无菌产品的生产和质量控制

无菌产品生产、质量控制,广州*生物科技有限公司2017年7月,主要内容,无菌产品的高风险分析厂房设计、洁净度级别和环境控制设备生产工艺配制过滤无菌灌装灭菌工艺无菌检查物料质量控制人员监控无菌服消毒剂清洁消毒用具,无菌产品的高风险分析,一般质量要求,无菌成品中不得含有任何活的微生物无热原特别是供静脉及脊椎注射的制剂澄明度不得有肉眼可见的浑浊或异物安全性不能引起对组织的刺激性或发生毒性反应，特别是一些非水溶剂及一些附加剂，必须经过必要的动物实验，以确保安全,（参照注射剂进行如下分析、讲解）,一般质量要求,渗透压与血浆的渗透压相等或接近pH要求与血液相等或接近（血液pH7.4）必要的物理和化学稳定性，以确保产品在储存期内安全有效降压物质有些注射液，如复方氨基酸注射液，其降压物质必须符合规定，确保安全,无菌生产的风险分析,主要影响因素厂房设备工艺过程物料质量控制人员 无菌服消毒剂器具,无菌生产的管理要点,防止微生物污染防止热原或细菌内毒素的污染防止产品中有异物,厂房设计、洁净度级别和环境监控,厂房常见缺陷,采用无菌工艺制造的洁净区内，无菌的操作区与有菌的操作区未完全分开冻干灌装区所用工器具灭菌后，经事实上的非无菌区进入无菌区，带来微生物污染风险无菌区设水池及洁具间，或设地漏无菌区设单独的废物区洁净区压差监控不到位采用最终灭菌工艺生产的灌装间倒压差厂房有重大变更，不做确认和验证,无菌操作区布局示例图一,无菌操作区布局示例图二,洁净环境监控,来源：YY_0033-2000_无菌医疗器具生产管理规范,关键操作区气流方向示例一,M,M,灭菌,直接包材,接触部,100级,10000级,关键操作区气流方向示例二,关键点,操作者不能进入Grade”A”区域。,厂房管理要点,厂房布局和建造厂房布局的合理性（例人员进出分开，尽可能涉及观察窗监控设施，称量区域防尘要求、特殊药品布局要求以及排风尾气的处理措施等） 厂房密封性（特别是与灭菌设备相连处）及SOP规定 厂房表面的完好性（包括门） 人物进出口的管理（物料气闸、传递窗等互锁延时装置、门禁） 温湿度适合产品生产 地漏的设置和清洁消毒 洁净厂房材质要求（熏蒸消毒的影响） 洁净室灯具安装要求,厂房管理要点,洁净度级别的标准关键操作区的流型测试（干冰、发烟笔，录像）洁净区的压差（绝对压差的控制、压差梯度的控制、压差报警）洁净区的清洁和消毒（消毒效果确认、周期、消毒方式等）环境监控动态的粒子数和微生物数（在线监测装置的应用，检测时间、采样量、频率、采样位置等）HVAC系统的维护和监控,生产设备,生产设备的常见缺陷,储存除菌过滤后药液的高位槽呼吸口未安装呼吸器与产品直接接触的压缩空气、惰性气体未确认是否符合生产要求 灭菌和冻干设备管理不到位温度探头或控制仪未校准温度探头损坏维修不及时（干热、湿热）灭菌设备无自动记录装置（干热、湿热）灭菌设备的自动记录未归档未使用联动生产线，采用单机灌封,灭菌设备自动记录曲线图示例,生产设备管理要点,适用于产品的生产、清洁、消毒或灭菌尽可能采用密闭系统合理布置和安装关键参数控制和记录仪表的校准设备的确认、维护和维修设备的清洁、消毒或灭菌共用设备应有防止交叉污染的措施设备应在确认的范围内使用,除菌过滤系统管理要点,滤芯供应商选择滤芯材质选择（与注册资料一致）滤芯相容性试验（包括吸附试验）滤芯微生物挑战试验滤芯完整性检测滤器系统的在线或离线清洗灭菌、 安装（防止二次污染） 过滤器安防的位置要求滤芯使用次数的确认（最后一级建议一次使用，除非经过验证）滤芯的保存方式滤芯的更换记录（QA确认）,生产用隔离器示例一,生产用隔离器示例二,生产用隔离器示例三,工艺用水系统常见问题,注射用水和纯化水标准不符合药典标准工艺用水未做微生物限度的检测注射用水和纯化水的微生物限度检查未采用薄膜过滤法注射用水循环系统温度检测点安装位置不合理，不能反映系统保持80以上循环未监测注射用水关键使用点的细菌内毒素,工艺用水系统管理要点,水处理设施及其分配系统的设计、安装和维护应能确保供水达到适当的质量标准。水系统的运行不应超越其设计能力。注射用水的生产、贮存和分配方式应能防止微生物生长，例如，在80以上保持循环水源、水处理设施及水的化学和生物学污染状况应定期监测，必要时还应监测细菌内毒素。监测结果以及所采取纠偏措施的记录应予归档,无菌生产工艺,无菌生产关键工序,配制过滤无菌灌装/灭菌,无菌生产管理要点,生产加工的每个阶段（包括灭菌前的各阶段）都必须采取预防措施，以尽可能降低污染,配制工序,常见问题提高称量配制区域的洁净度级别，使其与灌装区域一致，共用同一洁净区的更衣设施、走廊和HVAC系统称量操作位置的正上方安装高效空气层流不注意物料称量的先后顺序整包装的物料不称量即投料不按照规定的处方配制称量记录不完整操作区域受到活性炭污染,配制区域的洁净度级别,应单独设置，注意称量区的空气流向，防止粉尘扩散应根据产品的特性设定相应的洁净度级别GMP附录无菌医疗器械规定：2.2.7 对于有要求或采用无菌操作技术加工的无菌医疗器械（包括医用材料），应当在10,000级下的局部100级洁净室（区）内进行生产。2.2.8 洁净工作服清洗干燥间、洁具间、专用工位器具的末道清洁处理与消毒的区域的空气洁净度级别可低于生产区一个级别，但不得低于300,000级。无菌工作服的整理、灭菌后的贮存应当在10,000级洁净室（区）内。,称量工序,必须按照注册批准的处方配料称量中应特别注意防止交叉污染一次称量一种物料通常先称量辅料，后称量原料药活性炭应在单独区域中称量，称量后放在水溶液中衡器使用前应检查校准称量记录最好采用客观的记录如实记录衡器的读数复核,配制、称量工序管理要点,操作区的设置和洁净度级别配料处方称量操作称量记录防止污染和交叉污染的措施,过滤工序常见问题,过滤器的安装位置远离灌装点采用无菌制造工艺时，除菌过滤的有菌操作区与无菌操作区未分隔未记录所用过滤器的型号、来源、批号不做过滤器的完整性试验过滤器完整性试验的合格标准设定不正确过滤后的溶液存放在开口的容器中,除菌滤器管理要点,除菌过滤用过滤器通常使用2只串联方式，确保过滤的可靠性可能情况下，应在紧挨灌装点的位置，用除菌过滤器将所有药液，特别是大容量注射剂进行除菌过滤采用无菌制造工艺时，除菌过滤操作区域不得设在无菌操作区内，可通过管道传送滤液,过滤器完整性试验,过滤器的相关信息应具有可追溯性完整性试验的合格标准应参照供应商的说明书设定应在过滤前、过滤后分别测试测试方法起泡点试验前进流试验微生物挑战性试验由供应商做，以避免污染产品,起泡点试验示意图,亲水滤器起泡点试验水剂产品以产品或水湿润滤膜 0.2 参考压力 0.31 MPa 0.45 参考压力 0.23 MPa详见供货商说明书,疏水性滤器起泡点60(v/v)异丙醇水溶液60-70(v/v) 乙醇水溶液,前进流试验示意图,前进流试验在 80 起泡点压力下进行详见供货商说明书,过滤工序管理要点,过滤器的安装位置过滤器的相关信息过滤器完整性试验的方法过滤前后的完整性试验和记录过滤器的更换、消毒或灭菌发现过滤器出问题后的处理,无菌灌装工序常见问题,关键操作区空气流向为乱流，而不是层流关键操作区不便于在洁净区外进行监控人员的无菌操作不规范不做或未定期做培养基模拟灌装验证培养模拟灌装验证的合格标准设定不正确培养基模拟灌装未模拟最差生产条件未对培养基模拟灌装阳性样品进行调查培养模拟灌装验证数据作假,培养基模拟灌装验证,目的确定实际生产中（如开机前的调试、加入无菌原辅材料、无菌连接、灌装和密封）产品污染的概率基本思路应综合考虑生产线可能造成污染的各种因素，并能对工艺受控的状态做出准确的评估应尽可能模拟实际生产的无菌操作，可能时，应包括最差条件的相关活动，以挑战无菌操作,无菌灌装工序管理要点,关键操作区和生产设备清洁、消毒或灭菌无菌灌装用各类物料、器具的准备或灭菌处理生产用气体人员的无菌操作装量控制培养基模拟灌装验证无菌检验样品的取样检查时应不能影响正常的生产,灭菌工艺的选择,湿热灭菌法干热灭菌法除菌过滤法环氧乙烷灭菌法辐射灭菌法,无菌药品常用灭菌工艺的比较,影响湿热灭菌效果的因素,待灭菌产品中含有微生物的种类和数量待灭菌产品的包装形式待灭菌产品的装载方式和装载数量湿热灭菌工艺条件湿热灭菌设备,无菌保证水平SAL,无菌保证水平（Sterility Assurance Level）表示物品被灭菌后的无菌状态按国际标准，湿热灭菌法的无菌保证值不得低于10-6，即灭菌后微生物存活的概率不得大于百万分之一。,灭菌工艺验证的必要性,灭菌产品的无菌保证不能依赖于最终产品的无菌检验，而是取决于生产过程中采用合格的灭菌工艺、严格的GMP管理和良好的无菌保证体系灭菌工艺的验证是无菌保证的必要条件灭菌工艺经过验证后，方可正式用于生产,灭菌工艺验证常见问题,无包装规格无装载方式未对每一种产品每一种包装规格的每一种装载方式进行验证无温度探头校准记录验证的灭菌工艺与实际工艺不一致未验证最差灭菌条件设定的验证合格标准达不到无菌保证水平（SAL）10-6生物指示剂使用不规范,灭菌工艺管理要点,生产环境和待灭菌产品中含有微生物的种类和数量研究和监控待灭菌产品的包装形式、装载方式和装载数量灭菌工艺条件灭菌设备关键控制参数的控制和记录仪表的校准设备维护和维修灭菌的记录灭菌工艺的验证选用的生物指示剂热分布试验，找出最冷点位置无菌检验样品的取样,设备清洗、验证管理要点,清洗验证（清洗的程度根据是否有同品种连续的批次进 行生产或是生产不同的产品,确定最难清洗物、取样点、取样方式、接受残留标准、检测方法) 清洗SOP要详细描述（离线或在线、压力控制、时间） 如果可能，单独使用热水进行清洗（例口服制剂） 最终尽可能使用纯化水或注射用水进行漂洗 清洗效果的评估（产品残留、清洁或消毒剂残留、微生物和内毒素残留）,无菌检查,无菌检查常见问题,未对无菌检验方法进行验证未测试培养基的灵敏度未对每柜灭菌产品进行取样并进行无菌检验未考虑产品本身的抑菌作用无菌种分离鉴别的条件出现阳性结果时的调查不完整,无菌检查的局限性,无菌的定义理论上：无菌没有任何活的微生物实际上：我们无法证明产品中没有活微生物存在无法对整批产品进行100%检验无菌检验的结果只是一个基于“可能性”的判断无菌检验用培养基有其局限性只进行细菌和真菌的检验对实验结果的判定是基于“是否在培养基中生长”培养条件（如温度和时间）是有限的我们的工作环境及操作是在相对无菌的状态,美国非肠道药物学会注射剂无菌测试结果,试验目的：不合格的可能性(%)试验批量：60,000支试验方法：按美国药典无菌测试方法,上述无菌测试结果的启示,含有少量微生物污染产品的批次也有可能“通过”无菌检验一批产品的染菌率越低，根据无菌检验的结果来判定整批产品的无菌，其风险就越大,如何用无菌检验来证明整批产品无菌？,要求有一个取样计划来涵盖整个批号有足够的取样量和检验量选择适用的培养基采用经验证的无菌检验方法良好的环境监控,无菌检验的取样计划,何时取? 如何取?何处取？无菌灌装产品批开始、结束及重大故障和调整后最多24小时为一批 USP 每天灌装的产品应分别做无菌检验最终灭菌产品从灭菌柜中最冷点取样对经不同灭菌柜灭菌的产品应分别进行无菌检验,无菌检验的取样计划,取多少样品（检验数量）？取决于产品的批量 CP2015年版大于500：取2%或20支（取少），用于每个培养基检验小于等于100：取10%或4个（取多），用于每个培养基检验取决于产品的数量CP2015年版剂量小于1毫升，就要取40支同时要考虑检验耗损和复试的需要,无菌检验的取样计划,每个样品测试多少数量（检验量）？药典上规定了每次检验的供试品总量装量小于 1mlCP2015年版 每支样接入每个培养基为全量装量大于等于 1mlPh.Eur 半量，但不超过 20ml CP2015年版 半量， 2 - 500ml,无菌检验用培养基,培养基的种类用于真菌培养的TSB培养基，培养温度20-25用于厌氧和需氧细菌培养的硫乙醇酸盐流体培养基，培养温度30-35培养基的适用性检查要有足够的灵敏度能够支持代表性菌种的生长培养基的储存和控制储存条件和有效期,无菌检验方法,主要有两种方法直接接种法薄膜过滤法注意事项采用直接接种法时应考虑产品是否有抑菌性,无菌检验的环境控制,应在无菌环境下进行洁净度（尘粒和微生物）应与无菌生产厂房一致控制要求与生产区域一致，如：空调、更衣、清洁、缓冲、定期验证应有环境监控程序并根据实际情况设定纠偏限度,无菌检查隔离器,样品表面的消毒处理,在样品进入无菌区前应进行消毒处理在进行样品外表面消毒时，应确保样品的完整性 考虑所用消毒液渗透过样品容器的可能性，如：透过塑料容器消毒液应无菌,阳性检验结果的调查和处理,无菌检验所用的设备及环境的微生物监控结果不符合无菌检查法要求回顾无菌检验过程，发现有可能引起微生物污染的因素阴性对照有菌生长供试品中生长的微生物经鉴定后，确证是因无菌试验中所用的物品和（或）无菌操作技术不当引起要有调查程序和记录,无菌检查管理要点,取样计划取样量和检验量培养基和菌种管理无菌检验方法环境监控样品表面消毒处理阳性检验结果的调查和处理,物料质量控制,“齐二药”事件,事件回顾2006年4月齐齐哈尔第二制药有限公司亮菌甲素注射液将工业用二甘醇（乙二醇）作为药用丙二醇投入注射剂的生产造成11人严重肾衰竭，4人死亡,“齐二药”事件,事件发生的原因企业改制，有实际工作经验的员工严重流失检验人员未经培训，鉴别试验出错物料供应商审计流于形式、疏于管理假丙二醇是由江苏省中国地质矿业公司泰兴化工总厂生产 事件的教训不合格的物料会威胁到用户或病人的安全（严重伤害、严重疾病或死亡）,物料质量控制常见问题,未根据产品特性、用途、工艺设定质量标准物料质量标准缺少鉴别和安全性指标砷盐、重金属、细菌内毒素重成品检验，轻物料检验未经取样的物料贴有取样证取样方法不规范含量等检验未做平行试验供应商审计流于形式，随意变更供应商无经质量部门批准的合格供应商清单,物料质量控制,应根据产品的特性、用途和工艺设定物料的质量标准用于无菌药品的物料应特别考虑安全性的指标任何物料的质量标准中一定要有鉴别WHO的GMP中要求对每一包装的物料进行鉴别试验物料的质量标准和（或）来源应符合注册批准的要求物料的取样应有代表性物料的检验应严谨、规范,物料供应商管理,对供应商进行识别、评估、验证、确认和管理是供应链管理中最关键的任务是最基本的质量工作之一应重点管理物料的生产商,物料供应商管理,批准供应商清单,业绩评估,供应商批准流程,供应商选择,供应商嘉奖,供应商需求,供应商分类,成品,服务,物料,确定风险等级,确定批准条件,发给供应商问询表和供应商质量要求,现场审核（如有要求）,评估是否批准,否决,批准,加入批准供应商清单,文件存档,确定批准分级,供应商批准流程示例,供应商变更,物料供应商应保持相对稳定改变原料药的生产商应补充申报，经药监部门批准不同物料的生产商可能采用不同的生产工艺，导致物料的质量标准不完全相同应评估对产品质量的影响至少检验三批样品必要时，还应进行小试和产品稳定性考察应按供应商批准的流程执行及时变更合格供应商清单,车间物料管理,进入洁净区物料的控制：消毒或灭菌洁净区物料：数量的控制、物料的转移（密封、层流）、物料的存放位置、效期规定等清洗灭菌（清洗灭菌效果、处理参数、灭菌装载 方式等）剩余物料的处理（胶塞等）,进入洁净室人员管理,人员的监控常见问题,无菌工作服穿着不规范未对无菌更衣进行监控无菌操作不规范,人是最大的污染源,坐着不动能产生100,000个颗粒.,人是最大的污染源,走能产生5,000,000个颗粒,人是最大的污染源,跑能产生15,000,000个颗粒,人是最大的污染源,人体内外表面广泛存在微生物,人是最大的污染源,人体携带的微生物根据卫生情况不同因人而异,人是最大的污染源,难以觉察的口腔微滴,洁净区员工应身体健康,有下列情况之一者应采取措施发烧鼻炎咳嗽传染病创伤,洁净区更衣,YES,NO,NO,头发应完全包在帽子内,洁净区更衣,YES,NO,工作服的纽扣应完全扣上,洁净区更衣,YES,NO,鞋套不能有破损,洁净区更衣,不能配戴手表、首饰,无菌工作服的穿着,穿着的顺序由上而下穿着要领尽可能不要直接接触无菌服的外表面,无菌工作服的穿着,NO,YES,面罩敞开,无菌工作服的穿着,手套尺寸不对戴法不正确,无菌工作服的穿着,手套破损,无菌工作服的穿着,鞋套穿戴不正确,YES,NO,无菌工作服的微生物控制,污染产品风险大处需取样衣服袖管取样示意,衣服胸部取样示意背部不需要取样,无菌工作服的微生物控制,手指接触碟试验,无菌操作,NO,YES,不要在更衣室交谈,无菌操作,NO,YES,YES,不操作时，应将前臂和双手放在前面，身体不能斜靠,无菌操作,NO,YES,无菌操作,定时或在任何关键操作前，应消毒手套,无菌操作,填写批记录后，手套应消毒,无菌操作,YES,NO,关键操作过程中不要拣地上的东西,无菌操作,层流下的操作台应始终保持干净整洁,NO,YES,洁净室人员管理要点,人员的培训（微生物、无菌操作、特殊防护知识、卫生等）进入洁净区人员资质的确认（关键人员必须参加模拟灌装）人员的卫生习惯体检档案和汇总洁净区内人员的工作服无菌操作进入洁净区人员数量的控制（经验证）外来人员控制（官方或客户审计人员、严禁设备厂家检修人员和参观人员进入）,进入洁净区人员更衣确认,取样点如下：1. 头部2. 眼罩3. 胸部4. 肘部5.腰部6.双手十指7. 膝部,频率：1. 初次进入者必须经过3次确认合格才可以进入无菌区2. 试验不合格者，需重复培训后再试验3.每天对无菌服、手套进行抽检,无菌服管理要点,清洗、灭菌SOP规定 贮存（效期、保存方式等） 材