2014筛查实验室建设培训

艾滋病筛查实验室规范化建设和质量管理,广州市疾病预防控制中心艾滋病防制科Tel：36545132,艾滋病检测实验室工作依据,全国艾滋病检测技术规范 2009年修订版全国艾滋病检测工作管理办法 2006年颁布,开展艾滋病检测工作的实验室要经过技术和条件验收，未经验收或验收不合格的实验室不得开展艾滋病检测工作。 -全国艾滋病检测工作管理办法,2010年广州市卫生局出台文件，要求二级及以上医疗机构必须建立艾滋病筛查实验室。孕产妇HIV抗体免费筛查医疗机构必须建立艾滋病筛查实验室或检测点。辖区病例超过一定数量的社区或乡镇医院必须建立艾滋病筛查实验室或检测点。,艾滋病检测筛查实验室类别及管理,筛查实验室,检测点,医疗、采供血机构等,12个区疾控中心,筛查中心实验室,实验室建设两个基本条件,条件一： 人员要求、建筑要求、仪器设备要求条件二： 质量管理体系构建,艾滋病筛查实验室的基本条件一,1人员条件 至少由3名医技人员组成，具有中级卫生技术职称人员至少1名。负责筛查试验的技术人员需具有2年以上从事病毒性疾病血清学检测工作经验，接受过省级或省级以上艾滋病检测技术培训，并获得培训证书。2建筑条件 实验区域和办公区域分置，实验室或检测区域应分为清洁区，半污染区和污染区，应符合二级生物安全实验室（BSL-2）要求。3仪器设备条件 配备艾滋病抗体筛查试验所需设备，至少包括酶标读数仪（或发光检测仪）、洗板机、加样器（仪）、普通冰箱、低温冰箱、离心机、温箱或水浴箱、消毒与污物处理设备、实验室恒温设备、安全防护用品和生物安全柜。,生物安全柜,实验污染区,半污染区,清洁区,公共走廊,应急门,实验室分区布局图,紧急撤离路线,紧急撤离路线,清洁实验物品柜,水槽,污染白大衣挂放处,细菌室,生化实验区域,免疫实验区域,生物安全柜的选择：内循环类型（单人、双人） 不需要安装排风管。30%外排类型（单人、双人） 需要安装排风管。,1. 人员条件 至少由2名经过艾滋病检测技术培训并获得培训证书的专业人员组成。2. 建筑条件 实验区域和办公区域分置，需有艾滋病检测区域或专用实验台，能开展简便、快速检测。3. 设备条件 需配备快速试验所必须的物品，包括普通冰箱、消毒与污物处理设备、一次性消耗品、安全防护用品。,艾滋病检测点的基本条件一,生化实验区域,实验操作区,免疫实验区域,细菌室,检测点实验室布局,门,应急门,人员进出,物品进出,要求:1、实验区域与办公区域分开2、实验室内部环境要求：实验室清晰划分生化、临检、细菌操作区；实验仪器摆放位置合理、安全；保持实验室环境整洁，避免杂物随处堆放；不可放置生活物品，如水杯、茶叶、饮用水等等。,艾滋病筛查实验室、检测点的基本条件二,质量体系构建：,纲领性文件,指导性文件,实施性文件,实验室质量体系文件应覆盖检测前、检测、检测后整个过程， 包括质量手册、程序文件、标准操作规程（SOP）和记录。,全国艾滋病检测技术规范,第一章 样品的采集和处理 第二章 HIV抗体检测 第三章 HIV核酸定性检测 第四章 HIV RNA定量测定（病毒载量测定） 第五章 CD4+和CD8+T淋巴细胞检测 第六章 HIV抗原检测 第七章 艾滋病实验室安全防护和职业暴露预防 第八章 艾滋病实验室质量管理 第九章 艾滋病实验室质量考评办法 第十章 HIV诊断试剂临床质量评估方案,质量体系文件内容,主要工作制度；主要技术规范（流程）；实验仪器和实验方法SOP文件；主要记录表格；需上墙的规范。,主要工作制度,初筛实验室工作制度1.实验室人员要严格遵守实验室的各项规章制度，认真执行操作规程。2. HIV抗体检测实验室分清洁区、半污染区、污染区，三区的器械、物品不可交叉摆放。3. 实验室内不准吸烟、进食、喧哗。4. 实验室内应保持清洁、整齐，各种器材、仪器需定位陈设，贵重仪器需专人保管。试剂和标本要分类存放，试剂标签要清晰。5. 严格遵守毒品、菌毒种、易燃易爆物品的保管和安全使用制度。6. 实验室、无菌室、工作台要随时或定期消毒，凡沾有毒的器材应浸泡消毒或高压消毒方能洗涤或丢弃，使用过的器材、工作服要及时消毒和清洁，污物要及时处理。带传染性的物品不得随意带出实验室。7. 进入实验室必须穿工作服或隔离衣，做好个人防护，离开实验室要脱去工作服或隔离衣，防止污染环境。 8. 实验室要做好原始记录，保管好与实验有关的各种数据、资料。9. 严格按仪器操作作业指导书使用仪器，贵重仪器设使用登记本，实验人员每次使用时要做好登记，仪器需定期维护，并作记录。10. 检验人员需要在实验室加班，应经科室负责人批准。11. 各类实验室必须设明显的标记，非工作人员未经许可不得随意进入实验室。12.实验室必须配备灭火器、灭火箱等消防工具，灭火器应经常检查，任何人不得擅自挪动位置，不得挪作他用。下半时注意关好水、电、门窗等。,主要工作制度,安全工作制度（“规范”第七章） 样品、试剂管理制度（“规范”第一章） 事故处理制度（“规范”第七章）,主要工作制度,保密制度 1. 科室人员、新上岗人员、进修人员、实习人员在上岗前必须接受艾滋病防治工作保密内容的培训。2. 没有本科室相关工作人员在场时，任何人不得进入有保密信息的工作场所。3. 外单位人员进入检验室工作区须经科长同意，并有人陪同。有外单位人员在场时，本科室员工不得谈论涉及病人信息的内容，不得翻阅病人信息资料。4. 咨询、流调、随访工作正在进行时，无关人员不得随意进出工作场所。5. 艾滋病检测确证实验室出具的艾滋病病毒抗体确证报告应以保密方式发送，不得以书信、电邮、传真等方式发送。艾滋病病毒抗体确证试验结果应当告知本人；本人为无行为能力人或者限制行为能力人的，应当告知其监护人。不可对无关人员透露检测结果。6. 不可有意或无意向外透露病人相关信息。7.艾滋病相关材料，包括检测、流调、随访、治疗等资料须定期分类归档，设专人妥善保存，保存期不少于十年。材料不得随意摆放，不得随意借出，不得擅自修改和销毁。作废材料须用碎纸机粉碎后方可丢弃。8. 单位之间人工传送病人资料，包装材料须密封。9.电脑内相关检测、流调、随访、治疗等资料必须加密，专用电脑由专人保管，不得随意拷贝电脑资料，不得随意将电脑资料以电子邮件形式发送。10. 本科室人员发表的论文、学术报告不得含有泄露病人信息的内容。11. 保密工作执行情况纳入人员年度考核，一旦发生泄密事件，论情节严重性追究有关人员责任。,主要工作制度,仪器使用维护和校准制度1. 仪器设备管理1.1 每台仪器设备设专人管理，保管人员需对所辖设备性能状况清楚了解，对所辖仪器设备的相关资料、零部件等妥善保管，对仪器设备定期运行状况及使用情况进行定期检查，对陈旧设备报废。1.2 检测人员借阅资料需登记。1.3 外科室人员或外单位人员借阅资料或借用仪器设备需征求保管人员同意，且作登记。2. 仪器设备使用2.1 操作人员在使用前需熟悉仪器的操作规程，大型仪器设备操作人员需取得仪器使用授权书后方可上机操作。2.2 操作人员严格按照仪器设备说明书及作业指导书进行操作。2.3 仪器一旦出现故障，应立即停止使用，同时报告保管人或科室负责人，检查原因，或请厂家前来修理，做好仪器使用情况、故障情况及维修情况登记。2.4 仪器使用完毕后，操作人员须作好仪器使用登记。3. 仪器设备维护3.1 保管人员或检测人员需按照仪器设备说明或作业指导书对仪器设备定期进行维护保养。3.2 对维护操作作登记。4. 仪器设备校准4.1 酶标仪、天平、定量移液器、生物安全柜、全自动蛋白免疫印迹仪等设备每年需定期校准，由后勤管理科负责请计量局专业人员进行校准；长期不使用时，仪器保管人要定期开机检查仪器运转是否正常。4.2 常用仪器设备在两次检定/校准周期之间进行期间核查，方法采用同等精度的计量仪器设备进行比对。,主要工作制度,检测数据的记录和保存制度1. 数据记录和保存操作1.1科室设计相关记录格式，包括手写版和电子版。1.2 艾滋病咨询门诊负责检测标本的采集接收，将标本资料录入手写版和电子版表格。1.3 艾滋病咨询门诊将电子版表格通过局域网传输到实验室。1.4实验人员按照表格内需要检测的项目，对标本进行检测，同时做原始记录，完成实验后将检测数据填入表格内，保存数据和打印报告。1.5 实验室人员用移动硬盘每月对电子版检测数据进行备份拷贝，年终将整年数据刻录到光盘内保存。手写版表格和检测原始记录分类归档保存。 2.记录的保存要求 2.1 所有记录应按分类编目保存，便于存取和检索。2.2 记录在适宜的环境中妥善保管，防潮、防火、防虫蛀鼠咬，防止损坏、变质和丢失。电子媒体记录的存储取用应适应电子媒体存储取用的特点。对损坏或变质的记录、档案资料应及时修复或复制。设专人负责妥善保存检测记录，不得擅自修改和销毁。记录保存期不少于十年。2.3 受理记录和检验结果报告书由质量控制科保存。检验过程的记录（检验的原始记录）由科室保存。3.记录的安全保密3.1 所有记录应予安全保护和保密，设专人保管，不允许随意查借阅。3.2 检测数据存储电脑设专人保管，数据表格加密，不得随意拷贝、删除，防止原始数据的丢失和未经授权的侵入或修改。3.3 本中心内部人员查阅有关记录(档案)须经科室负责人同意。3.4 外部人员查阅记录，须经中心领导同意。3.5 所有记录只可就地查阅，不予外借。,主要工作制度,疫情报告制度（提纲） 疫情报告责任科室、责任人 疫情报告流程 人员承担的责任,主要技术规范（流程）,检测及结果报告操作程序1. 筛查试验报告：对呈阴性反应的样品，出具“HIV抗体阴性”报告；对呈阳性反应者出具“HIV抗体待复查”报告或不出具报告，须进行复检。2. 复检试验报告： 筛查中心实验室或确证实验室对初筛呈阳性反应的上送样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的筛查试剂重复检测。如两种试剂复测均呈阴性反应，则报告“HIV抗体阴性”；如均呈阳性反应，或一阴一阳，不出具报告，做进一步确证。3. 检测结果的解释3.1 筛查阴性结果：核实最后一次高危行为已过三个月的“窗口期”，可以认为没有感染HIV；如果没有渡过三个月的“窗口期”，不能排除HIV感染的可能，应在“窗口期”过后再进行复查。 3.2 筛查阳性结果：筛查阳性结果不能判定对方已被HIV感染，解释为可能是 感染HIV引起的阳性反应； 生物假阳性，体内存在与HIV蛋白产生交叉反应的其它蛋白引起； 技术假阳性，由于试剂质量或人为操作不当引起。标本须进一步做确证试验方能下最终判断。 3.3 确证阴性结果：核实最后一次高危行为已过三个月的“窗口期”，可以认为没有感染HIV；如果没有渡过三个月的“窗口期”，不能排除HIV感染的可能，应在“窗口期”过后再进行复查。 3.4 确证不确定结果：不能判定对方是否被HIV感染，解释为可能是 HIV早期或晚期感染； 非特异性反应，是由各人体质差异或试剂制作技术等引起。结合流行病学史对其进行评估，并建议其每3个月随访复检1次，连续2次，共6个月。如果检测时暴露时间已超过3个月，则在3个月后随访1次即可。3.5 确证阳性结果：表示已感染HIV，具有传染性。结果告知同时，必须询问受检者是否有过高危行为。对于小于18M的婴儿，抗体可能来自于母亲，建议其十八个月后再进行检测。,主要技术规范（流程）,质量管理操作程序（“规范”第八章）1. 常规室内质控1.1 实验前质量控制1.1.1采集标本前病人的准备。1.1.2正确的标本采集方法。1.1.3准确及时的运送标本。1.1.4实验前，按照不同检测项目正确地处理和保存标本。2.实验中质量控制2.1应用酶联方法进行抗体实验时，在每次实验时应设置一个单一浓度水平的质控品即弱阳性对照，每次实验均加入1孔质控品。2.2 根据质控品OD值，作Levey-Jennings 质控图质控或做“即刻法”质控。2. 3 操作者在测定质控品时，发现质控品数据违背了控制规则，应填写失控报告单，上交室负责人，分析失控原因，由室负责人决定是否要发出检验报告。2.4 每月(月末)定期召开质量控制会，讨论本月检测的质量控制情况。3.实验后质量控制3.1 实验后准确填写检验结果。3.2.及时发出报告。3.3正确地解释检验结果的临床意义,主要技术规范（流程）,实验室安全标准操作程序(“规范”第七章31页) 样品采集、处理和上送操作程序 （“规范”第一、二章）废弃物处理和消毒操作程序（“规范”第七章33页）职业暴露处理流程（“规范”第七章34页）,实验仪器和实验方法SOP文件,酶标读数仪操作细则发光检测仪操作细则生物安全柜操作细则 高压灭菌器操作细则 酶联方法检测细则 快速方法检测细则,仪器操作说明书试剂盒说明书,主要记录表格,ELISA质量控制图表抗-HIV检测登记表初筛试验原始记录 实验差错登记表 酶标仪使用和维护记录 生物安全柜使用和维护记录 高压灭菌器使用和维护记录 事故登记表环境温湿度登记表 冰温箱登记表人员健康监护记录职业暴露个案登记表废弃物登记表,“已统一制定”,需上墙的规范,筛查实验室工作制度安全工作守则或制度 初筛试验流程图 （“规范”第二章）职业暴露处理流程图（“规范”第七章）,操作程序文件（SOP 编写格式）,封面（1）标题（2）编写、审核、批准人及相应日期（3）修改内容、修改日期、修改批准人正文（1）标题和编号（2）目的、应用范围和方法或程序（3）支持性文件（4）相应记录（5）附录，包括相关的附加文件如记录表格、设备和试剂盒说明书 等。,SOP,SOP,SOP,SOP,作 业 指 导 书 目 录 编号 标题GZCDC/WDAD01 艾滋病病毒抗体酶联免疫吸附法（ELISA）检测细则GZCDC/WDAD02 艾滋病病毒抗体明胶凝集法（PA）检测细则GZCDC/WDAD03 梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附法（ELISA）检测细则GZCDC/WDAD04 艾滋病类样品的管理制度GZCDC/WDAD05 DENLEY-DRAGON (MK-2)全自动酶标仪操作规程GZCDC/WDAD06 艾滋病类样品采集、收检程序GZCDC/WDAD07 科室安全防护和内务管理程序GZCDC/WDAD08 艾滋病实验室生物安全防护GZCDC/WDAD09 HIV职业暴露后预防GZCDC/WDAD10 艾滋病病毒抗体酶联免疫吸附法（ELISA）检测细则 （国产）GZCDC/WDAD11 艾滋病病毒1+2型抗体免疫印迹试验(HIV1+2 Western Blot)GZCDC/WDAD12 Forma class B2生物安全柜操作规程,广州市疾病预防控制中心（广州市卫生检验中心）作业指导书 标题：艾滋病病毒操作危害风险评估,修改记录,广州市疾病预防控制中心作业指导书 文件编号：GZCDC/WDAD29标题：艾滋病病毒操作危害风险评估 版号：第 1 页 共 2 页1.目的明确艾滋病病毒操作危害风险，避免发生生物安全事故。2.使用范围本操作规程适用于本实验室危害风险评估及事故处理。3.职责操作人员：按照相关危害风险评估及事故处理进行正确实验操作。质量监督员：负责监督实验是否按危害风险评估及事故处理原则进行。科室负责人：负责综合管理。4.危害风险评估按照实验室生物安全通用要求（GB 194892004），艾滋病病毒属于危害等级病原微生物，艾滋病病毒主要通过血液传播、性接触传播、母婴传播三种途径传播，一般不通过气溶胶传播。根据标本中艾滋病病毒含量和操作危险性评估本实验室危害风险。4.1 艾滋病血清学检测：艾滋病病毒含量较低、操作危险性较低，在BSL2级实验室内，在普通操作台或生物安全柜内操作，实验人员做好个人防护。4.2 HIV感染者淋巴细胞分离：艾滋病病毒含量较高、操作危险性较高，在BSL2级实验室内，在生物安全柜内操作，实验人员做好个人防护。4.3 HIV感染者CD4T淋巴细胞检测：艾滋病病毒含量较高、操作危险性较高，在BSL2级实验室内，标本前处理部分须在生物安全柜内操作，实验人员做好个人防护。4.4 艾滋病病毒核酸提取：艾滋病病毒含量较高、操作危险性较高，在BSL2级实验室内，标本前处理部分须在生物安全柜内操作，实验人员做好个人防护。4.5 艾滋病病毒分离：艾滋病病毒含量较高、操作危险性较高，在BSL3级实验室操作，实验人员做好个人防护。4.6 根据危害风险评估制定相应实验的操作规程。4.7 实验人员严格按相应操作规程进行操作。4.8 制定紧急事故处理办法。,广州市疾病预防控制中心作业指导书 文件编号：GZCDC/WDAD29标题：艾滋病病毒操作危害风险评估 版号：第 2 页 共 2 页5.事故处理51 建立标本种丢失、破坏或实验室偶发事故应急处理办法，制定相应记录。52 实验室内备有75%酒精、高效氯等消毒剂。53 制定事故登记表及事故上报程序。6.支持性文件6.1 科室安全防护和内务管理程序 （文件编号：GZCDC/WDAD07）6.2 中华人民共和国传染病防治法实施办法6.3 实验室生物安全通用要求（GB 194892004）6.4 全国艾滋病检测技术规范7.附录71 艾滋病防制科生物危害评估表,GZCDC/WDAD29-01,筛查实验室验收程序,申报单位填写艾滋病检测筛查实验室技术与条件验收申请表,申报单位将区、县级市卫生行政部门已盖章的艾滋病检测筛查实验室技术与条件验收申请表报广州市疾病预防控制中心,申报单位将艾滋病检测筛查实验室技术与条件验收申请表报所在区、县级市卫生行政部门初审，盖章。,现场验收，加具意见。,上报市卫生行政部门审核,市卫生行政部门审核通过后下发批准文件,报所在区、县级市疾病预防控制中心,现场初评，加具意见。,艾滋病实验室质量管理,设备校准与维护,必须经国家法定部门定期（每年至少1次）校准的仪器至少包括：酶标仪/洗板机，加样器，温度计，高压灭菌器 。加样器、温湿度计须经计量部门校准。其他仪器，如生物安全柜，离心机等也必须定期（每年1次）校准，可请生产厂家校准。酶标仪与洗板机定期维护、清洗。,主要记录表格,抗-HIV检测登记表：包括受检者姓名或编号、性别、年龄、职业、送检单位、人群类别、感染途径、地址和户口、收样日期、收样人、检验结果、备注等。 ELISA质量控制图表 初筛试验原始记录：包括检测项目、标本性质和状态、测定方法、试剂盒厂家、批号、效期、环境条件等，标明空白对照、阳性对照、阴性对照、外部对照以及待检样品的位置，操作人员和复核人员姓名及检测日期。 实验差错登记表 酶标仪使用和维护记录 生物安全柜使用和维护记录 高压灭菌器使用和维护记录 事故登记表环境温湿度登记表 冰温箱登记表人员健康监护记录职业暴露个案登记表废弃物登记表,1.实验原始记录表、打印数据、检测记录表、标本登记、标本保存记录以及仪器设备维修和校准记录等存档保存一般应为10年期限。最好同时使用计算机保存各种文件和记录。内含病人姓名的所有工作记录一定要保密。 2. 存档的资料不应随便堆放，应按一定方式编号，便于查询。 3. 资料的存档制度、查询制度、借阅制度、保密制度应健全。 4. 资料是实验室的公有财产，不可以任意将资料带走、借走、丢失、不归还或更改。 5. 实验室应有人专职或兼职任资料保管员，以便查询。,存档,质量控制（QC ）,定义 质量控制是指为确保实验工作正常进行而在每一次实验过程中必须采取的各种措施。,实验前质量控制 采集标本前病人的准备；正确的标本采集方法；准确及时的运送标本；实验前正确地处理和保存标本。实验中质量控制 质控品的准备；试剂盒的评价；开展Levey-Jennings 质控图质控（或“即刻法”质控）。实验后质量控制 实验后准确填写检验结果；及时发出报告；正确地解释检验结果的临床意义。,试剂盒内部对照 试剂盒内部对照质控品即为试剂盒内提供的阳性和阴性对照血清。试剂盒内部对照用于判断每次实验的有效性，但不能作为室内质控品使用。每一次检测临床样品时，必须有试剂盒内部对照，而且只能在同批号的试剂盒中使用。内部对照结果无效，必须重新试验。,室内质控品,为非试剂盒组份的外部质控品，是为了监控检测的重复性而设置的，包括强阳性、弱阳性和阴性质控血清。也可以只设置一个弱阳性质控，以该试剂盒临界值（Cut-off）的23倍为宜。外部质控品的作用是，判断该批临床样品检测的有效性，因此，每次实验必须包含室内质控品，其结果无效，必须重新试验。,室内质控品的来源和选择,1）通过向有关机构购买获得2）通过实验室制备获得 ( 比较经济的方法 ) 混合试剂盒内部对照血清，等量分装。 混合HIV 抗体阳性或阴性人血清，3000转/分钟离心15分钟，用0.2m 生物滤膜过滤除菌后再进行56 30分钟加热灭活处理。弱阳性对照可以通过使用HIV抗体阴性的正常人血清梯度稀释HIV抗体强阳性血清并经标定后得到。,室内质控品的保存,1）外部对照血清或血浆的一次制备量应该足够本实验室 一年使用。2）外部对照血清应该均一、无菌。3）外部对照血清标定后应该等量分装，每个分装的量应 足够一周使用。4）外部对照应该分类作好标记，使用不同颜色的标签。5）外部对照血清应该存放在70 ，如无条件则存放 在非自动除霜的20 冰箱。6）外部对照血清一旦融解以后应该存放在 28 ，一 周后必须弃去，不能重新冻存。,室内质控品的使用,原则上每一次实验必须使用外部对照质控血清，建立质控图，以便监控实验操作的一致性和结果的准确性。同时可以了解各批试剂盒之间的误差(批间差异)。,建立质控图参数（ELISA）,对HIV抗体检测(ELISA)外部对照质控血清的评价采用多次测定的OD值的均值上下各两个标准差的范围，即外部对照OD值的95可信限为 x 2s。各个外部对照的标定即确定外部对照的均值和可信限，可用几个统计学参数如均值( x )、标准差(s)以及变异系数(cv)来确定可信限。 算术平均值( x )代表一组OD值数的平均值 标准差(s) 变异系数(cv),范例：参考郑怀竞主编免疫学检验室间质评与室内质控，1997年出版。,x 计算公式为： x x = N s 计算公式为： ( xn - x )2 s = N cv 计算公式为： s cv = x 100 % x,通过上表，计算S/CO值的均值（x），标准差（s）和变异系数（cv） x =1.72 s =0.29 cv =16.9%根据以上数据绘制室内质控框架图, 开始质量控制,质控图(Levey-Jennings控制图),质控图的判定和分析,如果检验进入质控状态时，质控对照值超出 2s，则本次实验结果不能被接受( 失控 )。 位移：如果几个连续质控对照值 (3-5次) 都落在均值(中心线)的一边则称之为位移，通常表示存在大的变化 ( 失控 )。 引起位移的原因有使用新批号的试剂盒、使用新试剂、实验员的更换、孵育温度的改变、仪器 ( 移液器 ) 故障等。 趋势：当几个连续质控对照值(5-7个)几乎按一个方向分布时称之为趋势(失控)，通常由参数的缓慢改变引起，如试剂失效和移液器逐渐不准确等。 发生漂移和趋势的最常见的原因是试剂(如酶标记物)或对照的失效。,质量控制图建立和分析的注意要点,a可以先进行最佳条件下的变异测定。b采用S/CO比值制图要比单用OD或A值制图的方法给出更为精确的评估，因为它将每次/