甲型肝炎病毒抗体电化学发光检测试剂盒说明书.doc

甲型肝炎病毒抗体电化学发光检测试剂盒说明书Elecsys Anti-HAVElecsys 2010/MODULAR ANALYTICS 100人份【名称】通用名：甲型肝炎病毒抗体电化学发光检测试剂盒英文名：Elecsys Anti-HAV汉语拼音：Jia xing gan yan bing du kang ti dian hua xue fa guang jian ce shi ji he 【使用目的】用免疫学方法定量测定人血清或血浆中的甲型肝炎病毒总抗体。甲型肝炎病毒抗体检测有助于检测过去或现在的甲肝病毒感染，观察甲肝疫苗注射后的免疫反应。电化学发光免疫测定试剂，适用于罗氏Elecsys2010和MODULAR ANALYTICS E170免疫测定分析仪。【概述】 甲肝病毒是一种没有胞膜的RNA病毒。它属于细小的核糖核酸病毒家族。至今，仅1种人血清型和7种基因型被记述。病毒衣壳由三种蛋白 (VP1-VP3) 组成，在病毒颗粒表面形成一个免疫决定簇结构，它被高度表达在所有基因型。在注射疫苗后或正常感染后这个结构诱发免疫反应1。 甲型肝炎是最普通的急性病毒性肝炎，通过消化道传播。这种肝炎不会发展成慢性肝炎，病毒也不会持续存在组织中2。 甲型肝炎病毒是引起病毒性肝炎爆发流行的最常见原因(10-20%)3。 甲型肝炎感染发作时总的甲型肝炎抗体呈阳性。在自然感染后，抗HAV-IgG抗体能够终生存在，如果组织再次感染会对机体起到保护作用4。 现在已经有甲肝病毒疫苗和甲肝和乙肝混合疫苗5。在注射甲肝疫苗后, 抗HAV-IgG抗体两周后就可以检测到。在完全免疫过程中，这种保护作用可以持续很多年6。免疫保护作用对于抗体值没有限定，但是抗HAV浓度在10-20IU/L以上对机体有保护作用。 抗HAV抗体检测用于检查甲型肝炎病毒存在或过去感染过。同时也用于观察甲肝疫苗注射后的免疫反应。【原理】竞争法：总检测时间18分钟。 第1步孵育：50l标本；标本中的抗-HAV与HAV抗原结合。 第2步孵育：加入生物素化的和钌标记的抗HAV抗体以及链霉亲和素包被的微粒，HAV抗原上仍然游离的位点被占据。形成的免疫复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。 检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。【试剂主要成份】M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml：链霉亲和素包被的微粒：0.72mg/ml，生物素结合能力：470ng生物素/mg微粒。含防腐剂。R1：HAV抗原（灰盖），1瓶，10ml：HAV抗原(人)：40U/ml（罗氏单位），HEPES缓冲液50mmol/l，pH7.2，含防腐剂。R2：生物素化的抗HAVAg抗体；Ru(bpy) 32+标记的抗HAV AgAb（黑盖），1瓶，10ml：生物素化的抗HAVAg单克隆抗体(鼠)：0.25ug/ml；Ru(bpy) 32+标记的抗HAVAg单克隆抗体(鼠)：0.15ug/ml；HEPES缓冲液50mmol/l，pH7.2，含防腐剂。Cal 1 定标液1（白盖），2瓶，1.0ml/瓶：抗HAV阴性人血清, 含防腐剂。Cal 2 定标液2（黑盖），2瓶，1.0ml/瓶, 抗HAV（人）浓度约46IU/L在人血清中, 含防腐剂。【预防措施和警告】仅用于体外诊断。采用正确的预防措施，遵照实验室试剂使用规定。所有废物的丢弃应遵循当地法规的要求。定标液（Cal 1和Cal 2）制备使用的献血者血清经FDA批准的方法检定HBSAg、HCV 抗体、HIV12 抗体均为阴性。含有Anti-HAV(定标液2)和HAV-Ag(人,R1)的血清使用-丙稀内酯和UV射线低温消毒。但由于任何实验方法都不能绝对地排除潜在感染的危险，故该产品仍需视作病人标本一样仔细处理。一旦泄漏，应遵循权威机构的指令7，8。超过保质期后，不能再使用。 【试剂使用】试剂盒为即用型,提供的试剂瓶与分析系统是相容的。Elecsys2010：定标物Cal 1和Cal 2只有在定标过程中才被放在分析仪上(在20-25C)。定标物用完后,应立即盖好瓶盖并储存在2-8C。确保在打开盖子后没有定标物粘在盖子上。因为可能会挥发，每瓶定标液定标次数不宜超过5次。E170：除非在E170上定标需要全部容量，否则将部分准备使用的定标液装入空的带标签的有盖小瓶（CALSET），并将提供的标签贴在分装的其余小瓶上。储存在28C。每瓶分装物只用作一次定标。所有必要的操作信息,可分别通过试剂的二维条码读取。【储存和稳定性】存放在28。 为了确保使用前自动混匀期间有足够量的磁性微粒, Anti-HAV试剂盒（M,R1, R2）储存,切莫倒置。28下未开封，可稳定至标明的保质期。M，R1 ，R2试剂开封后： 28 , 8周；在E170和 Elecsys2010上： 2025，8周；Cal 1和Cal 2开封后： 28 , 8周；在Elecsys2010上（2025）： 最多5小时在E170上： 一次性使用注意：定标液要垂直保存。确保定标液不污染瓶盖。【标本采集和准备】标本只有按照下列方法收集、检测才能被接受。血清标本采集用标准样本试管或含分离胶的试管。血浆：肝素(Li-,Na-)、K3EDTA或枸橼酸钠抗凝。关于使用含分离胶试管的血清的稳定性的资料,要注意试管制造商提供的资料。（标准:血清值的批内回收率 90-110%或斜率 0.9-1.1 + 相关系数0.95 + 批内干扰2分析灵敏度(LDL)）。标本在28可稳定7天，-20可稳定3个月。标本可冻融6次9。冻融样本和含沉淀的标本使用前需离心。不要加热灭活标本。标本和质控品禁用叠氮钠作稳定剂。确保病人样本、定标物、质控物在测试前温度达到室温20-25.因为可能挥发的影响,放在分析仪上的样本、定标物、质控物应在两小时内测试完。【检测步骤】提供的材料：货号：11820605，100人份的Elecsys 抗HAV试剂盒包含： M链霉亲和素包被的微粒 R1HAV Ag R2生物素化的抗HAV Ag抗体，三联吡啶钌标记的抗HAV Ag抗体 Cal 1定标液1 Cal 2 定标液2 26 小瓶标签需要的材料（未提供）： Elecsys 抗HAV质控品1和2，每个81.0ml, 货号11876350 Elecsys 甲型肝炎稀释液，215ml样本稀释液，货号11361252 Elecsys 定标液小瓶，256带盖空瓶，货号 11776576 常用实验室设备 Elecsys 2010或MODULAR ANALYTICS E170Elecsys2010分析仪需要: Elecsys 系统缓冲液（ProCell）,6380ml，货号11662988 Elecsys 测量池清洗液（CleanCell），6380ml，货号11662970 Elecsys 添加剂液（SysWash），1500ml，货号11930346 Elecsys 系统清洗液支架（Adapter for SysClean），货号11933159 Elecsys 2010反应杯（Assay Cup），6060， 货号11706802 Elecsys 2010吸样头（Assay Tip），30120，货号11706799MODULAR ANALYSIS E170分析仪需要: Elecsys 系统缓冲液（ProCell M）,12L,货号12135019 Elecsys 测量池清洗液（CleanCell M）,12L,货号12135027 Elecsys 系统缓冲液/测量池清洗液预热杯（PC/CC-Cup）,50个,货号03023141 Elecsys 清洗液（ProbeWash M），1270ml，用于最终清洗和试剂转换试剂针 清洗反应管/滴头，货号03005712 Elecsys 反应杯/吸样头盒(AssayCups/AssayTips Combimagazine M),48 84，货号12102137 Elecsys 废物盒(wasteliner)，货号03023150 Elecsys 系统清洗液支架(SysClean Adapter M)，货号03027651各种分析仪均适用的材料 Elecsys 系统清洗液（SysClean），5100ml，货号11298500【方法】按仪器操作说明进行操作。检查试剂与消耗品是否充足。使用前需混匀微粒。仪器通过扫描试剂盒条形码自动输入测试所需的特异性参数，不需手工输入。如果特殊情况下仪器无法阅读条形码，可以手工输入15位数字。E170/Elecsys2010：将冷藏试剂预温到20后放置于仪器的试剂盘上，避免产生泡沫。系统自动控制试剂温度和开/关试剂瓶盖。将定标液1和定标液2放在分析仪的标本测试区。只在标定时打开瓶盖。条形码自动提供定标所需的数据资料。定标完成后，将定标液1和定标液2放回28保存或丢弃(E170)。【定标】Elecsys Anti-HAV 以NIBSC(National institute for Biological Standard and control)的甲肝抗体(人,免疫球蛋白)、NIBSC编码:97/646 第二个国际标准作为标准定标。定标频率：每批试剂盒必须用新鲜试剂和抗HAV Cal 1,Cal 2定标一次（如：试剂包在仪器上登记后不超过24小时）。另外，以下情况需要再次定标： 同一批号试剂一个月后（28天） 7天后（放置仪器上的同一试剂盒） 根据要求进行标定：如质控结果超出范围时 根据规定进行多次标定。定标确认:不需要。分析仪的软件会自动检查定标曲线的有效性及偏离。【质控】Elecsys Anti-HAV质控品。质控品1和质控品2至少每24小时或每一次定标后或每个试剂盒测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在设定的范围内。如出现质控值落在范围以外，每个实验室应建立操作指南以采取校正措施。如果需要，样本需要重新测试。【计算】E170/Elecsys2010免疫分析仪会自动机算每个样本中Anti-HAV的浓度。结果单位为IU/L。结果解释：使用Elecsys Anti-HAV检测，样本浓度20IU/L表示甲肝病毒感染现在或过去感染过或者注射甲肝疫苗后存在抗体。注意！使用不同的Anti-HAV检测方法检测结果是有区别的。因此使用不同制造商的试剂每个样本的检测结果是变化的。如果在疫苗注射后监测免疫保护过程中，如因检测方法改动引起Anti-HAV的含量变化，用新的检测方法获得的Anti-HAV的测定值必须用两种方法同时平行测定核实。【干扰因素】该方法不受黄疸（胆红素50mg/dl）、溶血（血红蛋白1.2g/dl）、脂血（内脂1000mg/dl）和生物素5mg/天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。类风湿因子的浓度低于1600U/ml,没有任何干扰。18种常用药物经试验对本测定无干扰。接受过小鼠单抗治疗或诊断的病人可能会得出不正确的结果。罕见病例出现高浓度钌抗体和抗链霉亲和素抗体的干扰。Elecsys anti-HAV含的添加物会最小化这些影响。重要：Elecsys 抗HAV测定结果应结合病人病史、临床检查和其他检查结果综合起来进行诊断。在不确定的情况下应考虑疫苗注射,特别是结果处于Cut-off值的临界(20IU/L)。【检测范围】3.00-60IU/l(由master定标曲线的最低检测限与最高检测限决定)。如果测定值低于最低检测限,报告为3.00IU/l. 如果测定值高于检测范围,报告60IU/l或者必需稀释。特殊情况下,含抗HAV IgM的样本稀释后会出现非线性。【稀释】样本中Anti-HAV的浓度超过检测范围应用甲肝稀释液稀释。稀释后样本中Anti-HAV的浓度20IU/L。结果乘上稀释因子。【性能评估资料】精密度:下面为从Elecsys分析仪上获得的评估资料。不同的实验室获得的资料可能会不同。用Elecsys试剂、人血清、质控物(批内n=21,批间n=10) 检验它的重复性；在E170上检测总的精密度，根据国际临床试验室标准协会(National Committee for Clinical laboratory Standards)的修改草案(EP5-A)来检验:每日试验6次共进行10天实验(n=60);下面为得到的实验结果:Elecsys2010批内精密度批间精密度样本平均值IU/lSDIU/lCV%平均值IU/lSDIU/lCV%HS,阴性3.00.29-3.00.69-HS,cut-off 域值17.60.221.218.40.744.0HS阳性41.90.481.242.31.232.9质控A-HAV120.90.401.921.70.813.7质控A-HAV235.80.842.336.51.022.8E170批内精密度总精密度样本平均值IU/lSDIU/lCV%平均值IU/lSDIU/lCV%HS，阴性3.00.34-3.00.83-HS,cut-off 域值21.80.110.529.20.893.0HS阳性55.20.300.551.31.122.2质控A-HAV121.10.170.821.00.572.7质控A-HAV235.20.230.734.80.561.6HS=人血清分析灵敏度:(最低检测限)20IU/L）。46例注射甲肝疫苗的病人中取165个样本使用Elecsys Anti-HAV和购买到的比较法检测抗体浓度。所有样本的抗体浓度均在域值以上。 临床特异性:特异性研究，共1301例未被筛选过的鲜血者、住院病人、孕妇和透析病人(没有甲肝感染的症状)，使用Elecsys Anti-HAV和商业提供的比较法检测抗体浓度，没有检测到HAV阳性。用Elecsys Anti-HAV方法,1286例结果20IU/L。在这个研究中,特异性为98.85%。95%的可信区间为98.11-99.35%。分析特异性:与HBV、HCV、HIV、CMV、EBV、HSV、弓形虫、风疹和密螺旋体没有交叉反应。共计140个Anti-HAV阴性的、上述抗原或抗体阳性的血清和血浆样本接受检验评估（ANA、AMA）。【包装规格】 100人份/盒【有效期】 11个月【生产企业】 Roche Diagnostics GmbH, 【地址】 D-68298 Mannheim, Germany【参考文献】1. Robertson BH, Nainan OV. Genetic and antigenetic variants of hepatitis A virus. In: Viral Hepatitis and Liver Disease. Eds: Rizzeto M, Purcell RH, Gerin JL, Verme G, Edizioni Minerva Medica, Turin 1997;1418.2. Koff RS. Hepatitis A. Lancet 1998;341:164349.3. Lemon ML, Days SL. Type A hepatitis. In: Gorbach S, Bartlett JG, Blacklown NL (eds). In-fectious Diseases. Saunders WB, Philadelphia, 1992;705708.4. Stapleton JT. Host Immune Response to Hepatitis A Virus. JID 1995;171(Suppl 1):9-14.5. Ambrosch F, Wiedermann G, Andr FE, Delem A, Gregor H, Hofmann H, et.al. Clinical and Immunologic