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1 微生物基础知识培训 谢英2011 05 2 一微生物是什么 微生物基础 二为什么要控制微生物 危害 三怎样控制微生物 方法 3 1 微生物与人类微生物无处不在 我们无时不生活在 微生物的海洋 中 细菌数亿 g土壤 土壤中的细菌总重量估计为 10034 1012吨 每张纸币带细菌 900万个 人体体表及体内存在大量的微生物 皮肤表面 平均10万个细菌 平方厘米 口腔 细菌种类超过500种 肠道 微生物总量达100万亿 粪便干重的1 3是细菌 粪便的细菌总数为 1000亿个 g 每个喷嚏的飞沫含4500 150000个细菌 4 微生物既是人类的敌人 更是人类的朋友 福 微生物在许多重要产品中所起的不可替代的作用 例如 面包 奶酪 啤酒 抗生素 疫苗 维生素 酶等重要产品的生产 体内的正常菌群是人及动物健康的基本保证 帮助消化 提供必需的营养物质 组成生理屏障 是人类生存环境中必不可少的成员 有了它们才使得地球上的物质进行循环 以基因工程为代表的现代生物技术的发展及其美妙的前景也是微生物对人类作出的又一重大贡献 5 祸 少数微生物也是人类的敌人 鼠疫 艾滋病 AIDS 癌症 肺结核 虐疾 霍乱 卷土重来 埃博拉病毒 疯牛病 SARS 禽流感等 可以说 微生物与人类关系的重要性 你怎么强调都不过分 微生物是一把十分锋利的双刃剑 它们在给人类带来巨大利益的同时也带来 残忍 的破坏 它给人类带来的利益不仅是享受 而且实际上涉及到人类的生存 在近代科学中 对人类福利最大的一门科学 要算是微生物学了 6 2 微生物的定义 微生物是指个体微小 必须借助于显微镜才能看清它们外形的一群低等的 原始的微小生物 7 3 微生物的特点 微生物是结构简单 繁殖快 分布广 个体非常小的生物 结构简单 微生物多数是单细胞 生长旺 繁殖快如 大肠杆菌在它的适宜37 44 之间 20 30分钟繁殖一代 分布广 种类多 10万多种 水 空气 土壤 人体个体小 小于0 1mm 肉眼不可见 适应性强 易变异抗药性的产生如 洋葱假单胞菌 荧光假单胞菌代谢强 转化快 8 4 微生物分类 按细胞结构 原核类 一般为单细胞 细菌 立克次氏体 衣原体 支原体 古细菌 真核类 真菌 单细胞藻类 原生动物等 非细胞类 病毒 亚病毒 9 4 1细菌 细菌是微生物的一大类 大小约一至数微米 呈球形 杆形 弧形 螺形或长丝形 有的具芽孢 鞭毛或荚膜 以二等分分裂繁殖为主 除部分自养细菌外 多营腐生或寄生生活 遍布于土壤 水 空气 有机物质中及生物体内和体表 对自然界物质循环起着巨大作用 10 常见细菌 11 4 2真菌 真菌根据是单细胞还是多细胞分为两类 单细胞的是酵母菌 多细胞的生物又根据大小分两类 比较大的且可以用肉眼看到的是食用菌 比较小的且用肉眼看不到的生物又根据生殖细胞孢子形状分为两类 孢子形状为放射状的为曲霉 孢子形状为扫帚状的为青霉 12 常见真菌 13 常见的大型真菌 14 4 3病毒 病毒 Virus 是一类没有细胞结构但有遗传 变异 共生 干扰等生命现象的微生物 一般能通过细菌滤器 故也称 滤过性病毒 多数要用电子显微镜才能观察到 各种病毒具有不同的大小 结构和形态 只能在一定种类的活细胞中增殖 基本化学组分为核酸和蛋白质 但某些病毒尚可含有脂类 多糖及无机盐类等 病毒能引起人和动植物的病害 如爱滋病 AIDS 病毒 SARS病毒 15 常见病毒 16 5 微生物的细胞形态 葡萄球菌 17 杆菌 18 分裂的大肠杆菌黑曲霉 黑曲霉弧状菌 19 脚气真菌酵母菌 蜡状芽孢杆菌链球菌 20 面包酵母啤酒酵母 球菌沙门氏菌 21 大肠埃希菌阴沟肠杆菌 6 微生物的菌落形态 22 6 微生物的菌落形态 铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌 23 6 微生物的菌落形态 细菌霉菌 酵母菌 24 7 微生物在自然界的分布 自然界中微生物的分布极为广泛水中高山海底荒漠极地空气 25 7 1土壤中的微生物 微生物的天然培养基含有有机物 无机物 水份 CO2 O2 N2适合大多数微生物生长 恒温 10 25 自养菌和腐物寄生菌土壤中微生物的分布表层细菌数量少离地面10 20厘米土层微生物最多 细菌107CFU g 真菌105CFU g土层越深 菌数越少 26 7 2水中的微生物 微生物存在的天然环境水中的细菌来自土壤 尘埃 污水 人畜排泄物及垃圾等 微生物种类及数量因水源而不同假单胞菌 不动杆菌 肠杆菌科细菌 生存环境受到污染的水中含有大量的有机物 适合微生物的生存 流水不腐国家法规自来水标准细菌总数不得超过100CFU mL大肠菌群不得超过3CFU L 27 7 3空气中的微生物 不易生长繁殖空气中由于缺乏营养物质 干燥及日光的照射 大部分的微生物被杀死 由于空气的流动 风的作用 使地面的微生物飞扬到空中 因而 接近地面的空气层 就含有一定的微生物 虽然空气中的微生物数量较少 但危害大 因为空气流动快 流动的范围广 影响面大 大城市上空微生物数量最多 乡村少 森林 草地和田野上空空气清洁 海洋 高山 冰雪覆盖的地面上空 微生物更为稀少 雨后空气特别新鲜 空气流通对微生物传播的影响 28 7 4人体中的微生物 存在部位人体皮肤粘膜与外界相通的各种控道如口腔 鼻咽腔 肠道和泌尿道等部位人体四大菌库 肠道 口腔 皮肤 阴道 29 7 4人体中的微生物 人体四大菌库 肠道 大肠中有400 500个种和亚种 每克干粪中含菌数约1011 1012CFU 口腔 唾液中的细菌数约108CFU ml皮肤 过路菌 多为非致病葡萄球菌阴道 乳杆菌 30 7 4人体中的微生物 环境中分离的菌落形态 31 8 药品微生物检验技术概述 药品微生物检验技术是一门包括洁净检测技术 无菌操作技术 微生物分析 定性和定量 技术和消毒与灭菌等技术在内的综合性专业技术学科 医药企业的微生物实验室依法承担产品的微生物学检测任务 为保证产品的质量 还需承担相关设施 设备的微生物监控或微生物污染水平的检测及药品生产工艺过程中防止微生物污染的控制措施和方法的验证等任务 32 药品微生物检查的主要内容 无菌检查对于规定灭菌的药物 包括注射剂 用于体腔 严重烧伤 溃疡及眼科用药等 必须严格无菌 即在规定检验量的供检样品中不得检出活微生物 限度检查对于非规定灭菌的药物 包括常用的口服制剂及局部外用制剂等 允许在规定量的样品中 检出一定限量的微生物 但不得检出某些控制菌 药品中污染的微生物数量反映了药品的卫生质量 如果染菌数量越多 污染致病菌的可能性越大 因此 微生物限度指标是评价药品质量安全性的一项主要内容 33 微生物限度检查的内容 1 染菌量检查 活菌数测定 测定单位重量 体积或面积 药品中的细菌数及真菌数 霉菌和酵母菌数 CFU g或CFU ml2 控制菌检查测定单位重量 体积或面积 药品中粪便污染指示菌和某些特定菌 如大肠埃希菌 大肠菌群 沙门菌 金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 梭菌 螨等在规定量的样品中不得检出或不超过某限度 指大肠菌群 34 微生物限度检查的意义 药品染菌对使用者产生潜在危害药品染菌反映药品质量及生产管理水平微生物限度检查的各项数据 是对药品生产工艺 生产环境 质量管理及人员素质的综合评价依据之一 制药企业实施GMP 对药品生产厂房 车间 原料 辅料 工艺流程及操作人员等的微生物学要求均有严格规定 只有优良的GMP企业 才能提供优质的医药产品 那些卫生条件差 不文明生产 管理不力的企业和单位 生产的药品染菌必然严重 35 9 标准控制的几种微生物 9 1肠杆菌科细菌定义 指一大群生物学性状相似 寄居在人和动物肠道的非致病菌 条件致病活致病的革兰氏阴性杆菌 分类 大肠埃希菌沙门菌大肠菌群 阴沟肠杆菌 36 9 标准控制的几种微生物 特点 它们随人及动物排泄物广泛分布于自然界 这些细菌与人类关系甚为密切 大肠菌群为人和动物肠道中的常居菌 在一定条件下可引起肠道外感染 若水中或药品食品中发现有大肠菌群 即可证实已被粪便污染 也可能就有肠道病原菌存在 据此 可以认为存在大肠菌群的水或食品是不安全的 37 9 标准控制的几种微生物 大肠菌群在自然界中分布广泛 在15 46 均可生长 最适生长温度为37 在水和土壤中大量存在 对自然环境有较强的抵抗力 主要污染的食品是肉类 水产品 蔬菜等 300ppm次氯酸纳溶液1 3分钟内杀灭本菌 85 热水1 3分钟内杀灭本菌 38 9 标准控制的几种微生物 HJ标准控制菌 自来水 纯水 100ml不得检出大肠菌群原料药 甲苯 氟苯 盐左 黄体酮 10g或1g产品中不得检出大肠埃希菌 10g产品中不得检出沙门氏菌 39 9 标准控制的几种微生物 9 2 金黄色葡萄球菌定义 为葡萄球菌属中的一种 是常见的化脓性球菌 因其排列不规则 常堆聚成葡萄串状 故称之为葡萄球菌 该属中绝大多数不致病 仅少数引起人和动物致病 致病机理 能产生多种毒素及酶 这些毒性物质是它致病力强的物质基础 能引起局部及全身化脓性炎症 严重时发展成为败血症及脓毒血症 是人类化脓性感染中最重要的病原菌 40 9 标准控制的几种微生物 特点 分布广泛 空气 土壤 水 物品 人和动物的体表 粘膜等处均有存在 培养特征 营养要求不高需氧及兼性厌氧在12 45 生长繁殖 最适生长温度为37 抵抗力较强 在干燥环境中能生存数月经80 C30分钟条件下尚能存活 41 9 标准控制的几种微生物 繁殖区域 伤口化脓的地方 疙疽 粉刺 口 鼻子等处繁殖 污染来源于手指的可能性很高 预防 手指处有伤口 化脓口的人 不要直接接触产品 彻底对手指进行洗净消毒 戴手套 戴帽子 戴口罩 42 9 标准控制的几种微生物 9 3沙门菌定义 沙门菌是一群形态和培养特性都类似的肠杆菌科的一个大属 也是肠杆菌科中最重要的病原菌 沙门菌常在动物中广泛传播 人的沙门菌感染也非常普遍 世界上沙门菌的食物中毒占首位 因此 检查药品食品中的沙门菌非常重要 43 9 标准控制的几种微生物 生存环境该菌在水中不易繁殖 但可生存2 3周 冰箱中可生存3 4个月 在25 可存活10个月 在自然环境的粪便中可存活1 2个月 繁殖条件沙门氏菌最适繁殖温度为37 在20 以上能大量繁殖 因此 低温储存食品是一项重要预防措施 防止交叉污染也是防止该菌污染的至为重要的措施 污染渠道沙门氏菌的来源主要是患病的人和动物 及人和动物的带菌者 其中在肉类中最为多见 淡水鱼虾有时带菌 海产鱼虾一般带菌者较小 该菌不耐热 44 杀灭条件沙门氏菌对热及外界环境的抵抗力属于中等 60 20 30分钟 75 5分钟即被杀死 100 条件下该菌立即被杀死 HJ标准控制菌 原料药 10g或1g产品中不得检出大肠埃希菌 9 标准控制的几种微生物 45 9 标准控制的几种微生物 9 4铜绿假单胞菌定义 属假单胞菌属 是一大类严格需氧的革兰氏阴性菌特点 在自然界分布极广空气 土壤 淡水 污水 动植物体表 人体皮肤粘膜多种传播途迳假单胞菌是药物及其制剂中常见的污染菌 46 9 标准控制的几种微生物 致病性 条件致病菌引起化脓性疾病抵抗力 对外环境的抵抗力强于其他革兰氏阴性菌在潮湿处可长期生存能在苯扎溴胺等消毒剂中生存对磺胺药及大多数抗生素不敏感 天然耐药菌 之称预防 勤洗手 消毒液消毒 戴手套 口罩 47 9 标准控制的几种微生物 纯水标准50ml中不得检出药典标准外用制剂及其原辅包 10g或1g中不得检出 48 10 预防 控制微生物污染 严格遵守GMP要求环境卫生物料卫生设备卫生人员卫生 49 10 1环境卫生 高效过滤器清洁和消毒空气尘埃粒子和微生物监测 50 1 门 窗 各种管道 灯具 风口及其它公用设施 墙壁与地面的交界处等应保持洁净 无浮尘 2 地漏干净 经常保持密封状态 盖严上盖 3 洗手池 工具清洗池等设施 里外应保持 无浮尘 垢斑和水迹 4 缓冲室 传递柜 传递窗等缓冲设施两门不能同时打开 在不工作时 注意关闭传递柜 窗 的门 5 洁净区所用的各种器具 容器 设备 工具 台 椅 清洁工具等均应选用无脱落物 易清洗 易消毒 不生锈 不长霉的材质 不宜使用竹 木 陶瓷 铁等材质 不宜使用不易清洗 凹陷或凸出的架 柜和设备 6 清洁工具用后 要及时清洗干净 消毒并及时干燥 置于通风良好的洁具清洗间内规定的位置 用前 用后要检查拖布 抹布是否会脱落纤维 不同空气洁净度级别的生产区使用不同的清洁工具 二者不能互用 7 定期对洁净室进行消毒 消毒剂要定期交替使用 8 必须定期监控洁净室的环境 51 10 2物料卫生 非洁净区进入的物料 原辅料 包材 公用供应 水 压缩空气 物料的前期保护检验和定期的监测 52 1 进入生产的原辅料必须符合标准 不洗即用的内包装材料 容器 其生产环境的空气洁净度级别必须与药品生产相一致 对可以重复使用的盛装容器 应按SOP要求清洗干净 2 直接与药品 中间产品 接触的设备 工具 容器 内包装容器最后一次冲洗用水应与生产用水一致 3 物料净化用室包括物料清洁室 消毒室 气闸室或传递柜 窗 备料室 弃废 物料出口的专用传递设施等 4 物料应经净化或消毒灭菌后通过物流通道进入 5 物流通道不能作为通路 6 生产过程中产生的废弃物出口不能与物料进口合用同一气闸或传递柜 窗 宜单独设置专用传递设施 53 10 3设备卫生 所有洁净区的设备 尤其是直接接触产品的设备和器具清洁消毒程序防止交叉污染 54 10 4人员卫生 最大的污染源更衣 消毒 防护用品个人行为 跑步 抓头发 打喷嚏 感冒 伤口 及时报告 换岗 55 1 人是洁净室最大的污染源之一 1 人及其活动产生大量的尘埃粒子污染洁净室 人在自然活动时 人体散发出的热量可形成一股热流 使大于0 3 m的微小粒子扩散 扩散量可达到每分钟近千百万粒 粒子中大部分是10 300 m的皮屑 粒子由衣服 皮肤 头发 嘴巴 鼻腔及化妆品等途径往外散发 粒子污染了洁净室 56 人体所散发的粒子数 0 3 m 57 2 人身上携带的各种微生物污染洁净室 人体给微生物生长繁殖创造了良好的环境 人体各部份都生长着各类微生物 甚至某些部位存在着 常居细菌 它们的存在对人体可能无害 但对于生产药品的洁净室 尤其是无菌室却是不允许的 甚至是致命的 58 人体各部位的正常微生物 59 3 手是一个重要的污染源 手部的汗毛 油脂 皮层 皮肤只要与