T-SPOT诊断结核感染课件.ppt

T SPOT TB诊断结核感染临床应用进展 1 医药交流PPT 主要内容 结核病及其诊断现状T SPOT TB的原理及其特点T SPOT TB技术的应用 2 医药交流PPT 主要内容 结核病及其诊断现状T SPOT TB的原理及其特点T SPOT TB技术的应用 3 医药交流PPT 结核的现状 结核病是全球严重的公共卫生问题之一 据WHO统计 全球约有20亿人感染结核分枝杆菌 每年有约200万人死于结核 我国是世界上22个结核病高负担国家之一 结核感染导致的死亡人数是其他传染性疾病总死亡人数的2倍以上 4 医药交流PPT 中国是结核感染高负担国家 患者人数占全球的14 3 具体表现为 五多 感染人数多 5 5亿人感染过结核患病人数多 现有活动性肺结核患者500万潜伏感染人数多 受限于检测条件较难统计 2009年流行病调查结果为总人口的44 5 因采用PPD检测 假阳性较多 新发患者多 仅活动性肺结核2009年新发病患107万死亡人数多 13万 年 5 医药交流PPT 结核的传统诊断手段 结核菌素皮试 低敏感性 免疫力低下人群中其敏感性大大降低 低特异性 与卡介苗接种和其他环境分枝杆菌有交叉 易造成 假阳性 结果 免疫学诊断 抗原 抗体 胶体金 细菌学检查 常规培养 2月 快速培养 1周 涂片阳性率取决于采集标本中细菌数量 不利于早期诊断 病理学检查 阳性率低 对取材有较高要求 有创伤 对肉芽肿性病变需进一步鉴别 分子生物学诊断 PCR影像学检查 6 医药交流PPT 免疫学诊断 PPD皮肤试验 抗体检测 假阳性率高48 72h读取结果 敏感性 特异性差 7 医药交流PPT WHO关于血清学检测声明 2011年7月20日 世界卫生组织 WHO 正式声明 要求禁止将血清学检测方法 抗原 抗体 蛋白芯片等 用于肺结核和肺外结核的诊断 WHOwarnsagainsttheuseofinaccuratecommercialserologicaltestsforpulmonaryandextra pulmonaryTB AsubstandardtestwithunreliableresultsTBcanbewronglydiagnosedAserologicaltestfordiagnosingactiveTBdiseaseisbadpracticeProblemsofmisdiagnosisTheinaccurateserologicaltestsarecostlySellingsubstandardtestswithunreliableresults 8 医药交流PPT 细菌学诊断 阳性率低含菌量 1万 mL痰液 需时4 6周 9 医药交流PPT 快速培养系统 1 BDBACTECMGIT960培养系统2 BacTALERT3D培养系统 10 医药交流PPT 分子生物学诊断 实时荧光定量PCR技术 HRM 线性探针耐多药检测技术 HAIN技术 基因芯片 PCR 电离质谱检测技术 11 医药交流PPT 病理学检查 阳性率低对取材有较高要求 有创伤对肉芽肿性病变需进一步鉴别 12 医药交流PPT 影像学检查 目前诊断活动性肺结核的重要手段 尤其是粟粒性肺结核对潜伏性结核诊断价值不大对肺外结核诊断价值不大 13 医药交流PPT 现有检测手段不能满足临床要求 假阴性 免疫力低下或HIV人群 新生儿 老弱人群 药物影响 假阳性 BCG接种人群 其它分支杆菌感染 交叉污染肺外的结核感染无法明确诊断抗痨治疗疗效无法评价无法排筛结核感染 造成生物制剂或移植手术治疗后病患免疫力下降 引发结核 形成医疗事故 14 医药交流PPT 主要内容 结核病及其诊断现状T SPOT TB的原理及其特点T SPOT TB技术的应用 15 医药交流PPT 21世纪结核检测的重大突破 干扰素释放实验 IGRAs 被商化 2006年 用于结核感染的检测将结核菌特异性抗原加入含受试者的血液标本的培养基中进行孵化 如果受试者受到过MTB感染 那么被结核菌激活的记忆T细胞就会对这些特异性抗原产生反应 发生增殖分化并释放 干扰素通过定量检测 干扰素的释放水平 来诊断MTB感染T SPOT TB 结核感染T细胞斑点试验 16 医药交流PPT 17 医药交流PPT 基于T淋巴细胞检测结核感染的原理 结核感染的免疫应答反应以细胞免疫为主 结核感染后体内长期存在抗原特异性的记忆性T细胞当再次遇到抗原刺激时 能迅速活化增殖 释放r干扰素r干扰素是结核分枝杆菌感染后机体免疫应答中最重要的细胞因子 18 医药交流PPT 基于T淋巴细胞检测结核感染的原理 T SPOT TB技术 利用结核杆菌感染者外周血单核细胞 PBMC 中存在结核特异性T细胞 这些淋巴细胞在受到结核特异抗原刺激后分泌r干扰素而设计的T细胞免疫斑点试验 检测外周血中受结核特异抗原刺激释放r干扰素的T淋巴细胞 经酶联免疫显色后 通过ELISPOT分析系统对斑点进行计数 1个斑点代表一个细胞 计算出抗原特异性细胞的频率 19 医药交流PPT 基于T淋巴细胞检测结核感染的原理 包 20 医药交流PPT 基于T淋巴细胞检测结核感染的原理 患者体内存在针对MTB的效应T淋巴细胞 患者体内不含针对MTB的效应T淋巴细胞 21 医药交流PPT T SPOT TB的临床意义 T SPOT TB高灵敏度 22 医药交流PPT T SPOT TB的临床意义 23 医药交流PPT T SPOT TB的临床意义 T SPOT TB高特异性ESAT 6 CFP10均来自结核分枝杆菌基因组RD1区域仅结核分枝杆菌复合群 人型 牛型 非洲型 存在RD1区基因卡介苗和大多数环境分枝杆菌缺失RD1区基因 M gordonae M kansasii M marinum M szulgai T SPOT TB不会受卡介苗接种及其他分枝杆菌的影响 24 医药交流PPT T SPOT TB的临床意义 25 医药交流PPT T SPOT TB的高特异性与灵敏度 给临床准确 快速的诊断结果 特异性美国FDA临床研究数据 特异性97 1 297 306 国内临床研究数据 特异性94 1 478 508 灵敏度美国FDA临床研究数据 灵敏度95 6 175 183 国内临床研究数据 灵敏度95 3 624 655 26 医药交流PPT T SPOT TB的临床意义 基于结核抗原特异性T细胞向病变部位集中的特点 T SPOT TB的检测物已不局限于静脉血 支气管肺泡灌洗液 痰液 胸腹水 脑脊液等也可用于对肺内及肺外结核的诊断 敏感性优于ADA TB DNA 约在62 75 特异性无统计学差异 27 医药交流PPT T SPOT TB的临床意义 在结核病治疗中的评价意义效应T细胞随结核杆菌的清除而消失 其阴性及阳性结果可作为评估治疗效果的手段之一 28 医药交流PPT T SPOT TB的缺点 仍有一定的假阳性及假阴性结果实验结果是对结核感染的判断 阳性结果包括了活动性结核及潜伏性结核感染的可能 需要结合临床来确诊是否是结核病患者不能够提示临床患者的病变部位 需要结合临床来判断 29 医药交流PPT 主要内容 结核病及其诊断现状T SPOT TB的原理及其特点T SPOT TB技术的应用 30 医药交流PPT 病例1 患者 男 35岁 患者于一月前开始无诱因下出现高热 胸闷 动则气急 无咳嗽 咯血 盗汗 胸片 两肺 右侧胸腔积液 心包积液 心超 心包积液 心包穿刺 血性 诊断 肿瘤 结核 细菌感染 31 医药交流PPT 检测结果 外周血T SPOT TB 阳性 心包积液T SPOT TB 阳性 诊断 结核性心包炎 治疗 INH RFP PZA EMB 强的松 体会 诊断快速 心包积液结核培养6周后报阳 32 医药交流PPT 病例2 患者 女性 60岁 浙江温州人 主诉 反复发热2月余 头痛2周伴意识障碍2天 外院头颅MRI见脑实质内弥漫性点状 结节状及环形病灶 有皮肌炎史 外院予激素治疗 33 医药交流PPT 腰穿 压力250mmH2O 有核细胞420 x106 L 糖0 6mmol L 蛋白1688mg L 氯化物136mmol L 隐球菌乳胶凝集试验 阴性 34 医药交流PPT 治疗 抗细菌 抗结核 美罗培南 利奈唑胺 异烟肼 利福平 吡嗪酰胺 乙胺丁醇治疗 同时予甘露醇250mlq8h及地塞米松每天7 5mg 2天后患者体温即平 意识障碍好转 脑脊液T SPOT TB 阳性 诊断 倾向结核性脑膜脑炎 35 医药交流PPT 五联抗结核 给予HRZE及左氧五联抗结核 2周后 CSF分枝杆菌快速培养 阳性 3个月后 36 医药交流PPT 病例3 女性 14岁 初中学生 主诉 发热1月余 患者5月初无明显诱因下出现发热 Tmax 39 以午后为著 伴头晕 畏寒 盗汗 不伴寒战 咳嗽 咳痰 四肢肌肉痛 皮疹等 家人自行予退烧药 具体药物不详 体温可恢复正常 但午后体温仍反复 2013 05 24患者就诊 查血常规示 WBC 4 7x109 L N 43 2 查尿常规示 WBC 8 10个 HP Pro 考虑为尿路感染 予头孢丙烯等抗感染治疗 但仍出现反复发热 病程中 患者无尿频 尿急 尿痛 腹胀 腹痛 腰痛等不适 2013 06 01予希刻劳0 5g及罗氏芬2 5g对症治疗后体温有所好转 但停药后体温仍上升 2013 06 09查肺CT示 左肺上叶炎性病变 增强CT示 左肺上叶炎性病变 左肺门及纵膈淋巴结肿大 B超示 左侧锁骨上 双侧腋窝 右腋下明显 淋巴结肿大 37 医药交流PPT 结核病的实验室诊断停留在上世纪50年代水平 38 医药交流PPT 入院后实验室检查 血常规 WBC 3 83x109 L N 50 4 L 39 4 M 9 9 Hb 118g L PLT 231x109 L ESR 71mm h CRP 正常 尿常规 自身抗体 肿瘤标记物 T SPOT TB 39 医药交流PPT 上腹部增强CT 40 医药交流PPT 肺CT 2013 06 24肺CT 增强 左肺上叶炎症 结核可能 纵隔内多发肿大淋巴结可能 淋巴结结核可能 41 医药交流PPT 淋巴结穿刺 右腋下淋巴结穿刺涂片 见大量淋巴细胞 少量凝固性坏死物 上皮样细胞 结核性淋巴结炎可能 42 医药交流PPT 诊断 亚急性血源播散性结核病 肺结核 淋巴结结核 脾结核 抗结核治疗 HREZ HEZS 43 医药交流PPT 潜伏性结核感染的筛查 接触活动性结核病患者 暴露程度不足 结核杆菌被机体免疫力清除 没有症状 结核杆菌仍旧存在而不能被侦测X 光 CT扫描显示正常没有抗体应答诊断困难传统的结核感染检测只有TST PPD 机体被感染 受机体免疫力抑制没有临床症状 终身处于感染状态 潜伏感染 有临床症状具有传染性 结核杆菌可