实验四-DNA片段的回收.ppt_第1页
实验四-DNA片段的回收.ppt_第2页
实验四-DNA片段的回收.ppt_第3页
实验四-DNA片段的回收.ppt_第4页
实验四-DNA片段的回收.ppt_第5页
已阅读5页，还剩2页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

实验四DNA片段的回收 一 实验目的 掌握吸附膜回收琼脂糖凝胶中DNA片段的方法 二 实验原理 首先利用低熔点琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段 然后紫外光下切割含目的DNA条带的胶块 再利用胶回收试剂盒回收纯化DNA片段 在离心吸附柱内使用一种特殊的硅基质滤膜 这种滤膜在低PH值 高浓度盐 盐酸胍 NaI NaClO4等 存在的条件下 可以选择性吸附DNA片段 而蛋白质和其它杂质不会被吸附 再通过一系列漂洗 离心等步骤将残留的引物 核苷酸 蛋白质等杂质去除 最后用低盐 高PH值的洗脱缓冲液或水从滤膜上将纯净的DNA洗脱下来 回收DNA大小100bp 50kb 三 器材与试剂 1 实验仪器琼脂糖凝胶电泳系统紫外观察分析仪离心机单面刀片恒温水浴锅2 试剂胶回收试剂盒 四 实验步骤 1 在紫外灯下切分含DNA的琼脂糖块 尽可能除去多余的琼脂糖 称重后放入1 5ml离心管中 2 加入3 6倍体积溶胶液 600 lNaI溶液 55 温浴10min 期间不时振摇 3 将溶胶后溶液加入树脂柱中混匀 4 10000rpm离心1min 弃去收集管中液体 5 加入500 l漂洗缓冲液 振荡混匀后10000rpm离心1min 弃去收集管中液体 此过程重复一次 6 将吸附柱放回空收集管中 12000rpm空转2 3min 去除残液 7 加入30 l55 温浴的TE缓冲液 室温或55 下放置2 5min 8 12000rpm离心1min 回收液 20 保存备用 注意事项 1 切胶时应快速操作 在紫外灯下时间长容易伤害到眼睛 2 溴化乙锭染色后的DNA易受紫外光破坏 故尽量放置于暗室 切带时应使用长波长紫外灯 切胶时间尽量短 3 胶块一定要充分融化 否则将会严重影响DNA的回收率 4 把洗脱液加热 使用时有利于提高洗脱液效率 五
人人文库> 全部分类> 应用文书 > 研究报告

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论