MOH流行病培训-实验室支持PPT课件.ppt

现场调查中的实验室支持 中国CDC营养与食品安全所冉陆 实验室诊断的目的意义 识别暴发 确定病因 确定传染来源 确定流行范围 确定传播链 发现特殊的毒株 判断院内交叉感染 疫苗实施项目的考核 仲裁依据 临床 实验室 流调 围绕病因假设进行进一步证实共同的危险因素 专业知识 经验充分物质准备高度的责任心 围绕病因假设 采集实验样品 确定检验项目 采样 采样 采什么样什么时间采怎么采采多少样品的保存运送 采什么样 不同的检验目的病原分离 抗原 抗体等不同的疾病鼠疫耶尔森菌可以在人类血液 腺肿抽取物 痰液 咽拭子分离到 此外在咽部冲洗物 皮肤拭子或刮取物以及患有脑膜炎病人的脑脊液中均可分离到 进行尸体解剖时 应该采集腺肿 肝脏 脾脏以及肺脏标本 对于腐败的尸体应该抽取骨髓和脑组织 禽流感病原分离用咽 鼻拭子 含漱液应在发病的头3天采集 尸检材料肺 气管 肾 脾 肝 心脏 脑 血凝块等组织和淋巴结等重要器官 对疑诊感染性心内膜炎者 采动脉血培养可提高检出率 采什么样 人粪便 呕吐物 尿液 痰液 咽拭子 洗漱液 脑脊液 化脓灶 血液 头发 指甲 牙齿 尸检材料 胃内容物等环境水 土壤 餐具 厨具 食品包装 奶瓶等食品成品 半成品 调料 生鲜原料 蘑菇等媒介苍蝇 臭虫 蜱 螨 老鼠 蟑螂 果子狸 跳蚤等其他注射器 可疑药物 动植物等 采什么样 对照内对照外对照 什么时间采 氟乙酰胺在体内数小时后就开始转化为氟乙酸 血中在十余小时或数天后就检不出了氟乙酰胺 这个阶段体内氟乙酸浓度仍较高 所以应该采集患者的血样或尿样来检测氟乙酸 毒鼠强在体内代谢缓慢 中毒后数月后采集的血样对病因确定仍有重要价值 恢复期血清 副溶血弧菌病毒分离标本最好在发病初期 1 2天 采 怎么采 不同检验目的的样品细菌分离鼠疫耶尔森菌血培养标本至少在24小时之内做3份 腺肿抽取物 注射无菌生理盐水1ml 立即抽取 病毒分离抗原 抗体检测化学毒物检测无菌部位基因检测 木制的棉拭子 怎么采 样品采集程序采样用物品准备采样程序方法采样纪录样品编号样品保存 样本标签内容 样本编号 唯一性样本来源 从什么物质 材料中采集的 如病理采集的肝脏就可标注为某某患者肝脏 样本数量 包装中样本的数量 如此包装中同时采集了2块肝脏样本就要标注为2采样时间 采样地点 采样人 样本处理情况 抗凝剂 运送培养基 标本状况 开封食品 样本标签内容 最小包装 每个标本 每个包装箱每批样本后要附上一个样本清单 详细列出此批样本的名称 状态和注意事项 怎么采 疑为百草枯中毒患者的血液不能用玻璃试管 因为玻璃可以使百草枯钝化 钝化后的百草枯实验室是不能检出的 疑为一氧化碳中毒者应尽早抽血5 15毫升注入玻璃试管内 量要直装至瓶口 必须用密封玻璃塞塞紧 避免瓶中残留空气 血液是分析一氧化碳中毒的唯一检体 其他易挥发毒物样本也要尽量密封保存 尽快检测 如氰化物 对死亡患者一般从心腔内采集血液 也可采集腋下静脉 颈静脉 股静脉血液 心腔内血液和周围血中毒物浓度不同 病理样本采集 对可疑中毒患者在解剖前不要将尸体用福尔马林 酒精等化学物处理 解剖台要冲洗干净 所用的解剖器具 手套要预先冲洗干净 晾干备用 不要沾染消毒药液 如来苏 酒精 升汞溶液等 以免污染了检材 例如在解剖时使用了升汞溶液浸泡过的手套 手套上的升汞就可能对样本污染 会干扰了病因的判定 在尸体周围不要喷洒农药灭蚊蝇 以免污染可能用于毒物分析的检材 采多少 所有标本在采集时立即分装 一式N份 不同检验项目 重复实验 其它实验室复核 留样 样本采集的一般需要量样品种类检验目的样品量饮用水全分析及致病菌 5l液体食品致病菌或毒物分析可疑食物 200ml固体食品致病菌或毒物分析可疑食物 200g呕吐物致病菌或毒物分析 50g ml 洗胃液致病菌或毒物分析 200ml腹泻物致病菌或毒物分析 50g ml 血液病原分离 抗体分析 5ml脑脊液病原分离 2ml皮损分泌物病原分析灭菌生理盐水浸泡棉签涂取 样品的保存 介质和温度 检测目的细菌病毒寄生虫抗原抗体核酸化学毒物预期保存时间 样品的包装 感染性样本放射性样本易腐性样本挥发性样本 样品的运送 标本应由专业人员专人运送 最好使用专车 邮寄样品除患者检测血浆外 其他样本不宜通过邮寄方式转运 检测血浆用带盖的小塑料管盛装 外衬缓冲包装和吸附材料 通过EMS邮寄 在送邮件时要明确向邮局说明邮寄物品的成分及安全性 在运送过程中 要保证条件能够持续保障 样品的保存运送 安全性样品的安全环境的安全 不泄漏 不污染 交接手续 检验 检什么 实验项目要结合现场流行病学调查 临床 血检 电生理 影像学检查等结果 确定实验项目应同时考虑以下几点 早期IgM和双份IgG血清学检验 排泄物 分泌物 血液中的病原体的形态学 血清学和核酸分型鉴定 人体外环境病原鉴定结果与人体内抗原 抗体的吻合 匹配 毒力分析和动物实验模型佐证 病原侵入与发病的时间顺序 主导病原与併发病原的甄别 安排检验项目要有几套预备方案 实验的无果和失败 检什么 病原分离细菌 需氧菌 厌氧菌 兼性厌氧菌 L型菌病毒寄生虫血清学检查 抗原抗体急性期IgM抗体急性期和恢复期双份静脉血测定特异性IgG抗体 核酸检测特征基因 毒力基因 溯源比较定性 定量 我国爆发性食物中毒病原构成 美国爆发性食物中毒病原构成 主要传播途径是粪口传播 引起胃肠炎美国1996 2000年爆发348起 仅在2002年11 12月间 就接到来自华盛顿 新罕布什尔和纽约3个州的104起诺瓦克病毒引起的胃肠炎爆发报告日本仅2003年10月一个月 在青森 岩手和滋贺县三个县就相继发生4起诺瓦克病毒引起的胃肠炎爆发德国2001年发生的70起诺瓦克病毒爆发 诺瓦克病毒病毒 细菌性食物中毒的实验室诊断 致病菌的定量检验对细菌性食物中毒的调查 需要做定量检验的细菌 食物中毒与摄入量有关 产气荚膜梭菌 蜡样芽胞杆菌 变形杆菌 样品 中毒相关食品 粪便 呕吐物收集致病菌对人的最低感染剂量的资料危险性分析中对暴露量的评估摄入的菌量与产生有害健康作用的概率和程度成正相关 但通常不是呈线性关系 摄入菌量的增加通常降低肠道疾病的潜伏期 怎么检 灵敏度 准确度 重现性 不同方法结果的可比较性用什么标本用什么方法用什么试剂 对重大事件的毒物鉴定或样本检测要同时送数家具有鉴定检验资质的实验室同步开展工作 避免因实验室管理和技术因素对结果的影响 检测项目和方法的确定 分析方法的选用要考虑待测样品 原形 代谢物 分析要求 定性 定量 样品类型 实验室条件 分析目的等因素 还要考虑时效性 准确性 经济性等要求 有时毒物有定性结果即可说明问题 而对于那些有环境或内源性本底的毒物 或需用于现场评价 应急处理方法选择或用于患者治疗效果评价的要用定量分析 临床治疗药物监测必须进行定量分析 怎么检 快速灵敏方法的应用仪器自动化方法分离培养方法的改进 高选择性显色培养基 采集鼻咽标本 病毒分离 采集双份血清 快速抗原检测 核酸检测 组织培养 鸡胚培养 免疫色谱 免疫荧光 RT PCR 补结试验 血抑试验 微量中和试验 流感实验检测方案 结果的报告 解释 分析 结果的报告 解释 分析 实验室检测结果是确定病因的重要依据 但实验室结果要和现场调查情况 患者的临床表现一起分析 才能确定病因 检验结果的正确性不仅取决于实验室的条件和技术水平 同时还与检验样品的采集 保存 送样方法等方面有关 因此在分析检验结果时 除了应考虑结果是否符合有关实验室判定标准外 还应综合考虑各种困难影响检验结果的因素 阳性结果不一定能说明病原因子在爆发事件中的致病作用 反之阴性结果也不一定能完全否定某种病原因子的病因假设 结果的报告 解释 分析 从呕吐物中检出催眠镇静药物与从血中检测到超过中毒量及死亡量的镇静催眠药物无菌部位病原分离阳性食品 环境标本检出变形杆菌 产气荚膜梭菌 细菌性食物中毒的实验室诊断 要点 从相关食品及发病者中分离到相同的致病菌从同批发病者中分离到相同的致病菌从食品中分离到致病菌的致病特点与发病者的临床症状相符 检出限值和检验结果的表达 每个实验室对已经建立的检测方法都要进行准确性和灵敏性评价 还要争取开展与其它检测方法之间进行比较的工作 每批样本都要对方法进行检出限值 最低检出浓度 测算 并将最低检出限值在发出的检测报告中注明 对定量检测 如样本中毒物浓度超过检出限值 应标注出实际测出的数值 如在样本中检测出所检测的毒物 但毒物的量 或浓度 低于检出限值 应在检测报告中报告 检出 对在样本中未发现目标毒物 应该检测报告上注明 未检出 对定性检测 样本中检出目标毒物时在检验报告上注明 阳性 对未检出目标毒物者在检验报告上注明 阴性 结合流调资料分析检测结果 冲突结果的处理 每个重大中毒事件病因确定或中毒患者诊断的过程中都会有一次或多次毒物鉴定检测 各次检测结果应该有一致性 这些结果共同指向某一种 或多种 毒物 冲突的原因分析a 检测方法 所用的仪器不同 其灵敏度 精确度不同 每种方法都有其局限性 一种方法能够检出的另外一种方法可能检不出 b 每个实验室采用的实验方法不同 包括样本前处理 实验条件等对结果也有影响 c 用于分析的样本是来自不同的个体 材料 位置及同一不均匀样本的不同部位 这些都带来不同的分析结果 d 样本采集 运输 实验室操作过程中的污染 分离不到病原性微生物可能的原因有 检测项目 如农药和病原体品种 厌氧菌 L型细菌病原性微生物的数量很少 培养不出来细菌处于非可培养的状态现有的培养基和培养技术不适合这种微生物的生长技术 设备 试剂的原因新的病原微生物 未知毒物 某地学生不明原因发热临床病例相关标本检测情况 腺病毒检测 备注 a 补体结合试验结果 10对血清中3对抗体滴度4倍以上增长 3对抗体滴度2倍以上增长 3对抗体滴度小于1 8 1对抗体滴度4倍降低 某地学生不明原因发热临床病例相关标本检测情况 a 动物相关标本腺病毒检测情况 方法 荧光定量PCR标本 动物相关标本 份 苍蝇 份结果 全部阴性 病毒分离 方法 用Hep 2细胞分离病毒标本 咽拭子样本量 份结果 份发生细胞病变 细胞培养物经电镜观察证实为腺病毒 套式PCR阳性扩增产物10份 9份标本 经国家CDC确认为腺病毒7型 或3型 流行病学 实验室配合合作 流行病学 实验室 样本采集方案与检测人员沟通 便于以后实验室分析处理 共同商定分析方案 现场工作人员或临床医务工作者要和毒物分析人员多沟通 对现场情况 所收集样本的情况 现场工作的方向等进行讨论 确定应该检验的毒物种类以及是否需要定量 据此制定分析工作方案共同讨论对结果进行分析解释 提高实验室诊断率 采样 流行病 实验室 检验 实验室 报告 流行病 实验室 流行病 实验室沙门氏菌血清型监测资料的分析解释 S Saintpaul1 4 5 12 e h 1 2S Reading1 4 5 12 e h 1 5 实验室检测能力的提高 仪器方法技术管理培训质量控制人 常规分离鉴定染色液培养基