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第十一章血脂及血浆脂蛋白检验 目标 载脂蛋白及脂蛋白受体血浆脂蛋白的代谢血脂 脂蛋白及载脂蛋白的测定 血浆脂蛋白异常与动脉粥样硬化有密切关系富含甘油三脂的脂蛋白是冠心病的独立危险因子 1 第一节概述 一 血脂及血浆脂蛋白 二 脂蛋白代谢紊乱 2 一 血脂及血浆脂蛋白 甘油三脂 能量代谢 胆固醇 脂膜 激素和胆汁酸 磷脂 糖脂 类固醇 3 电泳法 超速离心法CM VLDL LDL HDL 一 血浆脂蛋白的分类 病理条件 LDL脂蛋白a 4 疏水性较强的TG及胆固醇酯位于内核 具极性及非极性基团的载脂蛋白 磷脂 游离胆固醇 以单分子层借其非极性疏水基团与内部疏水链相联系 极性基团朝外 二 血浆脂蛋白的组成与结构 5 血浆脂蛋白的组成特点 6 三 载脂蛋白 与脂质亲和作用使脂质溶于水性介质 利于运输胆固醇和甘油三酯 2 作为脂蛋白外壳结构成分 与外面信息联系 如作为脂蛋白与受体的连接物 3 激活某些与脂蛋白代谢有关的酶 7 种类 18种 apoA A A A apoB B100 B48apoC C C C apoDapoE 8 ApoAI HDL主要的结构蛋白 LCAT激活剂 ApoAIV 激活LCAT 促进胆固醇酯化 参与胆固醇逆转运 ApoB100 VLDL LDL IDL主要蛋白质 介导LDL与受体结合 ApoB48 CM合成必需 参与外源性脂肪的转运 ApoCII CM VLDL HDL的结构蛋白 LPL激活剂 抑制肝吸收CM VLDL ApoCIII 抑制LPL 抑制肝对HDL摄取 9 四 脂蛋白受体 受体 与脂蛋白结合 脂蛋白进入细胞 调节细胞外脂蛋白水平 是清除有潜在致动脉粥样硬化的脂蛋白必需的 10 LDL受体 识别LDL中载脂蛋白 LDL颗粒被吞饮进入溶酶体 被降解 残粒受体 识别CM VLDL残粒中脂蛋白 清道夫受体 巨噬细胞表面 介导修饰LDL从血液循环中清除 11 六 血浆脂蛋白代谢 外源性代谢途径 食物中胆固醇 甘油三酯合成CM CM代谢 内源性代谢途径 肝合成VLDL IDL LDL 在肝及其它器官代谢 HDL 胆固醇 肝 12 外源性代谢 13 2 内源性代谢途径 肝脏 合成甘油三脂 胆固醇 VLDL 血液中 甘油三脂分解 IDL LDL 运输胆固醇的主要脂蛋白 LDL受体 进入细胞 释放胆固醇 14 3 胆固醇逆向转运 HDL将胆固醇从外周组织运输到肝脏 逆向转运 外周组织 胆固醇高时 堆积 HDL运输吸收胆因醇 肝脏 排出 HDL 胆固醇 肝 15 二 脂蛋白代谢紊乱 一 高脂蛋白血症 简单分 高胆固醇血症 高甘油三酯血症 混合型高脂血症 2 按是否继发全身疾病分类 原发性继发性 16 糖尿病 VLDL TG升高 VLDL合成增加 清除减少 2 甲状腺功能低下 LDL代谢障碍 LDL受体功能下降 LPL活性下降 LDL清除减慢等 3 肾脏疾病 脂蛋白降解障碍 合成过多VLDL LDL升高 4 药物 17 3 遗传性缺陷 已发现脂蛋白代谢关键酶如LPL及LCAT 载脂蛋白如apoC B E A C 脂蛋白受体如LDL受体等的遗传缺陷 并阐明了某些高脂蛋白血症及发病的分子机制 18 二 低脂蛋白血症 家族性低b 脂蛋白血症 LDL减少 总胆固醇减少可能原因 LDL受体调 胆汁酸合成过多 2 b 脂蛋白缺乏症 ApoB合成分泌缺陷 使CM VLDL LDL合成障碍 脂肪吸收代谢紊乱 3 家族性低a 脂蛋白血症 低HDL C 早期发生动脉粥样硬化 19 第二节血脂 脂蛋白及载脂蛋白测定 甘油三酯 胆固醇 HDL 胆固醇和LDL 胆固醇为基本指标 测定前影响血脂的因素 生物因素 年龄 性别 种族和个体差异生活方式 饮食 吸烟 运动和应激疾病 药物血标本的处理 20 一 血清 浆 静置实验 空腹12h后采血分离血清 4oC过夜 正常 清澈透明 混浊 甘油三酯高 上层奶油样 下层清澈 CM高 上层奶油样 下层混浊 CM高 VLDL高 均匀混浊 VLDL高 21 二 血清 浆 总胆固醇测定 一 化学方法 L B法 胆固醇 抽提纯化 醋酸 醋酐 硫酸 绿色化合物 2 ZaK反应 胆固醇 抽提纯化 硫酸 醋酸 Fe3 紫色化合物 LRC 异丙醇沉淀蛋白 提取胆醇 氧化铝吸附胆红素等 22 二 酶法 测定方法 胆固醇酯 H2O 胆固醇 脂肪酸 胆固醇 O2 4 胆甾烯酮 H2O2 H2O2 4 氨基安替比林 酚 醌亚胺 注意问题 有些胆固醇酯酶对酯的水解不完全表面活性剂有时干扰酶作用易受还原性物质干扰 23 临床意义 高胆固醇血症不慌不忙冠心病发病率正相关 影响因素 性别年龄饮食遗传因素其它生活方式 24 三 血浆 清 甘油三酯测定 一 化学测定法 有机溶剂抽提TG 碱水解 皂化 脂肪酸 甘油 过碘酸氧化 甲醛 显色反应 25 二 酶测定法 1 磷酸甘油氧化酶法 甘油三酯 甘油 脂肪酸 甘油 ATP 3 磷酸甘油 ADP 3 磷酸甘油 O2 磷酸二羟丙酮 H2O2 H2O2 4AAP 酚 醌亚胺 26 2 乳酸脱氢酶法 甘油 ATP 3 磷酸甘油 ADP 甘油三酯 甘油 脂肪酸 ADP 磷酸烯醇式丙酮酸 丙酮酸 ATP 丙酮酸 NADH NAD 乳酸 27 3 甘油氧化酶法 第一步将甘油除去 甘油 O2 甘油醛 H2O2H2O2 EMAE 无色物质 甘油三酯 H2O 甘油 脂肪酸甘油 O2 甘油醛 H2O2H2O2 4 AAP EMAE 有色化合物 28 四 血清脂蛋白测定 磷钨酸 镁法 磷钼酸 镁沉淀含ApoB的脂蛋白 LDL VLDL和脂蛋白a 上清中只含HDL 酶法测胆固醇 一 电泳 二 HDL测定 2直接测定法 选择性抑制 用一些表面活性剂与LDL VLDL和CM吸附 使不与酶试剂反应 第二试剂含胆固醇测定试剂 及与HDL高亲和力的表面活性剂 使酶促反应进行 29 2 聚乙烯硫酸盐沉淀法 沉淀LDL 测上清HDL VLDL的胆固醇LDL TC HDL和VLDL的胆固醇 三 LDL测定 Friedewald公式法 LDL C TC HDL TG 2 2 30 封闭非LDL脂蛋白与酶的反应 从而使LDL与酶反应 使非LDL脂蛋白与LDL分二步水解 消除非LDL脂蛋白 3 直接测定法 31 临床意义 动脉粥样硬化主要脂类危险因素 32 四 脂蛋白 a 测定 一般用免疫化学法 临床意义 肝脏合成 一类独立的脂蛋白 与动脉粥样硬化正相关 33 五 血清载脂蛋白测定 一般用免疫化学法 临床意义 ApoAI是HDL的主要蛋白ApoB是LDL的主要蛋白冠心病 肾病综合症 糖尿病都有A下降 B升高 34 一 血清总蛋白测定 两个假设 都是单纯蛋白 所有蛋白与化学试剂发生相同反应 35 1 凯氏定氮法 蛋白 强酸消化 铵盐 碱 氨 酸滴定 测定总氮量 6 25 36 2 双缩脲法 37 甘氨酰甘氨酸 肽键 38 39 CO NH 碱性下与Cu2 络合成紫色化合物 与蛋白量成正比 简单 准确 重复性好 40 3酚试剂法 Lowry法 酪氨酸残基和色氨酸残基与酚试剂的磷钨酸 磷钼酸 蓝色化合物 加上Cu2 结合双缩脲法 提高灵敏度 适于测单一蛋白 且适用于蛋白含量较少的样品 41 4比浊法 酸性试剂 蛋白质 沉淀 5染料结合法 酸性条件下 蛋白质 NH3 酪 与染料中阴离子产生颜色反应 氨基黑 考马斯亮兰 42 6紫外分光光度法 色氨酸 酪氨酸在280nm有吸收峰 保持蛋白活性 7折光测定法 溶于溶液中的固体可增加它的光折射率 固定波长 固定温度下 光折射率与蛋白浓度成正比 43 血清总蛋白 临床意义 升高 多发性骨髓瘤 巨球蛋白血症等 降低 白蛋白合成减少 或蛋白丢失 44 二 血清白蛋白测定 1 染料结合法 白蛋白与染料结合 球蛋白很少与染料结合 溴甲酚绿 溴甲酚紫 白蛋白 pH4 2 BCG 蓝绿色化合物 OD与白蛋白浓度成正比 45 2 盐析法 球蛋白先沉淀 3 电泳法 4 2免疫化学法 抗原抗体反应 抗体过量 46 临床意义 合成减少 吸收减少 丢失过多 47 七 脑脊液蛋白质测定 脉络膜的毛细血管壁超滤形成 及少量中枢神经系统合成 浊度法 染料结合法 考马斯亮兰 邻苯三酚红钼络合显色法 48 临床意义 神经系统疾病 血脑屏障通透性增加 血管性脑水肿 细胞含量过多 神经细