模型及实验仪器耗材.doc

ELISA法检测大鼠血清中FSH、LH、E2、T水平1.1实验药品试剂生理盐水，批号：20130116，山东康宁药业有限公司；无水乙醇，批号：32061，天津恒兴化学试剂制造有限公司；水合氯醛，批号：30037517，上海国药集团化学试剂有限公司；FSHELISA试剂盒，武汉俊泰生物技术有限公司，批号：E11122904LHELISA试剂盒，武汉俊泰生物技术有限公司，批号：E11100806E2ELISA试剂盒，武汉俊泰生物技术有限公司，批号：E11100804、TELISA试剂盒，武汉俊泰生物技术有限公司，批号：E111008021.2实验仪器EP管，型号：1.5ml，美国Axygen公司；玻璃匀浆器，型号：1ml，武汉科瑞生物技术有限公司；移液器，型号：0.1-2.5L，0.5-l0L，20-200L，100-1000L，美国Thermo公司；电子天平，型号：PL203，上海梅特勒托利多仪器有限公司；高压蒸汽灭菌锅，型号：YXQ-LS-75G，常州诺基仪器有限公司；全自动干燥箱，型号：DHG-9640C，杭州蓝天公司；超低温冰箱，型号：T11-86-340-LA，北京天地精仪科技有限公司；低温高速离心机，型号：CR21G，日本日立公司；多功能酶标仪，型号：spectraMAXM5，上海美谷分子仪器有限公司；Real-TimePCR、WesternBolt检测TGF-1受体蛋白表达水平1.实验药品试剂PCR所用实验用品：生理盐水，批号：20130116，山东康宁药业有限公司；无水乙醇，批号：32061，天津恒兴化学试剂制造有限公司；水合氯醛，批号：30037517，上海国药集团化学试剂有限公司；DEPC，武汉科瑞生物技术有限公司；TRIzol，批号：15596-026，美国Lifetechnologies公司；氯仿，批号：100068608，上海国药集团化学试剂有限公司；异丙醇，批号：32064，天津恒兴化学试剂制造有限公司；逆转录试剂盒，批号：RR047A，宝生物工程(大连)有限公司(大连TaKaRa公司)；SYBRPremixExTaqTM，批号：RR420A，宝生物工程(大连)有限公司(大连TaKaRa公司)；Westernbolt所用实验用品：生理盐水，批号：20130116，山东康宁药业有限公司；无水乙醇，批号：32061，天津恒兴化学试剂制造有限公司；水合氯醛，批号：30037517，上海国药集团化学试剂有限公司；脱脂奶粉，武汉科瑞生物技术有限公司；Tween-20，武汉科瑞生物技术有限公司；考马斯亮蓝快速染色液，武汉科瑞生物技术有限公司；丽春红染液，武汉科瑞生物技术有限公司；氯化钠，批号：1266-2006，天津恒兴化学试剂制造有限公司Glycine，武汉科瑞生物技术有限公司；TrisBase，武汉科瑞生物技术有限公司；SDS，武汉科瑞生物技术有限公司；二甲苯，批号：10023428，上海国药集团化学试剂有限公司；HCl，批号：81013，中国平煤神马集团开封东大化工有限公司；SDS-PAGE凝胶配制试剂盒，批号：P0012A，上海碧云天生物技术有限公司；TEMED，批号：ST728，上海碧云天生物技术有限公司；Western一抗二抗去除液（强碱性），批号：P0025，上海碧云天生物技术有限公司；WesternBlot超敏发光液，批号：P1010，北京普利莱基因技术有限公司；RIPA裂解液，批号：P0013，上海碧云天生物技术有限公司；PMSF，批号：329-98-6，北京中生瑞泰科技有限公司；BCA试剂盒，批号：P0010S，上海碧云天生物技术有限公司；Prestainedproteinloadingbuffer，批号：26617，美国Thermo公司；PrestainedproteinMWmarker，批号：26616，美国Thermo公司；5Loadingbuffer，武汉科瑞生物技术有限公司；硝酸纤维素膜，批号：T328591，美国Lifetechnologies公司；一抗：GAPDH抗体；TGF-1抗体美国millipore公司）二抗：羊抗兔二抗，羊抗鼠二抗，鼠抗羊二抗（武汉科瑞生物技术有限公司）；大鼠-actin引物、TGF-1引物。英潍捷基（上海）贸易有限公司合成并经质量检测。引物序列见表1。表1引物序列目的基因引物序列产物长度-actinForward：5-CATCCGTAAAGACCTCTATGCCAAC-3171bpReverse：5-ATGGAGCCACCGATCCACA-3TGF-1Forward：5-CAGACTCATGATGACAGAGG-3381bpReverse：5-GAGATGTACAGGATCTTCCC-31.3实验仪器PCR所需仪器EP管，型号：1.5ml，美国Axygen公司；玻璃匀浆器，型号：1ml，武汉科瑞生物技术有限公司；移液器，型号：0.1-2.5L，0.5-l0L，20-200L，100-1000L，美国Thermo公司；去酶PCR管，型号：0.2ml，美国Axygen公司；八联管、盖，型号：0.2ml，美国Axygen公司；电子天平，型号：PL203，上海梅特勒托利多仪器有限公司；高压蒸汽灭菌锅，型号：YXQ-LS-75G，常州诺基仪器有限公司；全自动干燥箱，型号：DHG-9640C，杭州蓝天公司；超低温冰箱，型号：T11-86-340-LA，北京天地精仪科技有限公司；低温高速离心机，型号：CR21G，日本日立公司；核酸蛋白分析仪，型号：DU800型，美国Beckman公司；RealTime-PCR仪，型号：CFX96，美国Bio-Rad公司；梯度PCR仪，型号：T100，美国Bio-Rad公司；Westernbolt实验仪器纯水机，型号：E30131，英国ELGALABWATER公司；制冰机，型号：SD40，广州市广绅电器制造有限公司；电子天平，型号：PL203，上海梅特勒托利多仪器有限公司；高压蒸汽灭菌锅，型号：YXQ-LS-75G，常州诺基仪器有限公司；全自动干燥箱，型号：DHG-9640C，杭州蓝天公司；全自动洗板机，型号：1575，美国BIO-RAD公司；超低温冰箱，型号：T11-86-340-LA，北京天地精仪科技有限公司；台式高速离心机，型号：TG-16W，长沙湘智离心机仪器有限公司；手掌型离心机，型号：LX-200，海门其林贝尔仪器制造有限公司；低温高速离心机，型号：CR21G，日本日立公司；转移脱色摇床，型号：TS-8型，海门其林贝尔仪器制造有限公司；滚轴式混合器，型号：SRT-202，海门其林贝尔仪器制造有限公司；数显恒温水浴锅，型号：HH-2，常州澳华仪器有限公司；旋涡混合器，型号：QL-901，海门其林贝尔仪器制造有限公司；多功能酶标仪，型号：spectraMAXM5，上海美谷分子仪器有限公司；电脑型倒置荧光显微镜，型号：DFM-60C，上海蔡康光学仪器有限公司；激光共聚焦荧光显微镜，日本Olmpus公司；蛋白电泳仪，美国Bio-Rad公司；凝胶图像成像分析仪，美国Bio-Rad公司；1.4westernbolt实验用到的溶液配制方法10%SDS-PAGE分离胶（2块胶）：蒸馏水2.7ml，10%过硫铵0.1ml，1MTris(pH8.8)3.8ml，10%SDS0.1ml，30%Acr-Bis(29:1)3.3ml，TEMED0.004ml。5%SDS-PAGE浓缩胶（2块胶）：蒸馏水2.1ml，10%过硫铵0.03ml，1MTris(pH6.8)0.38ml，10%SDS0.03ml，30%Acr-Bis(29:1)0.5ml，TEMED0.003ml。10倍电泳缓冲液：SDS10g，TrisBase30g，Glycine141.1g，蒸馏水定容至1000ml，充分搅拌至完全溶解，置冰箱4保存备用，使用时稀释10倍。转膜液：Glycine14.4g，TrisBase3.03g，蒸馏水定容至800ml，充分搅拌至完全溶解，置冰箱4保存备用，使用时加入200ml甲醇，使其终浓度为20%。TBS：TrisBase3g，NaCl8g，蒸馏水定容至800ml，充分搅拌至完全溶解，置冰箱4保存备用，使用时用HCl调pH值至7.4，以蒸馏水定容至1000ml。TBST：TBS加0.1%体积Tween-20。PBS缓冲液：Na2HPO41.42g，KCl0.2g，KH2PO40.27g，NaCl8g，加入蒸馏水800ml充分搅拌至完全溶解，用HCl调pH值至7.4，用蒸馏水定容至1000ml，高压蒸汽灭菌，置冰箱4保存备用。Real-TimePCR、WesternBolt检测Samd蛋白表达水平及其磷酸化水平1.实验药品试剂PCR所用实验用品：生理盐水，批号：20130116，山东康宁药业有限公司；无水乙醇，批号：32061，天津恒兴化学试剂制造有限公司；水合氯醛，批号：30037517，上海国药集团化学试剂有限公司；DEPC，武汉科瑞生物技术有限公司；TRIzol，批号：15596-026，美国Lifetechnologies公司；氯仿，批号：100068608，上海国药集团化学试剂有限公司；异丙醇，批号：32064，天津恒兴化学试剂制造有限公司；逆转录试剂盒，批号：RR047A，宝生物工程(大连)有限公司(大连TaKaRa公司)；SYBRPremixExTaqTM，批号：RR420A，宝生物工程(大连)有限公司(大连TaKaRa公司)；Westernbolt所用实验用品：生理盐水，批号：20130116，山东康宁药业有限公司；无水乙醇，批号：32061，天津恒兴化学试剂制造有限公司；水合氯醛，批号：30037517，上海国药集团化学试剂有限公司；脱脂奶粉，武汉科瑞生物技术有限公司；Tween-20，武汉科瑞生物技术有限公司；考马斯亮蓝快速染色液，武汉科瑞生物技术有限公司；丽春红染液，武汉科瑞生物技术有限公司；氯化钠，批号：1266-2006，天津恒兴化学试剂制造有限公司Glycine，武汉科瑞生物技术有限公司；TrisBase，武汉科瑞生物技术有限公司；SDS，武汉科瑞生物技术有限公司；二甲苯，批号：10023428，上海国药集团化学试剂有限公司；HCl，批号：81013，中国平煤神马集团开封东大化工有限公司；SDS-PAGE凝胶配制试剂盒，批号：P0012A，上海碧云天生物技术有限公司；TEMED，批号：ST728，上海碧云天生物技术有限公司；Western一抗二抗去除液（强碱性），批号：P0025，上海碧云天生物技术有限公司；WesternBlot超敏发光液，批号：P1010，北京普利莱基因技术有限公司；RIPA裂解液，批号：P0013，上海碧云天生物技术有限公司；PMSF，批号：329-98-6，北京中生瑞泰科技有限公司；BCA试剂盒，批号：P0010S，上海碧云天生物技术有限公司；Prestainedproteinloadingbuffer，批号：26617，美国Thermo公司；PrestainedproteinMWmarker，批号：26616，美国Thermo公司；5Loadingbuffer，武汉科瑞生物技术有限公司；硝酸纤维素膜，批号：T328591，美国Lifetechnologies公司；一抗：GAPDH抗体；p-Samd抗体（美国millipore公司）二抗：羊抗兔二抗，羊抗鼠二抗，鼠抗羊二抗（武汉科瑞生物技术有限公司）；大鼠-actin引物、Samd引物。英潍捷基（上海）贸易有限公司合成并经质量检测。引物序列见表2。表2引物序列目的基因引物序列产物长度-actinForward：5-CATCCGTAAAGACCTCTATGCCAAC-3171bpReverse：5-ATGGAGCCACCGATCCACA-3SamdForward：5-CACTGGTTCCGAAAGGGACTC-3153bpReverse：5-CTGAAGCAAAAATCGCCACCT-31.3实验仪器PCR所需仪器EP管，型号：1.5ml，美国Axygen公司；玻璃匀浆器，型号：1ml，武汉科瑞生物技术有限公司；移液器，型号：0.1-2.5L，0.5-l0L，20-200L，100-1000L，美国Thermo公司；去酶PCR管，型号：0.2ml，美国Axygen公司；八联管、盖，型号：0.2ml，美国Axygen公司；电子天平，型号：PL203，上海梅特勒托利多仪器有限公司；高压蒸汽灭菌锅，型号：YXQ-LS-75G，常州诺基仪器有限公司；全自动干燥箱，型号：DHG-9640C，杭州蓝天公司；超低温冰箱，型号：T11-86-340-LA，北京天地精仪科技有限公司；低温高速离心机，型号：CR21G，日本日立公司；核酸蛋白分析仪，型号：DU800型，美国Beckman公司；RealTime-PCR仪，型号：CFX96，美国Bio-Rad公司；梯度PCR仪，型号：T100，美国Bio-Rad公司；Westernbolt实验仪器纯水机，型号：E30131，英国ELGALABWATER公司；制冰机，型号：SD40，广州市广绅电器制造有限公司；电子天平，型号：PL203，上海梅特勒托利多仪器有限公司；高压蒸汽灭菌锅，型号：YXQ-LS-75G，常州诺基仪器有限公司；全自动干燥箱，型号：DHG-9640C，杭州蓝天公司；全自动洗板机，型号：1575，美国BIO-RAD公司；超低温冰箱，型号：T11-86-340-LA，北京天地精仪科技有限公司；台式高速离心机，型号：TG-16W，长沙湘智离心机仪器有限公司；手掌型离心机，型号：LX-200，海门其林贝尔仪器制造有限公司；低温高速离心机，型号：CR21G，日本日立公司；转移脱色摇床，型号：TS-8型，海门其林贝尔仪器制造有限公司；滚轴式混合器，型号：SRT-202，海门其林贝尔仪器制造有限公司；数显恒温水浴锅，型号：HH-2，常州澳华仪器有限公司；旋涡混合器，型号：QL-901，海门其林贝尔仪器制造有限公司；多功能酶标仪，型号：spectraMAXM5，上海美谷分子仪器有限公司；电脑型倒置荧光显微镜，型号：DFM-60C，上海蔡康光学仪器有限公司；激光共聚焦荧光显微镜，日本Olmpus公司；蛋白电泳仪，美国Bio-Rad公司；凝胶图像成像分析仪，美国Bio-Rad公司；1.4westernbolt实验用到的溶液配制方法10%SDS-PAGE分离胶（2块胶）：蒸馏水2.7ml，10%过硫铵0.1ml，1MTris(pH8.8)3.8ml，10%SDS0.1ml，30%Acr-Bis(29:1)3.3ml，TEMED0.004ml。5%SDS-PAGE浓缩胶（2块胶）：蒸馏水2.1ml，10%过硫铵0.03ml，1MTris(pH6.8)0.38ml，10%SDS0.03ml，30%Acr-Bis(29:1)0.5ml，TEMED0.003ml。10倍电泳缓冲液：SDS10g，TrisBase30g，Glycine141.1g，蒸馏水定容至1000ml，充分搅拌至完全溶解，置冰箱4保存备用，使用时稀释10倍。转膜液：Glycine14.4g，TrisBase3.03g，蒸馏水定容至800ml，充分搅拌至完全溶解，置冰箱4保存备用，使用时加入200ml甲醇，使其终浓度为20%。TBS：TrisBase3g，NaCl8g，蒸馏水定容至800ml，充分搅拌至完全溶解，置冰箱4保存备用，使用时用HCl调pH值至7.4，以蒸馏水定容至1000ml。TBST：TBS加0.1%体积Tween-20。PBS缓冲液：Na2HPO41.42g，KCl0.2g，KH2PO40.27g，NaCl8g，加入蒸馏水800ml充分搅拌至完全溶解，用HCl调pH值至7.4，用蒸馏水定容至1000ml，高压蒸汽灭菌，置冰箱4保存备用。1.多囊卵巢综合征动物模型选择多囊卵巢综合征(polycysticovarysyndromePCOS)是妇科常见的生殖功能障碍性疾病,主要表现为卵巢的雄激素过多所造成的闭经、多毛、肥胖及无排卵,其发生率占生育年龄妇女的5%10%1。目前