5500 操作文档-2.docx

1. 目的规范QTRAP5500型质谱仪的操作和维护。2. 范围适用于QTRAP5500型质谱仪的操作和维护。3. 职责QTRAP5500型质谱仪的操作与维护人员负责执行此规程。4. 操作步骤4.1 开机次序4.1.1 开启压缩空气管道及液氮罐阀门，确认Curtain Gas在0.35Mpa，Gas1/Gas2在0.7Mpa，Exhaust Gas在0.35Mpa；4.1.2 开启UPS，转换到逆变状态；4.1.3 打开主机电源开关（ON状态），约30秒后机械泵自动启动。Vacuum Status的指示灯闪烁，直至指示灯不再闪烁，真空稳定仪器可正常使用；4.1.4 开启电脑，打开Analyst software，即可进行操作。4.2 PPG质量校准4.2.1 在project 工具条中选择installation，在硬件配置Hardware Configure 菜单下Active激活MassSpecOnly（只连质谱机），硬件配置表中MassSpecOnly出现绿勾后，表示API质谱仪主机与计算机通讯正常，关闭Hardware Configure Editor。4.2.2 点击左边工具菜单Navigation Bar的Tune进入调谐模式。此时应听见“扑”开气的声音，Exhaust及Gas1/Gas2在此时已打开，仪器处于可使用状态（ready），软件右下角图标为绿色。4.2.3 双击左边工具菜单中的Mannual Tuning，打开一个空白质谱参数设置及运行窗口，进入手动调谐模式。4.2.4 点击File open 钮，选择Acquisition Method 打开四极杆质量校准方法列表，根据要校准的目标（Q1正离子、Q1负离子、Q3正离子、Q3负离子）选择相应的方法打开。4.2.5 进质量校准溶液，对于负离子校准，采用NEG PPG310-5标准溶液，针泵流速为10L/min；对于正离子校准，采用POS PPG210-7标准溶液，针泵流速为5L/min。把质量校准溶液吸入针筒，用集成的针泵连续进样。设立使用的针筒的内部直径尺寸为4.61mm，设定流速为5或10，单位为L/min，按Start Syringe Pump开针泵。离子阱校准采用ES Tuning Mix。4.2.6 调整喷雾针的垂直位置，针垂直位置约为5mm左右即可。4.2.7 采集PPG标准品质谱数据，在质谱参数设置及运行窗口中回到MS method。扫描速度分别选择10、200、1000、2000Da/s，用MCA ON方式采集,分别设定10、50、50、100 cycles，点击Start。离子阱校准扫描速度分别选择50、250、1000、10000、20000Da/s，所有都设定50 cycles。在右边的质谱图中按鼠标右键出现一菜单，选菜单中Open file，得到一张几个不同扫描区的独立质谱峰的质谱图。M/Z906.6在Q1 Positive Mode和Q3 Positive Mode扫描速度为10、200Da/s时响应值分别不应低于1.4107和6.8107；M/Z933.6在Q1 Negative Mode和Q3 Negative Mode扫描速度为10、200Da/s时响应值分别不应低于1.0107和4.0107。M/Z922.0在ER Positive Mode扫描速度分别为50、250Da/s时响应值分别不低于2.0107和3.2107；M/Z601.9在ER Negative Mode扫描速度分别为50、250Da/s时响应值分别不低于4.8107和1.2107。激活其中一个PPG质谱峰的图，然后在Tools菜单中选Calibrate From Spectrum，出现Mass Calibration Options窗口，从Standard 选择合适的标准品类型PPGs Pos(正离子)或PPGs Neg(负离子)，校准的目标设备是Q1还是Q3，目标分辨率是单位分辨率Unit（半峰宽0.70.1amu）、还是高分辨率High（半峰宽0.50.1amu），正在校准的是正离子还是负离子。4.2.8 手动调整分辨率，如果某些PPG峰宽超出分辨率范围，应进行手动调整。点击Resolution 标签，找到Advanced 按钮，出现Resolution Table 含有校正的PPG离子质量数和相应的DC Offsets值，调整Offset值改变各离子质量数的分辨率。当分辨率偏小时就减小Offset，分辨率偏大时增加Offset。改变Offset后按Apply钮，并在开始采数据时按Yes确认要保存这些修改。再采集数据（10scans）然后再校准，确定分辨率是否有改善，重复此步骤，直到所有离子合乎分辨率范围。一般情况下，都是在单位分辨率Unit（半峰宽0.70.1amu）下校正。4.2.9 当Offset 值设定合适，所有PPG离子的分辨率在范围内后，进行最后的质量校准。在Mass Calibration Report 按Update（修改）钮进行更新，当出现提示时回答“Yes”。质量校正完毕。4.3 针泵进样ESI源MRM定量方法手动优化4.3.1 确定母离子 选择你的Project，点击Hardware Configure激活MassSpecOnly；先点T，再双击Manuel Tuning。针泵开始进样，从Scan Type下拉菜单中选择Q1 Scan，选择需要的扫描模式（正、负离子），输入质量扫描范围及扫描时间，初看一下所需要的母离子，确定存在需要的母离子后，选用MCA on累加50，选用Acquire采集并存储扫描图谱，根据质谱图，确定母离子的M/Z值，精确到小数点后一位。4.3.2 确定子离子从Scan Type 下拉菜单中选择Product Ion Scan。输入母离子，设定扫描范围，从50amu到比母离子大10amu，设定CE碰撞能量，记录所有碎片离子分布，MCA on，Acquire采集数据并存储。4.3.3 确定二级子离子（如若需要）选择响应值较高的碎片作为二级母离子，CAD选择 high，MCA on，Acquire采集数据并存储。4.3.4 优化MRM定量分析质谱参数从Scan Type 下拉菜单中选择MRM，输入找好的母离子及子离子，点击Edit Ramp钮，从Ramp Parameter Settings窗口下选择Declustering Potential（DP），点击Start得到一个所有离子的电压曲线图。根据曲线选择分子离子峰最强的DP值，确定各离子对最佳DP。按照相同的操作优化最佳碰撞能（CE）、CXP、EP，将优化好的各参数输入各检测反应离子对。将优化好的方法命名存储。4.4 液质联用定量分析方法和批文件的建立与使用4.4.1 开启HPLC电源，点击Hardware Configure激活MassSpec及HPLC配置文件；在文件菜单打开针泵连续进样优化好的MRM质谱方法，在Acquisition Method按鼠标右键出现Add Device Method，点击增加液相泵、自动进样器、柱温箱。4.4.2 点击Acquisition Method 题头，设置同步方式确保LC与MS设备同时启动，LC Sync。然后点击Mass Spec中的Edit Parameter根据流动相的比例及流速设定CUR、Gas1、Gas2、IS及TEM。点击Autosampler自动进样器，设定液相条件，编辑完毕后将联用方法存储，则定量分析方法就建立了。4.4.3 批文件建立，双击Build Acquisition Batch 打开一个空白窗口。在Method Editor中选择已经建立的带液相同步的质谱方法Acquisition Method，设定Set名称，点击Add sample，在此输入需要添加的样品数及样品存储的文件夹名称，点击OK后，plate code选择54Vialplate，分别标记样品名及样品位置Vial Position，将样品信息编好后，在Submit项下提交样品，即可点击Start开始进样。4.5 定量分析方法的建立和数据分析 从Navigation Bar中双击Quantitation Wizard，出现样品数据文件选择窗口，双击要选的数据，进入Selected Samples，点击Next进入下一步；在Select Settings窗口中，Settings to Use 设为Default，Default Query为None，点击Next进入下一步；在 Select Method 窗口中，选中Create New Method并命名，点击Next进入下一步；在Select Representative Sample 窗口中，选中间浓度的数据然后点击Next；在Define Peaks窗口中，输入内标定义名称，并将Q1/Q3选出，同样将待测物命名并将离子对选出，然后点击Next；在Define Integration窗口中，点击Advanced确定Bunching Factor，确保积分一致，点击Next进入下一步；在最后的窗口Specify Calibration中，定义Fit为Linear，Weighting为1/x2，Regression Parameter基于Area。选择Finish完成定量分析方法的建立。将数据分析后命名保存。4.6 关机 当提交的样品测定结束后，编辑一个方法将TEM设定为0，只有Gas1/Gas2以使加热装置降温，降温6min后，在Acquire菜单下点击standby，在Hardware Configuration菜单下点击deactive。关闭Analyst软件，关闭电脑。长期不使用质谱仪，则需要关闭质谱。持续按Vent按钮1秒，分子涡轮泵缓慢停止工作，机械泵仍将工作约15分钟。待机械泵停止工作后，关闭仪器电源开关。5. 维护保养及注意事项5.1 仪器正常工作时，电脑需每天重启一下，避免进样过程中出现死机现象；5.2 每周需要将数据备份一次，每周需要将磁盘整理一次；鼠标点击速度不要太快，要等上次点击的功能完成后再点击；在大批量样品采集时，不能反复地处理样品以免死机。5.3 死机后的处理方法5.3.1 仪器操作过程中出现死机现象，一般采用Ctrl-Alt-Del，Windows任务管理结束任务，关掉Analyst软件，然后重新打开Analyst；若这样还不可行，则将电脑重新启动。5.3.2 还可deactive后，再active；5.3.3 关掉Analyst软件，Stop Service后重新打开Analyst软件；5.3.4 重新启动控制仪器的电脑，重新启动HPLC，再Active；5.3.5 Stop Service后进入Scu21.exe中，Clear GPIB Bus；5.3.6 Stop Service后进入Scu21.exe中，Reset System Controller。5.4 液相每天开机后应采用10%异丙醇清洗泵头。5.5 液相流动相的水相需每天更换，避免弱酸、弱碱水中生菌，延长柱子寿命。5.6 每次开机后，需采用PPG进行质量校正。5.7 退出软件及Standby前把仪器设定到正离子模式；注射泵不要让它推到头；Curtain Gas压力为0.35Mpa，Exhaust Gas压力为0.35Mpa，Gas1/Gas2压力为0.7Mpa，压力不能太低。5.8 质谱离子源流路每天需要用流动相冲洗，每天需要检查气体压力及液氮量，当液氮剩余不多时，应提前打电话预订。5.9 每次做完样品后用甲醇或流动相冲洗进样管，离子源腔体及Curtain Plate、Orifice需每周采用甲醇：水（50