微生物基础知识和GMP卫生管理幻灯片.ppt

微生物基础知识和GMP卫生管理 培训是为了共同提高 第一部分 微生物基础知识第二部分 GMP与微生物第三部分 卫生管理 目录 微生物 microorganism 是存在于自然界的一大群体形微小 结构简单 肉眼直接看不见 必须借助光学显微镜或电子显微镜放大数百倍 数千倍 甚至数万倍才能观察到的微小生物 特点 1 种类多 分布广2 个体小 面积大3 吸收多 转化快4 适应强 异变异 第一部分微生物基础知识 细菌的形态 微生物特点 种类多 分布广微生物在地球上几乎无处不有 无孔不入 人的皮肤上 口腔 肠道里都有许多微生物 微生物聚集最多的地方是土壤 哪里尘埃多 哪里的微生物就多 迄今为止 我们知道的微生物约有10万种 目前已知的种类只占地球上实际存在的微生物总数的20 人类生产和生活中仅开发利用了已发现微生物种数的1 个体小 面积大生物的个体极其微小 必须借助显微镜放大几倍 几百倍 上千倍 乃至数万倍才能看清 杆菌的宽度是0 5微米 因此80个杆菌 肩并肩 地排列成横队 也只有一根头发丝的宽度 杆菌的长度约2微米 故1500个杆菌头尾衔接起来仅有一颗芝麻长 物体的表面积和体积之比称为比表面积 大肠杆菌的比表面积是人的30万倍 吸收多 转化快微生物有惊人的繁殖速度 大多数微生物几十分钟内就可以繁殖一代 如细菌一般每20 30分钟既可分裂一次 微生物的食谱非常广泛 凡是动植物能利用的营养 微生物都能利用 大量的动植物不能利用的物质 甚至剧毒的物质 微生物照样可以视为美味佳肴 如大肠杆菌在合适条件下 每小时可以消耗相当于自身重量2000倍的糖 而人体则需要40年之久 适应强 异变异多数细菌能耐0 196 的低温 在海洋深处的某些硫细菌可在250 300 的高温条件下正常生长 一些嗜盐细菌甚至能在饱和盐水中正常生活 产芽孢细菌和真菌孢子在干燥条件下能保藏几十年 几百年 由于微生物繁殖快 也可在短时间内产生大量变异的后代 正是由于这个特性 人们才能够按照自己的要求不断改良在生产上应用的微生物 如青霉素生产菌的发酵水平由每毫升20单位上升到近10万单位 利用变异和育种得到如此大幅度的产量提高 微生物的类群和形态结构 微生物按其结构 化学组成及生活习性等分为三大类 原核细胞型 细菌 放线菌 支原体 衣原体 立克次氏体 螺旋体等真核细胞型 真菌非细胞型 病毒噬菌体 微生物的类群和形态结构 杆菌 bacillus 不同杆菌的大小 长短 粗细很不一致 微生物的类群和形态结构 螺形菌 spiralbacterium 微生物的类群和形态结构 1 细菌 细菌是一类细胞细而短 结构简单 细胞壁坚韧 以二等分裂方式繁殖的原核微生物 分布广泛 细菌的繁殖 二分分裂繁殖是细菌最普遍 最主要的繁殖方式 在分裂前先延长菌体 染色体复制为二 然后垂直于长轴分裂 细胞赤道附近的细胞质膜凹陷生长 直至形成横隔膜 同时形成横隔壁 这样便产生两个子细胞 细菌细胞分裂的电镜超薄切片图 杆菌二分裂过程模式图 细菌的菌落 单个或少数细菌细胞生长繁殖后 会形成以母细胞为中心的一堆肉眼可见 有一定形态构造的子细胞集团 这就是菌落 细菌菌落常表现为湿润 粘稠 光滑 较透明 易挑取 质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位颜色一致等 细菌的菌落特征因种而异 可作为鉴定细菌种的依据 粘质沙雷氏菌的菌落特征 沙门氏菌的菌落特征 铜绿假单孢菌的菌落特征 弗氏志贺氏菌的菌落特征 粘质沙雷氏菌的菌落特征 2 霉菌 霉菌是丝状真菌的俗称 意即 发霉的真菌 它们往往能形成分枝繁茂的菌丝体 但又不象蘑菇那样产生大型的子实体 在潮湿温暖的地方 很多物品上长出一些肉眼可见的绒毛状 絮状或蛛网状的菌落 那就是霉菌 霉菌的形态 大小和结构 霉菌的菌丝是构成霉菌营养体的基本单位 菌丝是一种管状的细丝 把它放在显微镜下观察 很像一根透明胶管 它的直径一般为3 10微米 比细菌和放线菌的细胞约粗几倍到几十倍 菌丝可伸长并产生分枝 许多分枝的菌丝相互交织在一起 就叫菌丝体 霉菌的菌丝 霉菌的菌落 由于霉菌的菌丝较粗而长 因而霉菌的菌落较大 有的霉菌的菌丝蔓延 没有局限性 其菌落可扩展到整个培养皿 有的种则有一定的局限性 直径1 2厘米或更小 菌落质地一般比放线菌疏松 外观干燥 不透明 呈现或紧或松的蛛网状 绒毛状或棉絮状 菌落与培养基的连接紧密 不易挑取 菌落正反面的颜色和边缘与中心的颜色常不一致 霉菌的繁殖 有性繁殖和无性繁殖两种以无性繁殖为主 各种曲霉的菌落 酵母菌的形态 大小和结构 酵母菌是单细胞真核微生物 酵母菌细胞的形态通常有球形 卵圆形 腊肠形 椭圆形 柠檬形或藕节形等 比细菌的单细胞个体要大得多 一般为1 5微米 5 30微米 酵母菌无鞭毛 不能游动 酵母菌具有典型的真核细胞结构 有细胞壁 细胞膜 细胞核 细胞质 液泡 线粒体等 有的还具有微体 酵母菌的繁殖 1 芽殖2 裂殖3 孢子生殖 酵母菌的菌落 大多数酵母菌的菌落特征与细菌相似 但比细菌菌落大而厚 菌落表面光滑 湿润 粘稠 容易挑起 菌落质地均匀 正反面和边缘 中央部位的颜色都很均一 菌落多为乳白色 少数为红色 个别为黑色 各种酵母菌的菌落 啤酒酵母的菌落 红酵母的菌落 微生物的营养 水分 水占细胞浆的70 90 是细胞的重要组成成分 较普遍的观点认为 只有在含水的环境中微生物才能存活 但也有人发现在无水碳氢化合物中微生物可长期存活 碳源 碳源是构成细胞的重要物质 有些微生物的碳源必须来自有机碳化合物如糖 蛋白质 脂肪 有机酸等 同时利用其化学能 属异养型 有些微生物不需有机碳化合物 以CO2为碳源 属自养型 分为光能自养型和化能自养型 氮源 氮是组成蛋白质和核酸的重要元素 无机盐类 细菌所需无机盐包括磷 硫 镁 铁 钾 钠 钙 氯 锰 锌 钴 铜等 其中磷 硫 镁 钾 钠 铁需要量较多 其他只需微量 生长因子 生长因子是某些微生物生长发育所必需 而其自身又不能合成的一类营养物质 包括维生素 嘌呤和嘧啶 微生物生长的影响因素 1 营养物2 PH值3 温度4 氧气5 渗透压6 表面张力 其他因素 温度氧气光照水份等 推行GMP目的 防止污染 交叉污染 混药 差错 污染 当一个产品存在有不需要的物质时 它即受到污染 交叉污染 不同原料 辅料及产品之间发生的相互污染 污染的形式 尘粒污染 微生物污染 微生物污染 因微生物产生 附着而给特定的环境带来的不良影响 如果细菌得到了必要的养料 一定量的水份和合适的温度 它们就能迅速繁殖 它们繁殖的速度快得惊人 通常一个细菌在仅仅2小时后可产生出281兆 百万 个的细菌 传播污染的四大媒介 空气 水 表面 人 第二部分GMP与微生物 传播污染的第一帮凶就是空气 空气携带着敌人来污染药品 每立方米的空气中至少含有60万颗尘粒 同时还存在着大量的微生物 在这样的空气条件下进行生产 肯定会污染药品 因此 要杜绝带有大量尘埃微粒和微生物的空气污染药品的办法是对空气采取过滤的措施 把隐藏在空气中的敌人通通过滤掉 使空气质量达到我们的要求 这就是要建立密闭厂房和空气净化系统的原因 对空气处理 只过滤了尘粒 但还有大量微生物存在空气中 所以采取对空气消毒的措施来消灭微生物 例如 臭氧消毒的方式等杀死微生物 但是常使用一种消毒剂会使微生物产生耐药性 因此 在使用消毒剂时 必须定期交替使用 GMP与微生物 传播污染的四大媒介 空气 第二个帮凶是水 从理论上来讲 微生物在纯水中是不能生长的 但是 所有的各类水 不管怎样仔细地蒸溜或过滤 总会含有一定量的可溶性有机物和盐类 正是这些可溶性的物质可被微生物利用作为它们生长的养料源泉 水是我们药品生产不可缺少的要素之一 不只是用于生产中 还用于设施 设备清洗中 当带有大量尘埃粒子和微生物的水用于生产或清洗设施 设备时 就转移到药品上面 污染了药品 因此 我们直接用于药品生产的水必须经过处理 以防止敌人通过水来污染产品 GMP与微生物 传播污染的四大媒介 水 第三个帮凶是表面 包括 天花板 墙壁 地面 设备 容器 工具 桌子 由于空气中的湿度 所有表面都包上一层含水的薄膜 这层薄膜由于静电吸引而饱含尘埃微粒 有很多时候 表面还覆盖一层油状物质 此层油膜易受到尘粒污染 表面因尘埃微粒和微生物由空气传播的回降而受到污染 请记住 一个表面看起来很干净 而实际上已经被千百万个微生物所污染 除非已经做了正确的消毒灭菌 第四个帮凶可能是大家都不会想到的 它就是我们自己 人体是一个永不休止的污染媒介 当你每天来上班时 也许随身将几百万细菌带入工作场地 GMP与微生物 传播污染的四大媒介 表面 人 GMP与微生物 人体中的微生物 人自出生后 外界的微生物就逐渐进入人体 在正常人体皮肤 粘膜及外界相通的各种腔道 如口腔 鼻咽腔 肠道和泌尿道 等部位 存在着对人体无害的微生物群 包括细菌 真菌 螺旋体 支原体等 称为正常菌群 能使宿主致病的为致病菌或病原菌 不能造成宿主感染的为非致病菌或非病原菌 有些细菌在正常情况下并不致病 但当在某些条件改变的特殊情况下可以致病 这类菌称为条件致病菌或机会致病菌 人的头发和皮肤 每分钟从人类皮肤中要散发出约10 000个微生物嘴巴和鼻子 水滴 呼吸 咳嗽和喷嚏将产生出大量水滴 这种水滴既含有尘粒污染也含有微生物污染 咳嗽一次的发菌量为70 700个 min 人 喷嚏一次的发菌量为4000 60000个 min 人 衣着 洁净室内当工作人员穿无菌服 静止时的发菌量为10 300个 min 人 躯体一般活动时的发菌量为150 1000个 min 人 快步行走时的发菌量为900 2500个 min 人 化妆品和珠宝手饰 发胶 气雾除臭剂 眼脸膏 香粉等 为微生物污染提供了极好的源泉 耳环 戒指 项链 手链等首饰 因为它们难于清洗 所以可能成为感染源或污染源 生产过程中的人为差错 当员工没有按照SOP进行工作时 促使污染程度增加 GMP与微生物 人员污染的途径和方式 由于药品的特殊性 卫生管理不善 很容易造成污染 药品污染后 质量会发生变化 这是GMP要防止的核心 因此 卫生管理在药品生产中的重要性是不言而喻的 第三部分卫生管理 生产区环境卫生要求 洁净区的设计必须符合相应的洁净度要求 包括达到 静态 和 动态 的标准 无菌药品生产所需的洁净区可分为以下4个级别 A级 高风险操作区 如灌装区 放置胶塞桶和与无菌制剂直接接触的敞口包装容器的区域及无菌装配或连接操作的区域 应当用单向流操作台 罩 维持该区的环境状态 单向流系统在其工作区域必须均匀送风 风速为0 36 0 54m s 指导值 应当有数据证明单向流的状态并经过验证 在密闭的隔离操作器或手套箱内 可使用较低的风速 B级 指无菌配制和灌装等高风险操作A级洁净区所处的背景区域 C级和D级 指无菌药品生产过程中重要程度较低操作步骤的洁净区 第三部分卫生管理 以上各级别空气悬浮粒子的标准规定如下表 第三部分卫生管理 应当对微生物进行动态监测 评估无菌生产的微生物状况 监测方法有沉降菌法 定量空气浮游菌采样法和表面取样法 如棉签擦拭法和接触碟法 等 动态取样应当避免对洁净区造成不良影响 成品批记录的审核应当包括环境监测的结果 对表面和操作人员的监测 应当在关键操作完成后进行 在正常的生产操作监测外 可在系统验证 清洁或消毒等操作完成后增加微生物监测 第三部分卫生管理 洁净区微生物监测的动态标准如下 第三部分卫生管理 物料卫生管理 符合要求的物料是生产合格产品的前提 因此用于生产的物料必须是符合质量标准的 一方面我们所使用的物料必须经检验合格 最重要的另一方面必须保证物料在使用的过程中不得受到污染 切记 1 进入洁净区的物料必须对其外包装处理 2 流转过程的物料必须密闭 3 盛装物料的容器具必须是经过消毒的 设备卫生管理 除了对设备保养外 更重要的目的是防止交叉污染 因此 每次使用完或使用前都要对设备进行清洁 确保产品符合标准 一清除清除文件 器具和残余物料 二清洁用纯化水进行冲洗 三消毒对需要用消毒液对设备消毒的进行消毒 第三部分卫生管理 生产现场卫生管理 案例 我们所用的物料微生物指标均符合要求 可生产出来的成品的微生物指标检测却不符合要求 这就是未做好生产现场卫生管理的直接体现 1 生产前注意上批清场是否在有效期内 超过有效期应重新清场且符合要求 2 生产过程中随时保持现场的卫生工作 不得出现脏 乱 差的场面 物料 设备应符合上述要求 人员卫生管理 要养成良好的卫生习惯 做到勤洗澡 勤洗手 勤刮胡子 勤剪指甲 勤换衣 切记 手是我们工作时使用的最重要的工具之一 只要触摸到污染的东西 微生物就会留在你手上或指甲里 因此手是最大的细菌传播工具和途径 在药品生产时必须保持手的清洁 第三部分卫生管理 在净化室工作 必须遵守洁净室内每一个细节的工作规范不允许将任何有害的物质带入洁净室 避免污染带给产品可能的严重损害 人员的清洁和卫生是很重要的 进入洁净室必须卸妆 工作服帽子大小要合适 必须遮盖所有头发 以防止皮肤碎片及头发屑污染 不得将手表及首饰带入洁净室 戴口罩是控制来自口腔污染的有效方法之一 洁净工作服不得接触地面 穿洁净鞋或鞋套时 脚不得接触地面 进入洁净室要正确着装 第三部分卫生管理 正确的更衣要求 1 接触物品前应对手 手套 消毒2 工作时 不要触摸口罩3 揉鼻子尽量少 并更换手套和口罩4 操作时 不是必须坐着的工作 尽量站着5 不要在层流下面的工作台上休息6 休息时 站着 手臂顺着身体下垂 不要把两臂交叉 也不要放在臀部7 休息时 坐着 双手放在膝盖上 不要交叉双手或双脚8 工作中必要时才讲话 第三部分卫生管理 在洁净区内工作的要求 洁净室清场顺序及注意事项 天花板 墙壁 与墙壁连接的物体 管道 台面 设备 地面 先上后下 先里后外 先清洗 再清洁 后消毒 不要在清洁过的地面上走动 洁净室的清洁方法 1 真空吸尘 仅对大粒子有效2 干擦 干擦可能脱落粒子 通常仅用于擦干潮湿表面3 湿擦 这是大多数的除污及清洁的方法 消毒 用于消灭多种微生物 使其数量减少到可接受的水平 常用 甲醛 臭氧 乙醇 新洁尔灭 灭菌 杀灭所有微生物 121 30min 115 30min 第三部分卫生管理 消毒与灭菌 消毒与灭菌是微生物实验技术中最基本的操作 从事药品生产和检验的人员都应当了解消毒与灭菌的方法及其意义 严格遵守操作规程 否则会影响产品质量 危害患者安全 对生产的企业关键 Disinfection 消毒与灭菌 杀死物体上病原微生物的方法 并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物 杀灭物体上所有微生物的方法 不存在活菌的意思 防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法 消毒 灭菌 无菌 防腐 Asepsis Sterilization Antisepsis 常用消毒剂 70 75 乙醇水溶液 0 5 洗必泰溶于70 乙醇 再加入2 甘油 用于皮肤 器具等消毒 异丙醇75 水溶液 用于皮肤 器具等消毒 甲醛37 40 甲醛液8 9ml 再加入4 5g高锰酸钾 每m3熏蒸量 密闭12 24h 刺激性强 戊二醛2 水溶液 用于空气 器具等消毒 广谱 高效 低毒 可杀芽孢和病毒 毒性较轻 新洁尔灭 苯扎溴铵 0 1 水溶液 用于皮肤 粘膜 器具等消毒 有清洁和消毒双重功效 抗菌谱