脉冲场凝胶电泳的原理.ppt_第1页
脉冲场凝胶电泳的原理.ppt_第2页
脉冲场凝胶电泳的原理.ppt_第3页
脉冲场凝胶电泳的原理.ppt_第4页
脉冲场凝胶电泳的原理.ppt_第5页
已阅读5页，还剩6页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

脉冲场凝胶电泳的原理及相关注意事项 通常的琼脂糖凝胶电泳利用双链DNA分子在电场作用下 在凝胶中的迁移率不同而达到分离的目的 当双链DNA分子超过一定的大小以后 DNA双螺旋的半径超过了凝胶的孔径 在琼脂糖中的电泳速度会达到极限 此时凝胶不能按照分子大小来筛分DNA 普通凝胶电泳 脉冲场凝胶电泳 PulsedFieldGelElectrophoresis PFGE 用于分离大分子量DNA片段的一种电泳方法 PFGE是通过脉冲电场方向 时间与电流大小交替改变完成分离大分子DNA 影响PFGE的因素 琼脂糖凝胶浓度浓度越高 移动速度越慢 适合分离低分子量DNA浓度越低 移动速度越快 适合分离高分子量DNA1 的琼脂糖浓度最大可以分离3Mb的DNA片段1 2 1 5 的琼脂糖浓度可以使片段更加紧密0 5 0 9 的琼脂糖浓度可以分离片段更大的DNA片段 不过条带很弥散 缓冲液和温度温度越高 DNA移动速度越快 但是条带的清晰度和分辨力明显下降 温度过高会导致DNA带变形或解链 最佳电泳温度是14 最常用的电泳液是0 5x的TBEbuffer 有时也可以用1 0 x的TAEbuffer代替 脉冲时间当电场方向发生改变 大分子的DNA便滞留在胶孔中 直至沿新的电场重新定向后 才能继续向前移动 大分子DNA重新定向需要的时间长当DNA分子变换方向的时间小于脉冲周期时 DNA就可以按其分子量大小分开 电压最常用的电压是6V cm 低电压时 迁移率与电压成正比 想分离大分子DNA时一般选用低电压和延长脉冲时间脉冲角度随着角度的减小 较大的片段分离的更好 较小的片段分离的效果降低 蠕动泵的流速 电泳过程中 控制好蠕动泵的流速 一般控制在50 70左右 以免速度太快 使胶在溶液中移动 冷却泵的开启 冷却泵开启时 一定要把蠕动泵打开 以避免冷却泵管道内的溶液因为过度制冷 凝结成冰块而堵塞管道 电泳结束后 应及时取出凝胶 进行染色等操作 以避免因为时间太长 而造成条带的弥散 注意事项 凝胶在缓冲液中漂浮 蠕动泵的速度太快或太慢 请调到合适的速度 缓冲液不流动或流速慢 检查冷却泵 当冷却泵制冷时 如果蠕动泵没有开 会造成管道内结冰 导致管道堵塞 电泳条带扭曲 因为流速太低 导致制冷不充分 或不均一 缓冲液体积必须大于2 2L 可能遇到的问题以及解决方法 条带变粗 减少上样量条带拖尾或模糊 电场转换时间不适合 优化电场转换时间 上样量太高 调整样品浓度大片段DNA不能有效分
人人文库> 全部分类> 教育资料 > 课件下载

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论