lecture5-二维谱COSY.ppt

二维核磁 超复杂的一维核磁的解读 二维核磁 1HNMRSpectrumofUbiquitin 二维核磁原理 Fatherof2DNMR Jeener BelgiumMainDevelopers RRErnst Switzerland RFreeman UK Oxford 常见二维核磁的功能 常见二维核磁的功能 二维核磁原理 2DNMRisadomainofFTandpulsedspectroscopy 1D 1D 2D 2Ddetectsignalstwice before aftercoupling Sameas1Dexperiment 90 pulse Transfersbetweencoupledspins 准备期 preparation 主要任务使核处于热平衡状态或者在一次采样之后使自旋恢复到平衡状态 演化期 evolution 准备期建立起来的平衡态破坏之后核自旋在旋转坐标XY平面发生进动 进动的过程一般称为演化 t1是变化的 混合期 mixing 在演化期完成之后 可以选择测定已演化的磁化矢量 混合期有可能不存在 它不是必不可少的 检测期 acquisition t2 在检测期内以通常方式检出FID信息 与t2轴对应的 2是通常的频率轴 与t1轴对应的 1是什么 则决定于在演化期是何种过程 二维核磁原理 二维核磁原理 evolution t1 evolution t1 evolution t1 The basic 2Dspectrumwouldinvolverepeatingamultiplepulse1Dsequencewithasystematicvariationofthedelaytimet1 andthenplottingeverythingstacked 二维核磁原理 二维核磁原理 横轴代表 2轴 纵轴代表其它频率 1轴 分为三大类 J分辨谱亦称为J谱 把化学位移和自旋偶合的作用分辨开来 2 化学位移相关谱 Chemicalshiftcorrelationspectroscopy 是2DNMR的核心 它表明共振信号的相关性 有三种位移相关谱 同核 异核 NOE和化学交换等相关谱 3 多量子谱 multiplequantumspectroscopy m 1的整数 用脉冲序列可检出多量子跃迁 得到多量子跃迁的二维谱 二维核磁原理 CorrelationSpectroscopy COSY ThefirstpulsecreatestransversemagnetizationcomponentswhichevolvechemicalshiftandhomonuclearJ couplingduringtheevolutionperiodt1 Thesecondpulsemixesthemagnetizationcomponentsamongallthetransitionsthatbelongtothesamecoupledspinsystems CorrelationSpectroscopy COSY Whatdowewant 目标 揭示自旋 自旋耦合 AX自旋耦合体系 CorrelationSpectroscopy COSY 揭示自旋 自旋耦合 CorrelationSpectroscopy COSY HowItworks CorrelationSpectroscopy COSY A t1 Ao cos wo t1 X分量的强度 wo t1 f2 t2 频率f2来自于对t2的傅立叶变换多个不同的t1形成一个类似FID的规律频率f1来自于对t1的傅立叶变换 t1 A t1 CorrelationSpectroscopy COSY Seeit t2 t1 time time f2 t1 time frequency frequency frequency f2 f1 由一个频率轴 化学位移 确定的一维图谱已经转换成了二维图谱 其中两个频率轴 1和 2均与化学位移相对应 不同质子在它们各自的进动频率处 出现信号峰 不难想象 在频率域中二维图谱的信号峰出现在正方形的对角线 上 化学位移较大的信号分布在二维图谱对角线的左下方 化学位移较小的信号分布在右上方 信号大小的任何调控 比如来源于自旋核之间的偶合相互作用 以 交叉峰 的形式出现在对角线的两侧 CorrelationSpectroscopy COSY Seeit CorrelationSpectroscopy COSY ContourPlot contourplot cross peak 谱图特征是对角线上的峰对应一维1H谱 对角线外的交叉峰在F1和F2域的 值对应相偶合核的化学位移 提供通过三键偶合的1H H相关信息 每个交叉峰做平行于F1和F2轴的纵线和水平线 得到两个相互偶合核的化学位移 通过交叉峰可以建立各相互偶合1H的关联 CorrelationSpectroscopy COSY off diagonalpeaks 非对角线峰表明两种质子之间存在耦合 CorrelationSpectroscopy COSY off diagonalpeaks CorrelationSpectroscopy COSY off diagonalpeaks 21b 5b 6a 6b Phase SensitiveSpectra 相敏COSY谱由于在数据处理中消除了通常与回波和反回波相关的不需要的相扭曲线形和色散成分信号 只给出吸收型信号 在提高灵敏度的同时 不但能够明显有效地改善信号密集重叠区交叉峰的分辨率 而且提供了测定重叠区内各信号化学位移和偶合常数的方法 Phase SensitiveCOSY Phase SensitiveCOSY Thethirdpulseconvertspartofthemultiple quantumcoherenceintoobservablesingle quantumcoherence whichisdetectedduringtheacquisitionperiod DoubleQuantumFilteredCOSY DQF COSY 外观与1H 1HCOSY谱基本相同 但有优点如下 1 抑制了溶剂峰的强峰 交叉峰和对角线峰均为吸收峰型 峰型有了极大的改善 3 分辨率更高 CorrelationSpectroscopy COSY CorrelationSpectroscopy COSY Relay COSY AMX ANucleiiscoupledonlytoMandXnucleiiscoupledonlytoMJAX 0AnucleiwillexchangemagnetizationonlywithM XnucleiwillexchangemagnetizationonlywithM crosspeakbetweenAandX mediatedbytheMnuclei Relay COSY 除能够提供常规COSY谱的偕位和邻位质子偶合相关交叉峰信号外 还能给出间位或四键质子间的交叉峰信号 与常规COSY谱联合比较分析可以得到更多的结构信息 TotalCorrelationSpectroscopy TOCSY Homonuclearprotoncorrelationwithinthesamespinsystem 理论上可给出被杂原子或季碳隔离的结构片段上每个质子与其它所有质子间的交叉峰信号 能够有效的确定连续质子化的结构片段 因此主要用于肽类和寡糖结构单元的分析鉴定 TotalCorrelationSpectroscopy TOCSY TotalCorrelationSpectroscopy TOCSY COSYofOtherNucleis 在二维化学位移相关图谱中 有时一些预期的交叉峰可能不出现或信号强度很低 一般情况下 信号强度的准确判断比较困难 但是对以下两个因素必须特别注意 第一 如果一个自旋核 质子 与其它多个自旋核同时偶合 在一维图谱中 该自旋核的每个信号峰强度通常较低 在二维化学位移相关实验中 由于混合脉冲使自旋核的磁化矢量在与其偶合的其它自旋核的过度能态中重新分布 致使与具有复杂结构的多重峰相关的交叉峰信号强度显著降低 因此 这种自旋体系中虽然存在大的偶合 但不一定能够得到强的交叉峰信号 但是在实验中可以通过选择缩短数据采集时间 突出大偶合交叉峰信号强度 如果知道准确的偶合常数 也可以通过特殊的滤波技术 得到丢失的交叉峰信号 第二 如果与1 JAX比较 横向迟豫时间非常短 使磁化转移无法形成 从而降低交叉峰信号强度 化学位移相关图谱中交叉峰信号的强度 由于在二维化学位移相关实验中 只需要观察自旋体系中自旋核之间的偶合关系 从而建立它们之间的连接关系 通常并不需要对每个信号的细微结果进行分析 尽管高分辨的二维化学位移实验能够给出偶合的多重峰的精细结构 但是需要很长的实验时间 同时得到的精细信息可以通过简单的一维实验得到 因此在二维化学位移相关实验中 并不需要很高的分辨率 在二维化学位移相关实验中 最常见的一种不必要的实验时间浪费是在全谱范围进行化学位移相关测定 因为在很多情况下 图谱的较低磁场区域的信号较少或无信号 比如甾体和三萜化合物 大多数质子偶合出现在0 5ppm之间 如果在0 10ppm范围进行二维化学位移相关实验测定 将有