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1 第九章 强心苷类化合物 2 含义 是指存在于植物体内的一类对心脏具有显著生物活性的甾体苷类化合物 现代药理实验证明 强心苷能加强心肌收缩性 减慢窦性频率 主要用于治疗慢性心功能不全 心房纤颤 心房扑动 阵发性心动过速等心脏疾病 此外 强心苷还有兴奋延髓催吐化学感受区和影响中枢神经系统作用 可引起恶心 呕吐等胃肠反应 并能使动物产生眩晕 头痛等症 3 强心苷在植物界分布比较广泛 主要存在于夹竹桃科 玄参科 百合科 萝摩科 十字花科 毛茛科 卫矛科 大蕺科 桑科等十几个科的一百多种植物中 常存在于一些有毒的植物如毒毛旋花子 毛花洋地黄 紫花洋地黄 黄花夹竹桃 铃兰 海葱 羊角拗等植物中 黄花夹竹桃 4 铃兰 海葱 5 强心苷在植物体中主要存于花 叶 种子 鳞茎 树皮和木质部等组织器官中 由于在植物中有水解苷类的酶与强心苷共存 因此原生苷常被酶水解生成多种次生苷 使结构类似的强心苷数目增多 给提取分离强心苷带来一定困难 目前在动物体中尚未发现强心苷类化合物 中药蟾酥中虽含具有强心作用的甾体化合物 但不属于苷类 是蟾毒配基与脂肪酸形成的酯类 6 一 结构与分类强心苷是甾体衍生物 根据所连不饱和内酯环不同 分为甲型强心苷和乙型强心苷 强心苷所连接的糖大多是去氧糖 根据苷元及与糖连接方式不同 又可分为 型 型和 型强心苷 7 一 苷元部分强心苷元由甾体母核和不饱和内酯环组成 其甾体母核与其他甾醇立体结构不同 B C环与其他甾醇相同为反式稠合 A B环大多为顺式稠合 5 H C D环均为顺式稠合和 C14取代基 构型 若为反式则无强心活性 其他甾醇C D环为反式稠合 C14取代基 构型 A B环两种稠合方式皆有 8 甾体母核上连有甲基 羟基 羰基等取代基 其中C10 C13连接的甲基或含氧衍生物均为 构型 C3位都有羟基取代 而且多数是 构型 可与糖成苷 另外在甾体母核其他部位上也可有羟基 羰基取代 在母核的C4 C5位或C5 C6位常有双键 C10位大都为甲基 C13位为甲基 C17位连接不饱和内酯环大多是 构型 少数是 构型 9 强心苷苷元类型 C17位连接五元不饱和内酯环 称强心甾烯即甲型强心苷元 若连接六元不饱和内酯环 称海葱甾烯或蟾酥甾烯 即乙型强心苷元 自然界中的强心苷大多属于甲型强心苷 如夹竹桃苷元 洋地黄毒苷元属于甲型强心苷元 绿海葱苷元 蟾毒素等属于乙型强心苷元 10 强心甾烯蟾蜍甾烯或海葱甾烯 洋地黄毒苷元夹竹桃苷元 11 二 糖的部分强心苷中的糖类 根据糖分子中C2含氧程度的不同 可分成 羟基糖和 去氧糖 1 羟基糖C2联结有氧原子的糖 此类糖包含非去氧糖 如葡萄糖 6 去氧糖和6 去氧糖 3 甲醚 D 洋地黄糖L 鼠李糖L 黄花夹竹桃糖L 呋糖 12 2 去氧糖C2不含有氧原子的糖类 主要是2 6 二去氧糖和2 6 二去氧糖 3 甲醚 D 洋地黄毒糖D 加拿大麻糖L 夹竹桃糖D 波伊文糖 13 强心苷的类型按照糖的种类以及与苷元的链接方式分类 型强心苷 苷元 2 6 去氧糖 x D 葡萄糖 y 如紫花洋地黄苷A和毒毛花苷 型强心苷 苷元 6 去氧糖 x D 葡萄糖 y 如黄花夹竹桃苷A 型强心苷 苷元 D 葡萄糖 x 如绿海葱苷 植物中的强心苷以 型 型较多 型较少 14 二 构效关系构效关系即化学结构与生物活性之间的关系 强心苷的生物活性与结构有密切关系 当强心苷中某些结构发生改变时 强心作用也随之改变 强心作用与甾体母核的立体结构 不饱和内酯环和取代基的种类 构型有关 糖部分本身不具有强心作用 但可以改变强心苷的水 油分配系数 影响强心苷对心肌细胞膜上类脂质的亲和力 进而影响强心作用的强度 15 一 甾体母核与强心作用的关系1 环的稠合方式A B环为顺式稠合的甲型强心苷元 C3羟基为 构型有强心活性 否则无活性 A B环为反式稠合的甲型强心苷元 无论C3羟基是 还是 构型对强心活性无明显影响 C D环为顺式稠合 即C14羟基或氢为 构型时有强心活性 C D环为反式稠和 即C14羟基或氢为 构型 或C14羟基与邻位氢原子脱水形成脱水苷元 强心作用消失 16 2 取代基甾体母核中的取代基对强心活性也有影响 当C10位的角甲基被醛基或羟基取代时 强心作用增强 当C10位的角甲基被羧基取代或无角甲基时 强心作用明显减弱 如果在甾体母核上引入5 11 12 羟基时 强心作用增强 引入1 6 16 羟基时 活性降低 引入双键 4 5 活性增强 引入双键 16 则活性降低或消失 17 3 不饱和内酯环C17侧连上的不饱和内酯环为 构型时 具有活性 为 构型时 活性减弱 若内酯环的不饱和键被饱和 活性大大减弱 毒性亦减弱 若不饱和内酯环水解开环 活性降低或消失 18 二 糖部分与强心活性的关系糖本身不具强心作用 但糖的种类 数目可影响强心苷在水 油中的分配系数 影响对心肌细胞上类脂质的亲和力 从而影响强心活性和毒性 毒性规律 1 单糖苷 二糖苷 三糖苷2 乙型强心苷 甲型强心苷 19 二 强心苷的理化性质 1 性状大多为无色结晶或无定形粉末 具有旋光性 对粘膜有刺激性 C17侧连为 构型者味苦 为 构型无苦味 2 溶解性 20 强心苷一般可溶于水 甲醇 乙醇 丙酮等极性较大的溶剂 微溶于醋酸乙酯 含醇氯仿 难溶于乙醚 苯 石油醚等极性小的溶剂 强心苷的溶解性与糖分子数目 种类 苷元中取代基的种类 数目及位置有关 如果强心苷分子中的糖及苷元结构中含有较多的羟基 则极性强 亲水性亦强 若分子中含有羟基的数目较少 则极性弱 亲脂性强 21 例如洋地黄毒苷虽是三糖苷 但三个糖分子均为洋地黄毒糖 整个分子中只有5个羟基 所以极性小 亲水性弱而亲脂性强 难溶于水 1 100000 易溶于氯仿 1 40 乌本苷虽是单糖苷 分子中却含有8个羟基 极性大 易溶于水 难溶于氯仿 强心苷的原生苷分子中含有较多糖分子 其亲水性比相应的次生苷强 可溶于水等极性大的溶剂 难溶于极性小的有机溶剂 22 当羟基数目相同时 强心苷中的羟基形成分子内氢键后水溶性减小 例如 毛花洋地黄苷乙和毛花洋地黄丙 都是四糖苷 整个分子中有8个羟基 四个糖的种类也相同 苷元上羟基数目也相同 仅位置不同 前者是C14 C16二羟基 其中C16羟基能与C17位内酯环上的羰基形成分子内氢键 后者是C12 C14二羟基 不能形成分子内氢键 因此水溶性上 毛花洋地黄丙要大于毛花洋地黄乙 23 3 脱水反应强心苷用混合强酸 3 5 盐酸 水解时 苷元上羟基 C14 OH C5 OH更容易 与邻位上的氢脱去水分子的反应 属于水解反应的副反应 应注意避免 24 三 水解性强心苷分子中苷键可被酸 酶水解生成次生苷或苷元 分子中的内酯环和其它酯键可被碱水解 水解反应是研究强心苷的化学组成及改造强心苷化学结构的重要手段 一 酸水解根据水解条件的不同 可分为温和酸水解法和剧烈酸水解法 25 1 温和酸水解法用稀酸0 02mol L 0 05mol L的盐酸或硫酸在含水乙醇中经短时间 半小时至数小时 加热回流 可使苷元与 去氧糖之间的苷键 去氧糖与 去氧糖之间的糖苷键水解断裂 而 去氧糖与 羟基糖 羟基糖与 羟基糖之间的糖苷键不易被水解 所以温和酸水解可使 型强心苷水解成苷元 一个或几个单分子的2 6 二去氧糖 含一个分子的2 6 二去氧糖和D 葡萄糖的低聚糖 型 型强心苷在此条件下不发生水解 由于温和酸水解条件温和 对苷元的影响较小 不会使苷元分子发生脱水反应 26 2 剧烈酸水解法用3 5 的盐酸或硫酸在含水乙醇中加温加压的条件下 可使所有的糖苷键水解 由于水解条件较剧烈 常使苷元结构发生脱水 产物是单糖和缩水苷元 如紫花洋地黄苷A在此条件下生成缩水苷元 缩水羟基洋地黄毒苷元 27 3 氯化氢丙酮法 Mannich和Siewert法 在强心苷的丙酮溶液中加入1 氯化氢试剂 20 放置两周 可水解得到原生苷元和糖衍生物 此法适用于易溶于丙酮的单糖苷 28 三 酶水解在含强心苷的植物中 存在水解 D 葡萄糖苷键的酶 而无水解 去氧糖的酶 所以酶水解只能除去分子中的葡萄糖 保留 去氧糖部分生成次生苷 如毛花洋地黄苷丙酶水解生成次生苷 地高辛 酶水解具有专属性 不同的酶切断不同的苷元 如毒毛花苷K的酶水解过程 29 除了植物体中共存的酶以外 其它生物中的水解酶也能使某些强心苷水解 如来源于动物脏器 蜗牛的消化液 紫苜蓿和一些霉菌中的水解酶 能使所有苷键水解 使强心苷分子中的糖链逐步水解 直至获得苷元 该方法常用于研究强心苷的结构 30 二 碱水解法强心苷分子中的苷键不易被碱水解 而分子中的内酯键 酰基在不同的碱性条件下可以发生水解或裂解 双键转位及苷元异构化等反应 31 1 酰基的水解强心苷的苷元或糖分子中常有酰基存在 在碱性条件下可水解脱去酰基 去氧糖上的酰基最易脱去 一般用碳酸钠 碳酸氢钾水解就可使糖分子上的酰基除去 羟基糖或苷元上的酰基须用氢氧化钙 氢氧化钡水解才能除去 酰基的水解条件较温和 不能使内酯环水解开环 32 2 内酯环的水解在强心苷的水溶液中加入氢氧化钠 氢氧化钾可使内酯环水解开裂 加酸后又环合成内酯环 甲型强心苷在醇性氢氧化钾溶液中 内酯可以发生双键转位 生成活性亚甲基 并可与某些试剂缩合显色 用于甲型强心苷元的检识 而乙型强心苷不能发生双键转位的反应 不能生成活性亚甲基 33 提取与分离方法由于在同一植物中常常含有几个甚至几十个结构 性质相似的强心苷类化合物 而且总苷含量往往小于1 又与糖类 皂苷 色素 鞣质等化学成分共存 这些成分又能影响强心苷在多种溶剂中的溶解度 强心苷大多连接多个糖分子 可以水解产生多种次生苷 从而进一步增加了提取分离的难度 34 提取溶剂法 相似者相溶原则 原生苷可以用甲醇 乙醇提取次生苷选择乙醚 氯仿 氯仿 甲醇混合溶剂提取常用提取溶剂 70 80 乙醇 提取效率高 能使酶破坏失活 35 纯化溶剂法 油脂类杂质 种子类药材 压榨法或石油醚脱脂 原料 醇提浓缩液 叶绿素 地上部分药材 静置析胶法 醇提液浓缩至适当醇浓度静置 36 铅盐法 沉淀酚酸类杂质 鞣质等 应注意调整含醇量 减少强心苷的损失注意某些强心苷的脱酰基反应吸附法 活性炭吸附除叶绿素等脂溶性杂质氧化铝吸附除去糖类 水溶性色素 皂苷等 注意调整醇浓度 37 分离两相溶剂萃取法 依分配系数差异 K 逆流分流法 依分配系数差异 K 液滴逆流分溶法 DCCC 依分配系数差异 K 色谱分离法 对亲脂性苷 单糖苷 次生苷 苷元 吸附色谱 硅胶 对弱亲脂性苷 原生苷 分配色谱 硅胶 硅藻土 纤维素为支持剂 38 检识方法一 显色反应强心苷的显色反应包括五元不饱和内酯环 去氧糖 甾体母核三部分 39 三 作用于甾体母核的反应这类显色试剂与皂苷中同类显色试剂显色原理与方法基本相同1 醋酐 浓硫酸反应 Liebermann Burchard反应 取试样溶于冰醋酸 加浓硫酸 醋酐 1 20 混合液数滴 反应液呈黄 红 蓝 紫 绿等变化 最后褪色 本反应液的呈色变化过程随分子中双键数目与位置不同而有所差异 40 2 冰醋酸 乙酰氯反应 Tschugaeff反应 取试样溶于冰醋酸 加无水氯化锌及乙酰氯后煮沸 或取样品溶于氯仿或二氯甲烷 加冰醋酸 乙酰氯和氯化锌煮沸 反应液呈紫 红 蓝 绿等变化 B环有不饱和双键的作用更快 41 3 氯仿 浓硫酸反应 Salkowski反应 将试样溶于氯仿 沿试管壁加入浓硫酸 静置 氯仿层呈血红色或青色 硫酸层有绿色荧光 4 五氯化锑反应 Kahlenberg反应 将强心苷的醇溶液点在滤纸或薄层上 喷以20 三氯化锑氯仿溶液 不含乙醇和水 于100 加热数分钟 在可见光或紫外光下可观察到不同颜色的斑点 42 5 三氯醋酸 氯胺T chloraminesT反应 将试样醇溶液点在滤纸 或薄板 上 喷以三氯醋酸 氯胺T试剂 25 三氯醋酸乙醇溶液4ml加3 氯胺T水溶液1ml混匀 待纸片干后 100 加热数分钟 于紫外光下观察 洋地黄毒苷元衍生的苷类显黄色荧光 羟基洋地黄毒苷元衍生的苷类显亮蓝色荧光 异羟基洋地黄毒苷元衍生的苷类显灰蓝色荧光 该反应可初步区别洋地黄类的苷元 43 一 五元不饱和内酯环的显色反应甲型强心苷在碱性醇溶液中 五元不饱和内酯环上的双键发生转位后 产生C22活性亚甲基 活性亚甲基上的活性氢原子能与一些化学试剂缩合生成有颜色的物质 乙型强心苷的六元不饱和内酯环不能发生双键转位 不能产生活性亚甲基 因此无此类反应 44 1 3 5二硝基苯甲酸试剂反应 Kedde反应 取试样的甲醇或乙醇溶液于试管中 加入3 5二硝基苯甲酸试剂 A液 2 的3 5 二硝基苯甲酸甲醇或乙醇溶液 B液 2mol L氢氧化钾溶液 用前等量混合 3 4滴 产生红色或紫红色 原理与间二硝基苯试剂反应类似 本试剂可作为强心苷纸色谱和薄层色谱的显色试剂 喷雾后显紫红色 几分钟后褪色 45 2 碱性苦味酸试剂反应 Baljet反应 取试样的甲醇或乙醇溶液于试管中 加入碱性苦味酸试剂 A液 1 苦味酸乙醇溶液 B液 5 氢氧化钠水溶液 用前等量混合 数滴 呈现橙色或橙红色 反应有时需要15分钟以后才能显色 原理也是活性亚甲基与苦味酸缩合显色 此缩合产物在485nm波长处有吸收峰 药典 以此法测定强心苷类药物含量 46 3 亚硝酰铁氰化钠试剂反应 Legal反应 取试样1mg 2mg 溶于2 3滴吡啶中 加3 亚硝酰铁氰化钠试剂和2mol L氢氧化钠各1滴 反应液呈深红色并渐渐消失 47 4 间二硝基苯试剂反应 Raymond反应 取试样约1mg 用少量50 乙醇溶解后加入间二硝基苯乙醇溶液0 1ml 摇匀后再加入20 氢氧化钠溶液0 2ml 呈紫红色 反应机理是间二硝基苯与活性亚甲基缩合后 又经过量间二硝基苯氧化成醌式而显色 此法可用于薄层色谱和纸色谱显色 喷雾后显紫红色 5 10分钟褪色 48 二 作用于 去氧糖的反应由于只有 型强心苷连有 去氧糖 故下列反应用于 型强心苷的检识 1 三氯化铁 冰醋酸反应 Keller Kiliani K K 反应 取试样1mg溶于5ml冰醋酸中 加1滴20 三氯化铁溶液 沿试管壁缓缓加入5ml浓硫酸 观察界面和醋酸层的颜色变化 如有 去氧糖存在 醋酸层渐呈蓝或蓝绿色 界面的颜色与苷元结构中的羟基 双键的位置和数目不同而不同 如洋地黄毒苷元呈草绿色 羟基洋地黄毒苷元呈洋红色 异羟基洋地黄毒苷元呈黄棕色 2020 3 20 49 50 该反应为 去氧糖的特征性反应 对游离的 去氧糖或在此条件下能水解产生游离 去氧糖的苷都能反应 例如洋地黄毒苷 具有 去氧糖基 显蓝色 紫花洋地黄苷A 需水解产生游离 去氧糖 显浅蓝色 但要注意 凡苷元与一分子 去氧糖连接 再与羟基糖连接的双糖或三糖苷在此条件下不能水解生成 去氧糖 因此不显色 例如毒毛花苷K及其次苷 虽然都连有一分子加拿大麻糖 但与葡萄糖相连 在此条件下不能水解出游离的 去氧糖 所以呈阴性反应 还需用其他显色反应证实 去氧糖的存在 51 2 过碘酸 对硝基苯胺反应取试样的醇溶液点在滤纸 或薄层板 上 先喷过碘酸钠水溶液 过碘酸钠水溶液5ml加蒸馏水10ml稀释 于室温放置10分钟 再喷对硝基苯胺试剂 1 对硝基苯胺的醇溶液4ml加浓盐酸1ml混匀 则迅速在灰黄色背底上出现深黄色斑点 将纸条置紫外灯下观察则为棕色背底上现黄色荧光斑点 再喷5 氢氧化钠甲醇溶液 则色斑转为绿色 52 该反应原理是 过碘酸将 去氧糖氧化成丙二醛 丙二醛与硝基苯胺试剂反应呈深黄色 53 3 对二甲氨基苯甲醛反应将试样的醇溶液点在滤纸上 喷以对二甲氨基苯甲醛试剂 1 对二甲氨基苯甲醛的醇溶液4ml加浓盐酸1ml 并于90 加热 分子中含有 去氧糖的强心苷可显灰红色斑点 54 4 呫吨氢醇反应 xanthydrol反应 取试样1 10 加入呫吨氢醇试剂 呫吨氢醇10mg溶解于100ml冰醋酸中 加入1ml浓盐酸 1ml 置沸水浴中数分钟后呈红色 本反应非常灵敏 只要分子中有 去氧糖都能呈色 可用于含 去氧糖化合物的定性 定量分析 55 二 色谱检识强心苷的常用色谱检识方法有纸色谱 薄层色谱等 一 纸色谱纸色谱常用于强心苷的检识 根据强心苷及其苷元的极性不同可选用不同的固定相 如强心苷的亲水性较强 宜选用水为固定相 移动相多选用水饱和的丁酮 乙醇 甲苯 水 4 6 1 氯仿 甲醇 水 10 2 5 如强心苷的亲水性较弱或检识苷元时 可选用甲酰胺为固定相 以甲酰胺饱和的甲苯或苯为移动相 56 二 薄层色谱1 吸附薄层色谱由于强心苷分子中含有较多的极性基团 尤其是多糖苷 在氧化铝上吸附作用较强 分离效果较差 因此常采用硅胶作吸附剂 以氯仿 甲醇 冰醋酸 85 13 2 二氯甲烷 甲醇 甲酰胺 80 19 1 醋酸乙酯 甲醇 水 8 5 5 等溶剂系统作为移动相 这些展开剂中含少量甲酰胺或水可以减少拖尾现象 57 2 分配色谱一般选用硅藻土 纤维素为支持剂 甲酰胺 二甲基甲酰胺或乙二醇作固定相 氯仿 丙酮 4 1 氯仿 正丁醇 19 1 等溶剂系统作移动相 分配色谱分离检识强心苷类的效果要比吸附薄层色谱好 所得斑点集中 承载分离样品的量较大 58 三 纸色谱和薄层色谱常用的显色剂1 适用于甲型强心苷的显色剂1 苦味酸水溶液与10 氢氧化钠水溶液 95 5 混合 喷后于100 烘数分钟 显橙红色 2 3 5 二硝基苯甲酸乙醇溶液与2mol L氢氧化钾溶液等体积混合 喷后显红色 数分钟后渐褪色 2 适用于各类强心苷的显色剂2 三氯化锑的氯仿溶液 喷后于100 烘数分钟 各种强心苷及苷元显不同颜色 25 三氯醋酸乙醇溶液与3 氯胺T 4 1 混合 喷后于100 加热数分钟 在紫外灯下显蓝 紫 黄 褐 色荧光 59 皂苷类 经典含义 存在于植物体内一类比较复杂的苷类化合物 其水溶液易引起肥皂样泡沫 且多数具有溶血等特性 皂苷的这些物理及生物学性质构成了皂苷的经典含义 60 现代含义 由螺甾烷类化合物与糖结合而成的甾体苷类 具有螺甾烷类化合物结构母核的一类皂苷 61 分布 主要分布在薯蓣科 百合科 玄参科 龙舌兰科等植物中 重楼 薯蓣 62 生物活性 甾体皂苷具有抗菌 抗肿瘤 扩张冠状动脉循环 降血脂 降血糖等功效 例如 地奥心血康中含有8种有黄山药中提取的甾体皂苷 用来治疗冠心病 心脑舒通是由蒺藜果实中提取的甾体皂苷类成分 63 皂苷的分类及结构特点 皂苷 甾体皂苷 三萜皂苷 螺甾烷醇型 25L 25S C25 甲基直立a键 为 型 异螺甾烷醇型 25D25R C25 甲基平伏e键 为a型 变形螺甾烷醇型 F环变形为呋喃甾烷 五元含氧环 呋甾烷型 F环裂环 C26 OH多与葡萄糖相连成苷 五环三萜皂苷 四环三萜皂苷 香树脂醇型 a 香树脂醇型 羽扇豆醇型 达玛烷型羊毛脂甾烷型 64 甾体皂苷的结构特点 甾体皂苷 甾体皂苷元 糖 羟基糖 1 由A B C D环 甾核 与E F环以缩酮形式相连接组成的螺甾烷结构 C22为E F所共有 2 A B C D环稠和方式 顺 反 反 反 65 3 C10 C13位具有 CH3 4 C3位有 OH 5 C5 C6有时具有双键 C12位有时有羰基 6 根据C25位的构型可将螺甾烷醇类分为螺甾烷醇和异螺甾烷醇两类 66 C25 甲基 直立a键 为 型L型 25S25L25 F 平伏e键 为a型D型 25R25D25aF 螺甾烷型 异螺甾烷型 67 4 取代基团 OH多在C3 位或其他位置羰基多在C12 位双键多在 5 6 9 11 甾体皂苷不含羧基 呈中性 故称为中性皂苷 异螺甾烷醇型 螺甾烷醇型 68 呋甾烷型 变形螺甾烷醇型 69 组成甾体皂苷的糖 以D 葡萄糖 D 半乳糖 D 木糖 L 鼠李糖 L 阿拉伯糖较为常见 糖基大多与苷元中C3 OH相连 70 二 皂苷的性质 1 性状皂苷大多为无色或乳白色无定形粉末 低聚糖苷 极性大 分子量大 皂苷元 极性小 大多有完好结晶 皂苷多数具有苦而辛辣味 对粘膜有强烈刺激性 尤其鼻粘膜 易引起喷嚏 大多具引湿性 71 2 溶解性皂苷 低聚糖苷 极性大 易于水 热甲醇 乙醇 含水丁醇 难于丙酮 乙醚次生皂苷 极性降低 易于醇 丙酮 乙酸乙酯皂苷元 极性小 易于石油醚 乙醚 苯 氯仿 难于水皂苷的助溶作用 表面活性剂作用 可以增加其他成分在水中的溶解度 72 3 与胆甾醇的沉淀反应皂苷与甾醇 多为胆甾醇 形成的分子复合物沉淀反应 生成的分子复合物沉淀用乙醚回流提取时 胆甾醇可溶于乙醚 皂苷不溶 甾体皂苷与胆甾醇形成沉淀的溶度积小 因此 可用于甾体皂苷的分离纯化和检查皂苷类成分的存在 73 4 发泡性皂苷的表面活性剂作用 其水溶液在剧烈振摇时 可以产生大量 持久的泡沫 而且不因加热而消失 74 5 溶血性皂苷有使红细胞破裂的作用 溶血能力的大小用溶血指数表示 溶血指数是指皂苷对同一动物来源的红细胞稀悬浮液 在同一等渗条件 缓冲条件及恒温下造成完全溶血的最低浓度 原因在于皂苷对胆甾醇有强的亲和力 可形成分子复合物 作用于红细胞表面的类脂质而破坏血细胞 表现强的溶血作用 75 6 与金属盐类的沉淀反应皂苷水溶液可与一些金属盐类如铅盐 钡盐 铜盐等生成沉淀 可用于皂苷的提纯和分离 同时 与胆甾醇的沉淀作用可用于解除皂苷的溶血作用 76 7 皂苷的水解皂苷可以一次性水解完全生成苷元和糖 也可分布水解产生次生苷 一般用2 4mol LHCl MeOH 1 1 或0 5 1mol LH2SO4 EtOH 1 1 水浴回流2 3h 即可完全水解成苷元 77 三 皂苷及皂苷元的提取 分离 一 皂苷的提取分离 原料 以醇提较好 回收乙醇 加适量水稀释 提取 水溶液 1 正丁醇萃取法 必要时石油醚脱脂 正丁醇萃取 减压回收正丁醇 皂苷提取通法 2 大孔树脂纯化法 水溶液过柱 少量水洗 糖分等 稀醇洗脱 蒸干 纯化 78 粗总皂苷 乙醚 丙酮 乙醚 丙酮沉淀法 由于皂苷难溶于乙醚 丙酮等溶剂 可将粗制总皂苷溶于少量甲醇 然后滴加乙醚或丙酮 皂苷即可析出反复几次 可提高皂苷的纯度 胆甾醇沉淀法 主要用于甾体皂苷的分离纯化 精制 较纯的皂苷 79 分配原理为佳 皂苷极性大 硅胶分配柱色谱 氯仿 甲醇 水等梯度洗脱或水饱和正丁醇洗脱制备薄层色谱分离 反相色谱分离 反相键合相硅胶RP18 RP 8 RP 2 甲醇 水 乙氢 水SephadexLH 20 甲醇洗脱液滴逆流色谱法 难分离皂苷 制备成衍生物 乙酰化或甲酯 硅胶柱色谱分离铅盐沉淀法 中性和酸性皂苷的分离 分离 皂苷单体 实际中 需要多种方法配合应用 80 二 皂苷元的提取 分离 方法1 原料预发酵水 36 保温24 48小时药渣酸水解3 硫酸加热水解3 6小时 过滤 水洗 干燥药渣提取石油醚 汽油或甲苯连续回流4 6小时石油醚提取液回收适量回收 放置析晶 抽滤皂苷元粗品重结晶乙醇或丙酮处理 活性炭脱色皂苷元精品 工业生产中常用 81 方法2原料醇提取按上述提取皂苷工艺进行皂苷水解常规酸水解水解液萃取苯 氯仿等有机溶剂萃取液 苯 氯仿 回收皂苷元 常用于实验室研究中 82 皂苷元的分离 1 吉拉德试剂法 羰基与非羰基皂苷元的分离 2 柱色谱分离法 吸附原理 硅胶 氧化铝苯 氯仿 苯 甲醇 氯仿 甲醇不同比例洗脱注 甾体皂苷 主要作为合成激素等的原料 故以提取苷元较为实用 三萜皂苷 为许多中药的有效活性部位 故以提取皂苷为主 83 四 皂苷的检识及结构测定 1 泡沫实验 振摇后产生持久性泡沫 可能含有皂苷类成分 蛋白质泡沫也可产生泡沫 但消失较快 2 溶血实验 新鲜配制的兔血生理盐水2ml 加供试品 若整个血样因药液引起红细胞全部破裂 呈现红色澄清溶液时 即为阳性 84 3 呈色反应 1 醋酐 浓硫酸反应 取供试品2ml 沸水浴蒸干 加入醋酐 浓硫酸数滴 出现黄红紫蓝绿的颜色变化 三萜皂苷颜色变化较慢 且不出现污绿色 但甾体皂苷颜色变化较快 在颜色变化的最后出现污绿色 2 五氯化锑或三氯化锑反应 将样品点于滤纸上 喷五氯化锑氯仿溶液 呈现蓝色 灰蓝色斑点 85 3三氯醋酸反应 甾体皂苷加热60 显色三萜皂苷加热100 显色 可在滤纸上进行用于两类皂苷的区别 4氯仿浓硫酸反应氯仿层 红或蓝色 硫酸层 绿色荧光 86 5 盐酸 对二甲氨基苯甲醛 Ehrlich试剂简称E试剂 螺甾烷类不显色 呋甾烷类显红色 6 茴香醛 硫酸 Anisaldehyde 简称A试剂 螺甾烷类显黄色 呋甾烷类显黄色 F环裂环 可用于两类皂苷的区别 87 二 波谱特征 1 紫外特征 UV 饱和的甾体皂苷元紫外区无吸收孤立双键205 225nm 900 羰基285nm 500 a 不饱和酮基240nm 11000 饱和的甾体皂苷元与共轭双键235nm浓硫酸40 1hr220 600nm出现最大吸收峰 max 依吸收峰的位置 max 及吸收系数 与标准图谱相对照 即可用于不同皂苷元的鉴别 88 2 红外光谱 IR 甾体皂苷的螺缩酮结构在红外光谱的指纹区表现特征性的四个吸收峰 980c