脓汁、粪便标本微生物学检验.doc

检验微生物期末考查 【要求】在规定时间内独立完成其细菌学检验并写出实验报告上交【实验设计】1、 主要材料与试剂 试 剂：氧化酶，3%H2O2，兔血浆，胆盐溶液，Optochin药片，革兰染色液配套试剂，吲哚试剂，沙门、志贺菌诊断血清 培养基：血平板，SS平板，KIA斜面培养基，MIU培养基，2、 检验程序设计与原理（结合自己的检验标本来写，包括实验条件）涂片染色镜检 + 葡萄球菌 链球菌分离培养（血平板） 直接涂片染色镜检 脓汁标本35,pH7.47.61824h,有氧观察菌落形态触酶试验Optochin药敏试验/胆汁溶菌酶试验+ 肺链 其他链球菌观察脓汁性状(颜色、气味等)G+ G氧化酶试验血浆凝固酶试验+ 金黄色葡萄球菌 其他葡萄球菌+ 绿脓杆菌 肠道杆菌KIA/MIU初诊挑取无色菌落涂片染色镜检 分离培养（SS平板） 粪便标本35,pH7.47.61824h,有氧观察菌落形态观察粪便性状(颜色、气味等) G氧化酶试验 +肠道杆菌 绿脓杆菌确诊 血清学鉴定 KIA/MIU【微生物学诊断】脓汁标本P30：乙型溶血性链球菌粪便标本S28：福氏志贺菌【实验讨论】1 脓汁标本P30检验时，血平板培养24h后，可见溶血环，不是草绿色溶血环，排除甲链、肺链，也不像完全溶血，不能确定是乙链，做optochin试验和胆汁溶菌酶试验均为阴性，确定不是肺链，测量血琼脂平板厚达6mm,可知是因为血平板太厚，导致溶血没有溶透平板。故根据菌落形态结合革兰染色特点（G+链球菌）可知该标本致病菌为：乙型溶血性链球菌2 粪便标本S28检验时，由于肠道正常菌群存在，故直接革兰染色镜检无意义，SS强选择平板培养24h后，平板可见红色菌落和无色半透明菌落两种，红色为埃希菌属，无色为可疑致病菌，故应挑取无色菌落进行随后的各种检验。3 临床上检出致病菌后，还应做药敏实验来指导临床医生用药，以减少细菌耐药，同时达到有效抑菌或杀菌的效果。常用k-b纸片扩散法或肉汤稀释法来做。有条件可做联合药敏试验，根据实验结果，临床医生可联合多种抗生素协同抑菌或杀菌【附：实验原始记录】2012/11/12 周一 室温：17 阴讨论实验方案脓汁：1 革兰染色镜检，血平板培养2 若G+，则为葡萄球菌或链球菌，用触媒实验来区别，葡萄球菌（触酶+），链球菌（触酶）若G，则为肠道杆菌或假单胞菌，用氧化酶试验鉴别，肠道杆菌（氧化酶），假单胞菌（氧化酶+）3 葡萄球菌血平板培养可见，金葡为黄色菌落，因其分泌脂溶性黄色色素，其他葡萄球菌为白色或无色菌落，用血浆凝固酶鉴别，金葡（血浆凝固酶+），其他葡萄球菌（血浆凝固酶）。4 链球菌用菌落形态结合生化实验鉴别，乙链（溶血），甲链和肺链（溶血），在用optochin试验和胆汁溶菌酶试验鉴别，肺链+，甲链粪便1 革兰染色镜检，SS平板培养2 G，则为肠道杆菌或假单胞菌，用氧化酶试验鉴别，肠道杆菌（氧化酶），假单胞菌（氧化酶+）3 假单胞菌最常见为绿脓杆菌，可用O/F试验及草绿色水溶性色素，菌落生姜味来确定4 肠道杆菌用生化试验KIA/MIU鉴别到属，在用血清学实验鉴定到种（多价单价）2012/11/13 周二 室温：20 晴脓汁P30物理性状：西瓜红色脓汁，无特殊气味直接革兰染色镜检：10010油镜下可见：G+短链状排列球菌分区划线接种血琼脂平板，放optochin纸片，35温箱有氧孵育粪便S28物理性状：棕褐色，无特殊气味分区划线接种SS平板，35温箱有氧孵育2012/11/14 周三 室温：18 阴脓汁P30血平板上长出半透明细小菌落，直径0.5mm0.75mm，光滑湿润圆形，溶血环Optochin药敏实验（）因平板太厚，血未溶透，溶血环不太典型，做胆汁溶菌酶补充鉴定，结果（）确定该菌为：乙型溶血性链球菌粪便S28SS平板上长出两种菌落，一种为红色菌落，较大，光滑湿润圆形，根据菌落形态可知为埃希菌属，属正常菌群，无诊断价值；另一种为无色半透明菌落，中等大小，光滑湿润圆形，挑取该可疑菌落，革兰染色，结果为G-短杆菌，再进行氧化酶实验，结果（），证明为肠道杆菌，不是假单胞菌，继续接种K