《microRNA定量检测》PPT课件.ppt

March23 2020 MicroRNA定量检测 技术讲座 南宁科迪生物技术有限公司 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 2 主要内容 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 3 MicroRNA基础知识介绍 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 4 MicroRNA的发现 Lin 14 Lin 4 1 C elegansLeeRC FeinbaumRL AmbrosV TheC elegansheterochronicgenelin 4encodessmallRNAswithantisensecomplementaritytolin 14 Cell 1993 75 843 854 2 C elegans let 7ReinhartBJ SlackFJ BassonM etal The21 nucleotidelet 7RNAregulatesdevelopmentaltiminginCaenorhabditiselegans Nature 2000 403 901 906 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 5 MicroRNA的特征 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 6 MicroRNA的特征 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 7 MicroRNA的功能 发育 Timing Leeetal 1993 Cellproliferation Brenneckeetal 2003 Stemcell2004 糖尿病 Poyetal 2004 胆固醇的生物合成 Krutzfeldtetal 2005 DNA甲基化与染色质修饰 Baoetal 2004 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 8 MicroRNA的作用原理 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 9 MicroRNA的作用原理 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 10 microRNA研究解决方案 发现新MiRNA 发现新的microRNA March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 11 microRNA研究解决方案 MiRNA的检测 目前有很多与癌症临床诊断相关的研究在进行中 定量PCR的方法由于其灵敏度高 需要样品量少 而被广泛应用 MicroRNA的检测方法 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 12 microRNA研究解决方案 MiRNA的检测 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 13 MicroRNA数据库及其应用 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 14 microRNA靶标数据库 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 15 MicroRNA查询数据库 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 16 MicroRNA靶标预测 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 17 MicroRNA靶标预测 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 18 MicroRNA靶标预测 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 19 MicroRNA靶标预测 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 20 MicroRNA查询方法 查找序列 已知MiRNA基因名称查询序列 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 21 MicroRNA查询方法 查找序列 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 22 MicroRNA查询方法 查找序列 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 23 主要内容 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 24 MiRNA研究解决方案 MiRNA的定量检测 microRNA的定量检测 TaKaRa方案 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 25 加A尾与反转录一步完成 microRNA polyApolymerase加A尾 microRNA microRNA AAAA OligodTPriming AAAA NVTTTT XXXX RTase microRNA AAAA TTTT XXXX F R 10pg 5ug总RNA March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 26 加A尾与反转录一步完成 稀释至100ul 取2ul做qPCR 可以检测任何基因 含Primer March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 27 RealtimePCR原理 染料法 SYBRGreenI 是一种能结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料 SYBRGreenI March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 28 SYBRGreenI法作用机理示意图 F March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 29 RealTimePCR反应 已经含有 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 30 结果举例 灵敏度验证 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 31 结果举例 microRNA定量检测多种用途 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 32 结果举例 microRNA定量检测多种用途 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 33 TaKaRamicroRNA定量引物库 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 34 常见问题 引物设计要求 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 35 常见问题 引物设计原则 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 36 常见问题 模板要求 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 37 常见问题 扩增不好可能的原因 常见问题 引用文献举例 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 38 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 39 主要内容 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 40 MiRNA研究解决方案 MiRNA功能验证 MicroRNA表达载体 克隆表达感兴趣的MiRNA 然后进行筛选等研究工作 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 41 MiRNA研究解决方案 MiRNA功能验证 MicroRNA表达载体 克隆表达感兴趣的MiRNA 然后进行筛选等研究工作 41 March23 2020 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 42 MiRNA研究解决方案 MiRNA功能验证 MiRNA的诱导表达 March23 2020 南宁科迪技术讲座之MicroRNA 43 联系我们 南宁科迪生物技术有限公司地址 南宁市大学东路98号世贸西城F座1605室电话 0771 3832292真 0771 3832292E mail