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第九章 维生素类药物的分析 第一节概述 维生素 是维持人体正常代谢机能所必需的微量营养物资 人体不能合成维生素 VitA D2 D3 E K1等 脂溶性 水溶性 VitB族 B1 B2 B6 B12 VitC 叶酸 烟酸 烟酰胺 VitM VitPP H维生素A醇 COCH3维生素A醋酸酯 COC15H31维生素A棕榈酸酯 R 第二节维生素A 为一个具有共轭多烯侧链的环己烯 一 具有UV吸收 存在多种立体异构化合物 维生素A325 5100 新维生素Aa32875 新维生素Ab320 524 新维生素Ac310 515 异维生素Aa32321 异维生素Ab32424 相对生物效价 VitA2 VitA3 易发生脱氢 脱水 聚合反应 鲸醇 或有金属离子存在时氧化 环氧化物 VitA醛 VitA酸 CHCl3 不溶于水易溶于有机溶剂和植物油等 条件无水无醇 CHCl3 蓝色 紫红 BP 1998 max为326nm一个吸收峰 max为350 390nm三个吸收峰 去水VitA VitA3 VitA USP显色剂磷钼酸规定斑点颜色和Rf值 BP杂质对照品法显色剂三氯化锑 立体异构体氧化产物及光照产物合成中间体去氢维生素A VitA2 去水维生素A VitA3 UV法 一 三点校正法1 条件 1 杂质的吸收在310 340nm波长范围内呈一条直线 且随波长的增大吸收度减小 2 物质对光的吸收具有加和性 2 波长的选择 1 1VitA的 max 328nm 2 2 3分别在 1的两侧各选一点 测定对象VitA醋酸酯 第一法等波长差法 第二法等吸收度法 皂化法 测定对象VitA醇 测定法 1 基本步骤 第一步A选择选择依据 所选A值中杂质的干扰已基本消除 注意 C为混合样品的浓度 第二步求 第三步求效价 换算因数由纯品计算而得 第四步 求标示量 方法 2 第一法 维生素A醋酸酯 判断是否在326 329nm之间 在326 329nm之间 改用第二法 是 否 求算并与规定值比较 规定值差值 判断差值是否超过规定值的 有一个以上超过 无超过 计算A328 校正 用A328计算 第二法 第二法 VitAD胶丸中VitA的含量测定精密称取本品 规格10000VitAIU 丸 装量差异项下 平均装量0 08262g 丸 的内容物0 2399g至250ml量瓶中 用环己烷稀释至刻度 摇匀 精密量取2 0ml 置另一20ml量瓶中 用环己烷稀释至刻度 摇匀 以环己烷为空白 测定最大吸收波长为328nm 并在下列波长处测得吸收度为 A300 0 354A316 0 561A328 0 628A340 0 523A360 0 216 A300 A328 0 555A316 A328 0 907A328 A328 1 000A340 A328 0 811A360 A328 0 299 求本品中维生素A的含量 A300 A328 0 564A316 A328 0 893A328 A328 1 000A340 A328 0 833A360 A328 0 344 0 5550 9071 0000 8110 299 0 01 0 010 0 02 0 04 适用于维生素A醇 等吸收度法 第一法无法消除杂质干扰时用此法 皂化法 6 7A法 3 第二法 水溶性 脂溶性 判断 max是否在323 327nm之间 取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定 计算 是 否 判断A300 A325是否大于0 73 是 否 取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定 计算A325 校正 0 3 3 三氯化锑比色法 二 优点简便快速 max618nm 620nm 标准曲线法 苯并 二氢吡喃醇 第三节维生素E 生物效价右旋体 消旋体 1 4 10 天然品 合成品 dl 生育酚醋酸酯 结构与性质 一 苯环 二氢吡喃环 饱和烃链 1 易溶于有机溶剂 不溶于水 2 UV 3 酯键易水解 一 硝酸反应 橙红色 橙红色 生育红 生育酚 HNO3 强氧化剂 取本品约30mg 加无水乙醇10ml溶解后 加硝酸2ml 摇匀 在75 加热15分钟 溶液应显橙红色 三氯化铁 联吡啶反应 二 生育酚 对 生育醌 弱氧化剂 红色 41 0 45 5 max 284nm min 254nm 0 01 无水乙醇中 维生素EUV图 薄层板硅胶G 展开剂环己烷 乙醚 4 1 显色剂硫酸 105 5 VitERf 0 7 游离生育酚 硫酸铈滴定液 0 01mol L 二苯胺 亮黄 灰紫 利用游离生育酚的还原性 将硫酸铈还原成硫酸亚铈 试剂 二 M生育酚 430 8 例 取本品0 10g 加无水乙醇5ml溶解后 加二苯胺试液1滴 用硫酸铈液 0 01mol L 滴定 消耗硫酸铈液 0 01mol L 不得过1 0ml 2 15 药典规定 消耗硫酸铈液 0 01mol L 1 0ml 设 应消耗硫酸铈液 Vml 0 01 1 0 实际浓度 V 若硫酸铈液浓度不是0 01000mol L 应重新计算硫酸铈的消耗量 例Ce SO4 2 0 01020mol L GC法 一 GC特点 1 选择性好灵敏度高速度快分离效能好 挥发性低 不稳定 极性强 衍生化易受样品蒸气压限制 载气 N2固定液 硅酮 OV 17 担体 硅藻土或高分子多孔小球柱温 265 检测器 氢火焰离子化检测器 FID 内标 正三十二烷n 500R 2 内标法加校正因子 内标法 供试液 样品 内标 内标物 对照液 对照 内标 校正因子 实际工作中的计算方法 例 内标液取正三十二烷加正己烷溶解并稀释成1 0mg ml溶液 对照液精密称取VitE对照品0 2011g置棕色具塞锥形瓶中 精密加入内标液10ml 密塞 振摇使溶解 取1 3ul注入GC仪 测定 计算 供试液精密称取供试品0 1998g置棕色具塞锥形瓶中 精密加入内标液10ml 密塞 振摇使溶解 取1 3ul注入GC仪 测定 计算 对照液 供试液 本品含C31H52O3应为96 0 102 0 BPGC内标正三十二烷R 1 4 USPGC内标十六酸十六醇酯R 1 0 JPHPLC外标dl 生育酚R 1 4 利用生育酚的易氧化性 还原型 氧化型 二苯胺 亮黄 灰紫 防止Ce SO4 2的水解减慢生育酚被O2氧化速度 C 酸性条件 Ce SO4 2易溶于水生育酚易溶于醇 B 溶剂 分子量较大 反应慢易被O2氧化 A 反应速度 MVitE 472 样品 dl 生育酚固定相 十八烷基硅烷键合硅胶流动相 甲醇 水 49 1 检测波长 292nmR 2 6RSD 0 8 测定对象 血清中VitA和VitE固定相 十八烷基硅烷键合硅胶流动相 甲醇 水 96 4 检测波长 8 前330nm8 后292nm 氨基嘧啶环 CH2 噻唑环 季铵碱 第四节维生素B1 HCl Cl 一 溶解性 1 易溶于水 2 水溶液呈酸性 二 UV 共轭双键 max 246nm 嘧啶环 伯氨 噻唑环 季铵 1 可与酸成盐 2 与生物碱 3 含量测定 非水碱量法 三 硫色素反应 四 碱性 ChP 硫色素 2H VitB1 H H H H S元素反应 Cl 反应 喹那啶红 亚甲蓝 紫红 天蓝 UV法 二 片剂 注射剂 421 每片 相当于标示量的 A ECL 规格g 片 g 100ml g ChP 每ml 相当于标示量的 规格g ml ml 准确度高灵敏度低操作繁琐设备简单 2 337 27 3479 22 取本品约50mg 精密称定 加水50ml溶解后 加盐酸2ml 煮沸 立即滴加硅钨酸试液4ml 继续煮沸2分钟 用80 恒重的垂熔玻璃坩埚滤过 沉淀先用煮沸的盐酸溶液 1 20 20ml分次洗涤 再用水10ml洗涤1次 最后用丙酮洗涤2次 每次5ml 在80 干燥至恒重 精密称定 所得重量与0 1939相乘 即得 例 精密称取本品0 0519g 加水50ml溶解 加盐酸2ml煮沸 立即滴加硅钨酸试液4ml 继续煮沸2分钟 用80 恒重的垂熔玻璃坩埚滤过 沉淀先用煮沸的盐酸溶液 1 20 20ml分次洗涤 再用水10ml洗涤1次 后用丙酮洗涤2次 每次5ml 在80 干燥至恒重 称得沉淀重量为0 2557g 求本品的含量按干燥品计算为多少 本品干燥失重项下测定结果为3 73 A 取样量 50mg提高灵敏度 B 80 保持4个H2O C HCl增大沉淀颗粒 D 硅钨酸 VitB1 8 1使沉淀完全 E 硅钨酸边搅拌边缓慢加入增大沉淀颗粒 NaOH 激发波长365nm发射波长435nm NaOH 铁氰化钾 异丁醇 NaOH 异丁醇 NaOH 铁氰化钾 异丁醇 NaOH 异丁醇 S d A b 对照液 供试液 1 灵敏度高 线性范围宽 2 代谢产物不干扰 适用于体液分析 第五节维生素C L 抗坏血酸 二烯醇结构 二酮基结构 二烯醇结构 有活性 有活性 无活性 糖类的显色反应 50 结构与糖类相似 C3 OH的pKa 4 17 C2 OH的pKa 11 57 一元酸 L 抗坏血酸活性最强 手性C C4 C5 与碱反应 1 与AgNO3反应 2 与2 6 二氯靛酚反应 ChP2000 氧化型 玫瑰红色 ChP2000 玫瑰色 无色 3 与碱性酒石酸铜反应 USP 4 与KMnO4反应 或盐酸 50 吡咯 USP 蓝色 糠醛 戊糖 BP 0 01mol LHCl 指示剂淀粉指示液 H 取本品约0 2g 精密称定 加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解 加淀粉指示液1ml 立即用碘滴定液 0 1mol L 滴定 至溶液显蓝色 在30秒内不褪 每1ml碘滴定液 0 1mol L 相当于8 806mg的C6H8O6 1 酸性环境d HCl 2 新沸冷H2O 减慢VitC被O2氧化速度 3 立即滴定 赶走水中O2 减少O2的干扰 4 附加剂干扰的排除 片剂 滑石粉 过滤 USP JP 2 快速滴定2min内 1 酸性环境HPO3 HAc 稳定VitC 防止其他还原性物质干扰 3 剩余比色测定 定量过量 测剩余染料 4 缺点 需经常标定 贮存 一周 干扰多氧化力较强 1 HPLC的优点 灵敏度高 选择性高 分离分析同步 微量分析 干扰少 快速 2 HPLC法分离VitC常用方法及测定对象 对象制剂 生物样品 果汁 方法离子交换色谱法离子对色谱法分配色谱法 正 反相 血 尿 组织 细胞等 例 多种维生素片中VitA VitB1 VitB2 VitB6 烟酰胺 VitC VitE的含量测定 色谱柱ODS流动相A 水 甲醇 4 1 B 甲醇 梯度洗脱 抗氧剂二巯基丙烷磺酸钠 水溶性维生素离子对色谱法 樟脑磺酸 内标法 校正因子内标物 苯酚 脂溶性维生素外标法 108 在三氯醋酸或盐酸存在下 经水解 脱羧 失水后 加入吡咯即产生蓝色产物的药物应是A 氯氮卓B 维生素AC 普鲁卡因D 盐酸吗啡E 维生素C 99 88 中国药典 2000年版 采用以下何法测定维生素E含量A 酸碱滴定法B 氧化还原法C 紫外分光光度法D 气相色谱法E 非水滴定法 98 79 中国药典 2000年版 采用气相色谱法测定维生素E含量 内标物质为A 正二十二烷B 正二十六烷C 正三十烷D 正三十二烷E 正三十六烷 99 77 下列药物的碱性溶液 加入铁氰化钾后 再加正丁醇 显蓝色荧光的是A 维生素AB 维生素B1C 维生素CD 维生素DE 维生素E 97 77 既具有酸性又具有还原性的药物是A 维生素AB 咖啡因C 苯巴比妥D 氯丙嗪E 维生素C 99m 132 维生素C的鉴别反应 常采用的试剂有A 碱性酒石酸铜B 硝酸银C 碘化铋钾D 乙酰丙酮E 三氯醋酸和吡咯 99m 84 测定维生素C注射液的含量时 在操作过程中要加入丙酮 这是为了A 保持维生素C的稳定B 增加维生素C的溶解度C 使反应完全D 加快反应速度E 消除注射液中抗氧剂的干扰 98 85 能发生硫色素特征反应的药物是A 维生素AB 维生素B1C 维生素CD 维生素EE 烟酸 97 81 使用碘量法测定维生素C的含量 已知维生素C的分子量为176 13 每1ml碘滴定液 0 1mol L 相当于维生素C的量为A 17 61mgB 8 806mgC 176 1mgD 88 06mgE 1 761mg 97 121 125 99 121 125 可发生以下反应或现象的药物为A 维生素B1B 维生素CC 两者均能D 两者均不能121 与碘化汞钾生成黄色沉淀122 麦芽酚反应123 在乙醚中不溶124 与2 6 二氯靛酚反应使颜色消失125 硫色素反应 A D C B A 115 维生素A的鉴别试验为A 三氯化铁反应B 硫酸锑反应C 2 6 二氯靛酚反应D 三氯化锑反应E 间二硝基苯的碱性乙醇液反应 77 中国药典 2000年版 规定维生素A的测定采用紫外分光光度法 三点校正法 此法又分为A 等波长差法B 等吸收度法C 6 7A法D 差示分光法E 双波长法 78 维生素E的鉴别试验有A 硫色素反应B 硝酸氧化呈色反应C 硫酸 乙醇呈色反应D 碱性水解后加三氯化铁乙醇液与2 2 联吡啶乙醇液呈色反应E Marquis反应 80 下面哪些描述适用于维生素AA 分子具有长二烯醇侧链 易被氧化B 具有较长的全反式共轭多烯结构C 含酯键 经水解后产生苯并二氢吡喃衍生物 易被氧化D 与三氯化锑的无醇氯仿液中呈不稳定兰色 很快转变为紫红色E 样品用无水乙醇溶解后 加硝酸加热后 呈橙红色 维生素A与反应即显蓝色 渐变成紫红色 反应需在条件下进行 维生素A分子中由于具有共轭多烯侧链 因而其性质很稳定 不易被氧化变质 三氯化锑 无水 维生素E在酸性或碱性溶液中加热可水解生成游离 当有氧或其他氧化剂存在时 则进一步被氧化成醌型化合物 尤其在碱性下更易发生 生育酚 维生素B1的噻唑环在介质中可开环 再与嘧啶环上氨基缩合环合 然后经等氧化剂氧化生成具有荧光的 加荧光消失 加荧光又显出 此反应称为反应 碱性 铁氰化钾 硫色素 酸 碱 硫色素 维生素C是元弱酸 具有强性 易被氧化剂氧化 常用作其它制剂的剂 一 还原 抗氧 维生素E中游