白血病细胞的免疫表达PPT课件.ppt

白血病细胞的免疫表达 史蔚03级交大教改班5031819004 1 研究方法 流式细胞术电镜荧光显微镜免疫组织化学 2 流式细胞术 FCM 流式细胞术白血病免疫分型是利用荧光素标记的单克隆抗体 McAb 作分子探针 多参数分析白血病细胞的细胞膜和细胞浆或细胞核的免疫表型 由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度 白血病形成的分化阻断学说 3 B细胞分化各时期的细胞膜表现型 4 5 流式细胞仪免疫分型实验 1 样本采集 运输 保存和操作2 样本制备单细胞悬液的制备分离靶细胞群体估细胞悬液细胞染色3 抗体组合的确定4 样本获取5 数据分析6 数据解释 6 电镜 EM 电镜不仅可以根据细胞超微结构发育状况提示幼稚细胞来源和功能状态进行诊断 也常常通过对红系各阶段细胞结构分析判断红系病态造血的原因 7 急性未分化或微分化型髓系白血病 MO A 幼稚细胞外形圆形或卵圆形 直径10um 核质比例高 核卵圆形 异染色质较多 核仁明显 细胞器少 8000 B 核膜MPO反应阳性 8000 8 急性巨核细胞白血病 AMKL A 小巨核细胞核不规则 有深切迹 异染色质较多 胞浆中可见sER构成管道网状系统 颗粒少见 6000 B 核膜和内质网PPO阳性反应 无阳性颗粒 6000 9 免疫组化 IHC 免疫组织化学 IHC 以其方法简单 特异性强 设备要求低 形态学与免疫学结合等优势 得到各级医院尤其是基层医院的广泛认可 成为其它方法不可完全取代的 血液系统肿瘤病理诊断 鉴别诊断与分型的常规检测手段 10 白血病细胞的免疫表达 急性T淋巴细胞白血病 T ALL 急性B淋巴细胞白血病 B ALL 急性髓系白血病 AML 慢性淋巴细胞白血病 CLL 慢性髓细胞性白血病 CML 11 急性T淋巴细胞白血病 T ALL CD7 CD5 CD2为全T细胞抗原 基本表达于T细胞分化的各阶段常以CD45Ro和CD3作为检测T细胞来源肿瘤较好的抗体组合CD4 CD8TCR TCR 基因重排T淋巴细胞来源的肿瘤浸润性较强 预后较差 并需要多种治疗 12 急性B淋巴细胞白血病 B ALL CD10 CALLA 区别ALL和AML与T细胞分化相同 在淋巴干细胞阶段 只表达TDT CD34等非系抗原 到B系祖细胞 出现CD19 CD79a及胞浆CD10表达 随着B细胞分化发育到逐渐成熟 TDT消失 相继出现CD10 CD22 CD45RA CD20表达 同时出现膜免疫球蛋白 淋巴细胞发育到终末浆细胞 除表达浆细胞标记抗体外 还表达胞浆免疫球蛋白 CD19 CD45RA CD79a 13 急性非淋巴细胞白血病 AML 根据FAB分型 MO 有低的SSC和FSC 在CD45 SSC图上出现在淋巴细胞位置上 至少表达一个特异性标志如CD13或CD116 但MPO比CD13与CD33更灵敏 一般淋系标志阴性 但也可表达CD7或CD4 一般HLA DR CD34阳性 有些研究表明CD7与CD34共表达在AML且预后差 M1 流式上M1与M0相似不易区分 M1一般CD13 CD33 HLA DR 但CD34表达少于M0 可能表达部分CD15 M2 M0与M1的主要区别是成熟度增加 blasts减少 CD15较M1较显著 CD34弱于M1 CD13有时表达强于CD33 多数病例HLA DR CD45 SSC图显示从髓系blast区至成熟骨髓细胞区的连续细胞带 CD45 SSC图有助于确定blasts比例 14 M3 高颗粒性 具较高的SSC 但CD45较成熟C少 多数情况HLA DR 或表达减少 CD34少于M2 一般CD13弱 可有CD2表达 M4与M5 两型表型相似 但M4较M5表达更多的CD34 较之M0 M1 M4与M5有更大的FSS和SSC CD45 SSC图上 成熟C出现在单核区 重要的表型为CD13 CD33 HLA DR CD14和CD15 CD33可表达强于CD13 CD33 CD13 CD34 很可能为M5 但只出现在少数病人中 部分M5可见CD56 M6 M6较少见且特征不明显 一般HLA DR CD34 CD13 CD33阳性 CD45 SSC图显示主要为红系成份 M7 巨核细胞白血病 在AML中少于1 一般CD61 Gp a 和 或CD41 Gp b a 阳性 而注意由于血小板粘附在blasts上造成的假阳性 可以用流式双色分析在EDTA存在下 测Gp b a与CD34以减少激活血小板的粘附 15 慢性淋巴细胞白血病 CLL B系抗原为CD19 CD20 CD43 CD79a与CD5共表达CD23 CD13 CD15表达 16 慢性髓细胞性白血病 CML 由于慢性期显著的细胞分化 在CD45 SSC图上除了髓系细胞占主导外 只显示一个正常骨髓像 CML可确诊 CML起病与发展相对缓慢 慢性期的持续1年左右最终发展为加速期和急变期 流式细胞技术对急变期亚型的诊