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激光扫描共聚焦显维镜定量分析的优势和注意事项激光扫描共聚焦显微镜与图像半定量分析相比，具有以下优点：1更精细、精确度更高。激光扫描共聚焦显微镜对免疫荧光组织化学染色样品做定量分析时，利用激光聚焦和系统软件分析对组织进行深层扫描，不破坏组织细胞结构，可深层次准确定位并精确定量。而一般图像分析只是以荧光灰度的差别变化进行半定量分析。2激光扫描共聚焦显微镜一般有两个以上不同波长的激光管，只要将标本标记上不同波长的荧光，就可以在同一张切片上同时分析两种或更多不同指标的变化，并比较它们之间的比值变化，精确而又方便，这一特点是一般图像分析无法比拟的。3激光扫描共聚焦显微镜可根据需要提供纯荧光、白光以及荧光与白光合成图像等多种图像，远远优于一般图像分析。4以往免疫荧光染色多要求冰冻新鲜组织标本，用石蜡切片在普通荧光显微镜下观察，常因背景非特异性荧光过强影响观察结果。而石蜡标本来源广泛，适用于回顾性研究。激光扫描共聚焦显微镜可扫描石蜡切片的荧光染色，可避免因背景非特异性荧光过强而影响观察结果，从而可获得清晰图像，这也是激光扫描共聚焦显微镜的优势所在。激光扫描共聚焦显维镜定量分析的注意事项一、制备高特异性和高效价的荧光抗体 标本只有在用荧光探针标记的前提下才能进行共聚焦显微镜检测制备高特异性和高效价的荧光抗体是检测的关键。这就要求选用高质量的荧光素和高特异性与高效价的免疫血清。同时还要对荧光抗体进行质量鉴定，主要是进行特异性和敏感性鉴定。二、标本制作要求1标本厚度 组织切片或其他标本不能太厚，否则激发光多数消耗在标本下部，而物镜观察的上部不能被充分激发。2载玻片 载玻片要光洁，无自发荧光；载玻片厚度应在0812mm 之间，太厚会吸收较多的光，不能使激发光在标本上聚焦。3封固剂 甘油必须无色透明，无自发荧光。由于荧光在 pH 8595时较亮，不易很快退去，常用甘油加入05mollpH 9095的碳酸盐缓冲液的等量混合液封片。三、定量研究的要求1随机性(1)在感兴趣区域内随机抽样，不能主观地选择一些便于定量的“理想切片” ，这种“理想切片”不能代表所要研究的整体区域。(2)在随机抽取的切片上，应随机抽取观察视野。(3)在随机抽取的视野中，通过连续观察“光学切片”，得到感兴趣结构的三维定量信息。如果不能连续观察“光学切片” ，需要在 Z 轴方向随机抽样，然后作定量研究。2避免参照陷阱 如果获得的资料是密度信息，当比较各组参照空间(
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