石甘汤方解君药：麻黄，辛甘温，宣肺解表而平喘，石膏，辛甘大寒，清泄肺胃之热以生津两药相配，既能宣肺，又能泄热。臣药：杏仁，苦降肺气，止咳平喘，既助石膏沉降下行，又助麻黄泻肺热。佐使：炙甘草，顾护胃气，防石膏之大寒伤胃，调和麻黄、石膏之寒温。1.4配伍特点纵观全方，药仅四味，配伍严谨，清宣降三法俱备，共奏辛凉宣泄，清肺平喘之功。1.5注意事项本方出自伤寒论，原治太阳病，发汗未愈，风寒入里化热，“汗出而喘”者。后世用于风寒化热，或风热犯肺，以及内热外寒，但见肺中热盛，身热喘咳，口渴脉数，无论有汗、无汗，便以本方加减治疗，都能获效。对于麻疹已透或未透而出现身热烦渴，咳嗽气粗而喘，属疹毒内陷，肺热炽盛者，亦可加味用之。1.6病症分析风热袭表，表邪不解而入里，或风寒之邪郁而化热入里，邪热充斥风外，故身热不解、汗出、口渴、苔黄、脉数；热壅于肺，肺失宣降，故咳逆气急，甚则鼻煽。若表邪未尽，可在卫气被郁，毛窍闭塞而无汗；苔薄白，脉浮亦是表证未尽之征。1.7文献摘要医宗金鉴删补名医方论柯琴：“石膏为清火之重剂，青龙、白虎皆赖以建功，然用之不当，适足以招祸。故青龙以无汗烦躁，得姜桂以宣卫外之阳也；白虎以有汗烦渴，须粳米以存胃中津液也。此但热无寒，故不用姜桂，喘不在胃而在肺，故于麻黄汤去桂枝之监制，取麻黄之开，杏仁之降，甘草之和，倍石膏之大寒，除内外之实热，斯溱溱汗出，而内外之烦热与喘悉除矣。1.8临床应用及研究1.8.1辨证要点：本方为治疗表邪未解，邪热壅肺之喘咳的基础方。因石膏倍麻黄，其功用重清宣肺热，不在发汗，所以临床应用以发热、喘咳、苔薄黄、脉数为辨证要点。 伤寒论原用本方治疗太阳病，发汗未愈，风寒入里化热，“汗出而喘”者。后世用于风寒化热，或风热犯肺，以及内热外寒，但见邪热壅肺之身热喘咳、口渴脉数，无论有汗、无汗，皆可以本方加减而获效。 对于麻疹已透或未透而出现身热烦躁、咳嗽气粗而喘属疹毒内陷，肺热炽盛者，亦可以本方加味。1.8.2加减变化：如肺热甚，壮热汗出者，宜加重石膏用量，并酌加桑白皮、黄芩、知母以清泄肺热；表邪偏重，无汗而恶寒，石膏用量宜减轻，酌加薄荷、苏叶、桑叶等以助解表宣肺之力；痰多气急，可加葶苈子、枇杷叶以降气化痰；痰黄稠而胸闷者，宜加瓜蒌、贝母、黄芩、桔梗以清热化痰，宽胸利膈。1.8.3现代运用：本方常用于感冒、上呼吸道感染、急性支气管炎、支气管肺炎、大叶性肺炎、支气管哮喘、麻疹合并肺炎等属表邪未尽，热邪壅肺者。1.8.5使用注意：风寒咳喘，痰热壅盛者，非本方所宜。2、现代医学对麻杏石甘汤的认识2.1对免疫功能的影响：中药由267%麻杏石甘汤口服液加生理盐水，按5：3稀释而成。观察麻杏石甘汤对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响：取健康昆明种小鼠16只，体重18-22g，随机分为两组，每组8只，雌、雄各半，中药组用上药0.4ml/日灌胃，对照组用等量生理盐水灌胃，均连续灌胃8日。对小鼠脾指数的影响：取健康NIH种小鼠20只，体重22-25g，分组和给药方法同上，每组均连续灌胃10日。对小鼠血清溶血素含量的影响：取健康昆明种小鼠20只，体重22-25g，分组及给药方法同上，连续灌胃11日。对小鼠皮肤迟发反应的影响；取健康NIH种小鼠12只，体重18-22g，分组和经药方法同上，每组可续灌胃12日。结果：麻杏石甘汤可提高患儿细胞免疫功能，调整T淋巴细胞亚群间的比例关系，使小白鼠吞噬指数、脾指数、血清溶血素增高，使小白鼠皮肤迟发反应增强。又有报道，采用水煎醇沉法制成267%制剂，加生理盐水按5:6稀释后，置4冰箱贮存备用。取健康小白鼠26只，体重18-22g，随机分成中药组和对照组。中药组按0.4ml/天剂量灌胃，每日1次，对照组用等量生理盐水灌胃，各组连续灌胃7日，第8日采血，分离血清，用琼脂平板打孔法测定溶菌酶含量，进行组间比较。分组给药方法同连续灌胃7日，未次给药后每只小白鼠腹腔注射5%绵羊红细胞1ml，并于3小时后腹腔注射生理盐水2ml，然后处死动物，吸出腹腔液，以2000转/分钟离心沉淀10分钟，弃上清液，涂片并用瑞氏染液染色，镜检计算吞噬率及吞噬指数。取健康小白鼠20只，体重18-22g，分组及灌胃方法同，连续灌胃11日，各组均在给药第4日，用10%新鲜羊红细胞进行小白鼠腹腔免疫，0.5ml/只，于实验第11日摘眼球取血，分离血清，进行血清凝集素试验，测定抗体效价，采用RPMI“1640”培养液（1%“1640”、20%胎牛血清、青霉素100U，链霉素100g/ml)，pH7.4，每瓶2.5ml，试验时每瓶加入兔肝素0.2ml抗凝血，并分别加入0.15ml，0.1ml，0.05ml三种剂量的麻杏石甘汤（药物浓度调至100%，每瓶1个剂量，同时设阳性对照组（上海生物化学研究所产品PHA10滴)和阴性对照组（即不加中药也不加PHA)，经37孵育70小时后离心沉淀，弃上清液，将沉淀物灌入毛细玻璃管，离心分离白细胞，涂片并用瑞一姬混合染液染色，镜检计算淋巴细胞转化率。实验结果：麻杏石甘汤能提高小白鼠巨噬细胞的吞噬率和血清溶菌酶含量，促进淋巴细胞转化，从而使非特异性和特异性免疫功能均有所提高。2.2退热作用：实验以家免为对象、造型、采用灌胃法给药对麻杏石甘汤、生熟、石膏的退热作用进行了对比观察。结果表明：3者都有不同程序的退热作用。同时既为本方为本方中的有机、无机两类成分的“协同”作用提供了佐证，也会它属络合物药物的实际应用展示了前景。2.3对荨麻疹的治疗作用：选择体重2.5-3.0kg家兔10只，雌雄不拘，分给药组和对照组。用20%乌拉坦8ml/kg行腹腔麻醉后，用12号导尿管从口腔插入胃中，将家兔仰位固定。在颈部正中线切口，插入气管插管，气管插管分叉一端与马氏气鼓相连，另一端自然呼吸。在气管右侧的颈A做“V”型切口，远心端结扎，近心端插入与水银检压计相连，含7%枸橼酸钠溶液的动脉套管经检压计连马氏气鼓。在腹部正中打开腹腔，找中段空肠一段，在肠壁切1.0cm切口，将可充水小指套缓缓送入肠腔内，荷包缝合肠壁，关闭腹腔，通过一段橡皮管将肠内指套连接在马氏气鼓上，将肠内指套充满水，肠蠕动推动描记波型。而后开动烟鼓，记录一段正常血压、呼吸、肠蠕动波，然后通过胃管灌药（麻黄、杏仁、石膏、甘草，各约成人量的1/2，按常规煎药法，煎成50ml)，继续观察波型。结果发现：给药组家兔血压有明显升高趋势，心率减慢，呼吸变浅减慢，肠蠕动增强。而对照组给与等量水50ml，结果对家兔血压、呼吸、肠蠕动均无影响。证明麻杏石甘汤对荨麻疹之血管变态反应之病理有拮抗作用。参考文献1李兴，王广生，张德清中西医结合治疗小儿支气管肺炎64例 河南中医学院学报，2006，21(4)：53542袁壮小儿支原体肺炎诊断治疗中的几个问题 中国实用儿科杂志，2002，17(8)：4493岱明，王晓红，陆权，等门冬氨酯阿奇霉素治疗儿童肺炎的临床疗效及安全性fJ1_中国实用儿科杂志，2003，18(12)：7494Darko Stefanovski,Joyce M.Richey,et al.Consistency of the Disposition index in the face of diet induced insulin resistance:potential role of FFA.Plos one,2011.6(3):1-8.5Magda,M.,M.Hennes,and E.Shrago,m Receptor and post receptor effects of free fatty acids(FFA)on hepatocyte insulin dynamicsJ.Int J Obes,1990.14(10):831-834.二、研究内容（说明课题的具体研究内容，重点解决的问题，预期的研究成果）：（一）具体研究内容 1、过敏性哮喘大鼠模型的建立； 2、麻杏石甘汤组方对过敏性哮喘大鼠的哮喘治疗的功效； 3、麻杏石甘汤组方对过敏性哮喘大鼠免疫介质分泌的影响； 3、麻杏石甘汤组方对过敏性哮喘大鼠作用机制的探讨。（二）重点解决的问题 1、过敏性哮喘大鼠模型的制备方法； 2、采用Schwartz等法进行大白鼠腹腔肥大细胞脱颗粒实验； 3、电镜观察肺泡内免疫反应敏感程度。（三）预期研究成果 1、通过实验评价麻杏石甘汤治疗过敏性哮喘的功效，为进一步研究提供依据。2、将研究成果发表于核心期刊杂志。;.三、研究方案设计（包括研究方法，技术路线，理论分析、计算、实验方法和步骤及其可行性，可能出现的技术问题及解决办法等）：（一）研究方法1 实验材料1.1 实验动物 SD大鼠，SPF级，雄性，体重160-180g。1.2 饲料配方 (1) 高脂饲料：普通基础饲料51.8%，蛋黄粉20%，猪油7%，奶粉5%，白糖5%，鱼肝油20d/kg，花生2%，黄豆5%，食盐1%，麻油0.5%。(2) 普通饲料：大麦粉20、脱水菜（去除水分的包心菜）10、豆粉20、酵母1、骨粉5、玉米粉16、麸皮16、鱼粉10、食盐2。1.3 受试药物 麻杏石甘汤组方，低剂量为临床用量的10倍，中剂量为临床用量的20倍，高剂量为临床用量的30倍。 1.4 仪器 全自动生化分析仪；TD25WS多管架自动平衡离心机；分析天平；电子天平；T1000恒温水浴箱；高温高压灭菌器；酶标仪；可调式移液枪；低温高速离心机；低温冰箱；超净工作台；匀浆器；涡旋仪；实时荧光定量RT-PCR；核算蛋白检测仪；扫描电镜。 1.5 试剂 葡萄糖试剂盒;TG试剂盒；TC试剂盒；HDL-C试剂盒；LDL-C试剂盒；逆转录试剂盒；RT-PCR试剂盒；葡萄糖；生理盐水；氯仿；异丙醇；乙醇；DEPC；TE buffer；Trizol。2.实验方法2.1支气管哮喘大鼠模型的制备 SD大鼠，随机分为正常组和支气管哮喘组，每天定量给予饲料，正常组给予普通饲料，支气管哮喘组给予麻杏石甘汤混合饲料，自由饮水，造模时间6周，每周称重一次。2.2 动物分组及给药方法 造模6周后，支气管哮喘组大鼠体重显著高于正常组大鼠体重提示为造模成功，将高脂组大鼠随机分成4组，分别为模型组，支气管哮喘组分为高、中、低剂量组，每组10只。从第7周开始灌胃给药，正常组、模型组给予蒸馏水，灌胃体积为1ml/100g，给药组按高、中、低剂量给予受试药物，每天给药1次，连续6周，每天记录摄食量，每周称重一次，计算食物利用率。2.3 检测指标及方法 （1）摄食量、食物利用率：每天定量给予饲料，称取剩余饲料，计算摄食量；每周称重一次，计算一次食物利用率，食物利用率=（同期内体重的增量/同期内的摄食量）100%。（2）体重、体长、Lees指数：每周称重一次，观察各组体重变化；连续给予受试样品6周后，禁食不禁水12h，称取体重，乙醚麻醉后测定大鼠的体长（鼻尖至肛门的长度，cm），计算Lees指数，Lees指数 =体重1/3(g)1000体长（cm）。（3）脂肪重量、脂体比：连续给予受试样品6周后，禁食不禁水12h，称取体重，解剖取肾脏和生殖器周围的脂肪称取脂肪湿重，计算脂体比，脂体比=脂肪重量(g)/体重（100g）。（4）血清生化指标：给予受试样品6周后，禁食不禁水12h小时，乙醚麻醉后眼眶静脉采血3ml，分离血清，用全自动生化分析仪测定各组动物血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C的含量。（5）糖耐量测定：连续给予受试样品6周后，禁食不禁水12h，乙醚麻醉，眼眶取血测定空腹血糖值(0h)，然后灌服葡萄糖溶液(2.5g/kg) , 分别于给糖后1 h、2 h 取血测血糖值,血糖测定按葡萄糖氧化酶-过氧化酶法, 操作方法及步骤按试剂盒上要求进行。（6）血清瘦素、神经肽Y、游离脂肪酸、肝酯酶、脂蛋白酯酶含量测定：乙醚麻醉，眼眶取血，2000rpm离心10min，血清-20保存，按各试剂盒要求测定。（7）肝系数、肝组织电镜：给予受试样品6周后，禁食不禁水12h小时，解剖取肝脏，称重，置于冰上剪取50mg肝组织，修剪成1mm*1mm大小，放入预冷的固定液中，经预处理、切片后扫描电镜观察。（8）下丘脑瘦素受体基因、神经肽Y mRNA表达水平测定：给予受试样品6周后，禁食不禁水12h小时，解剖取肾及睾丸周围脂肪组织，称重，剪取50mg放入预冷的PCR管中，迅速放入液氮中，速冻后放入-80，用实时荧光定量RT-PCR检测瘦素、脂联素mRNA表达水平。2.4 统计方法 实验数据用SPSS17.0统计软件进行统计分析，各组测定值用均数标准差（）表示，采用t检验，多组间比较用方差分析。（二） 技术路线高脂组正常组纤体高剂量组纤体中剂量组纤体低剂量组高脂模型组减肥作用：摄食量、食物利用率、体重、体长、李氏指数、脂肪湿重、脂体比调脂作用：肝脏系数肝组织电镜血糖调节作用：空腹血糖含量测定糖耐量实验血清游离脂肪酸含量测定；血清肝酯酶、脂蛋白酯酶活性测定血清瘦素、神经肽Y含量测定；下丘脑瘦素受体、神经肽Y基因表达水平测定；脂肪组织HE染色四、可行性分析 1理论基础：本课题实验方法在国内外文献中均有报道，研究方法可靠。 2仪器设备基础：