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文档简介

一 酶的固定化 固定化酶 将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在某种介质上 使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂 实验6 淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测 直接使用酶和固定化酶的优缺点 一 吸附法将酶液与具有活泼表面的吸附剂接触 再经洗涤除去未吸附的酶便能制得固定化酶 是最简单的固定化技术 在经济上也最具有吸引力 二 酶的固定化方法 二 包埋法 将酶分子包埋在高聚物网格内的包埋方法 三 共价偶联法酶蛋白分子上的功能基团和固相支持物表面上的反应基团之间形成共价键 因而将酶固定在支持物上 四 交联法酶分子和多功能试剂之间形成共价键得到三维的交联网状结构 实验原理 本实验是用吸附法将a 淀粉酶固定在石英砂上 一定浓度的淀粉溶液经过固定化酶柱后 可使淀粉水解成糊精 用淀粉指示剂溶液测试 流出物呈红色表明水解产物糊精生成 这里使用的是枯草杆菌的a 淀粉酶 其作用的最适温度为50 75 最适pH为5 5 7 5 遇碘显蓝色 遇碘显红色 遇碘不显色 三 实验 设备及用品 5ml塑料注射器 50ml烧杯 滴管 自行车用气门心及夹子 注射器架 试管及微量离心管3支 材料 1 a 淀粉酶的固定化 在烧杯中将5mga 淀粉酶溶于4ml蒸馏水中 由于酶不纯 可能有些不溶物 再加入5g石英砂 不时搅拌 30min后装入1支下端接有气门心并用夹子封住的注射器中 石英砂体积约4ml 用10倍体积的蒸馏水洗涤此注射器以除去未吸附的游离淀粉酶 流速为1ml min 2 可溶性淀粉溶液 取50ml可溶性淀粉溶于100ml热水中 搅拌均匀 3 5mmol LKI I2溶液 称取0 127g碘和0 83g碘化钾 加蒸馏水100ml完全溶解后装入滴瓶中 酶固定在石英砂上 淀粉 糊精 步骤 1 将灌注了固定化酶的注射器放在注射器架上 用滴管滴加淀粉溶液 使淀粉溶液以0 3ml min的流速过柱 在流出5ml后接收0 5ml流出液 加入1 2滴KI I2溶液 观察颜色 用水稀释1倍后再观察颜色 前5mL不用是可能反应不充分 糊精少 2 实验后 用10倍柱体积的蒸馏水洗涤此柱 放置在4 冰箱中 几天后再重复上述实验 看是否有相同的结果 淀粉溶液加指示剂 亲和层析洗脱液加指示剂 洗去残留淀粉 课后练习 1 如何证明洗涤固定化酶柱的流出液中没有淀粉酶 2 耐高温的淀粉酶有哪些可能的用途 可在试管中加入1ml可溶性淀粉 再加几滴淀粉酶柱流出液 保温几分钟后用碘液检验 如仍显蓝色 则流出液中没有淀粉
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