疟原虫形态鉴别

疟原虫形态特征及鉴别,四川省疾控中心康杨,它们分别引起 间日疟、恶性疟、三日疟、卵形疟,间日疟 P.vivax, 间日疟原虫分布于我国大部分地区， 主要是中部地区 引起间日疟, 病程呈良性, 但有复发,恶性疟 P.falciparum, 四种疟原虫中致病力最强 无免疫力者感染后出现急性症状,不及时治 疗可危及生命 在我国主要流行云南省和海南省,三日疟 P.malariae,三日疟在我国已基本消除主要发生在晚秋及初冬, 无复发 卵形疟 P.ovale又称蛋形疟原虫, 在我国已基本消除引起症状与间日疟相似, 但很少复发,四种疟原虫的 形态特点,疟原虫在RBC内的形态（三期六种形态）,滋养体期：大、小滋养体裂殖体期：成熟、未成熟裂殖体配子体期：雌、雄配子体,疟原虫形态特征和鉴别要点,在RBC内发现疟原虫是确诊疟疾和鉴别虫种的重要依据疟原虫基本构造相同-细胞膜、质、核瑞氏Wright或姬氏Giemsa染色：核染成紫红色，胞质呈兰色，疟原虫消化血红蛋白产物-疟色素呈棕黄色疟原虫在RBC内各期形态各不相同,薄血膜中常见的血液成分,中性白细胞,酸性球,血小板,大单核球,淋巴球,红血球, 薄血膜上Pv的形态,环状体（ring form）,间日疟早期滋养体-环状体,约占寄生红细胞的1/3，很少见到一个红细胞寄生2个环状体和一个环状体有2个核。,间日疟滋养体-大滋养体,经810小时，虫体增大，胞质增多，伸出伪足。出现黄褐色的疟色素。红细胞胀大，变形，颜色变淡，并出现数量较多，淡红色的小点，称薛氏小点,大滋养体(big trophozoite),Pv大滋养体与成熟裂殖体,间日疟裂殖体,2.1 未成熟裂殖体 （immature schizont）,经40小时晚期滋养体发育成熟，虫体变圆，空泡消失核开始分裂又称裂殖体前期色素聚集成团块,成熟裂殖体约有1224个 细胞核胞浆也随之分裂受染RBC 胀大、颜色苍白、虫体几乎充满红细胞,裂殖体(schizont),未成熟裂殖体 成熟裂殖体,间日疟原虫雌配子体,虫体较大，占满胀大的红细胞胞质致密，色深蓝核小致密，深红色，多位于虫体一侧疟色素分散,间日疟原虫雄配子体,虫体较小，占满胀大的红细胞胞质浅蓝核大疏松，淡红色，多位于虫体的中央。疟色素分散,配子体(gametocyte),雌配子体 雄配子体,P.v所寄生的红细胞的变化,红细胞胀大,红细胞色变淡,红细胞胞质中出现鲜红色的薛氏点,薄血膜上P.f 的形态, 环状体(ring form),恶性疟原虫-环状体,环纤细,约为RBC直径的1/6，RBC不胀大可见数粒，大小不一，红色粗大的茂氏点核1个，但2个常见，红细胞常含2个以上原虫虫体常位于红细胞的边缘 ，呈“鸟飞状”不带色素,恶性疟原虫大滋养体,一般不出现在外周血虫体小结实，圆形，不活动疟色素集中一团，黑褐色原虫此时开始集中在内脏毛细血管,恶性疟成熟裂殖体,裂殖子836个，通常1824个，排列不规则疟色素集中成一团虫体占红细胞体积的2/3至3/4,配子体(gametocyte),雌配子体,雄配子体,恶性疟原虫雌配子体,新月形，两端较尖核致密，深红色，常位于中央疟色素黑褐色，分布于核周围,恶性疟原虫雄配子体,腊肠形，两端钝圆胞质色蓝而略带红核疏松，淡红色，位于中央疟色素黑褐色，小杆状，在核周围较多,厚血膜上四种疟原虫的形态,间日疟原虫,恶性疟原虫,三日疟原虫,卵形疟原虫,成熟大滋养体(核分裂前)与未成熟雌配子体的形态相似，其区别点是： 大滋养体的边缘不规则，有时见空泡，色素较少，颗粒较细，分布不匀，虫体较小。 雌配子体边缘规则，不含空泡，色素较多，颗粒较粗，分布均匀，虫体较大。,恶性疟原虫由于在发作间歇期，绝大部分疟原虫要进入内脏毛细血管发育，周围血液内仅能发现环状体和配子体。因此，恶性疟在发作期为最适宜的查血时间。 如在血膜上查见许多这样的小滋养体而无大滋养体，可判定为恶性疟原虫。恶性疟原虫粗大环状体与间日疟原虫的环状体相似，较难区别。此时应依据血膜上有无其他发育阶段的疟原虫来确定。 如果血膜上只有少数环状体，其形态又不太典型，则应另外取血检查，不应轻易下结论。,三日疟原虫主要形态特征,1. 寄生的红细胞正常或缩小，有淡红色细小的齐氏点（Ziemanns）；2.环状体中等大小，核较大，胞浆粗厚；3.滋养体胞浆常呈带状，核呈条状，疟色素深褐色，粗大常沿边缘分布；4.裂殖体小于正常红细胞，核612个，常排列成菊花状，疟色素常聚集于中央；5.雌雄配子体小于正常红细胞，色素呈深褐色；6.常可查见各阶段的疟原虫。,卵形疟原虫的主要形态特征,1. 寄生的红细胞正常或稍胀大，可呈卵圆形或边 缘呈锯齿（伞矢）状，薛氏点出现较早粗大，量多； 2. 环状体中等大小，核较大，胞浆粗厚； 3. 滋养体胞浆常呈圆形，空泡不明显，疟色素棕黄色，粗大常沿边缘分布； 4. 裂殖体小于正常红细胞，核612个，常排列不规则，疟色素常散在。 5. 雌雄配子体小于正常红细胞，色素呈深褐色； 6. 常可查见各阶段的疟原虫。,血片镜检,疟原虫的厚薄血膜都必须在油镜下观察，目镜以5或6为宜，过高透光性差，且视野过大影响视力集中。一般以镜检厚血膜为主，薄血膜的检出率比厚血膜低得多，故只可作虫种鉴定及形态识别之用。看片次序一般从左到右，从上到下，最少要检查100个视野（5分钟） 。,寄生的红细胞 经染色后，因细胞内血红蛋白溶解，轮廓消失，但有时尚留下残骸的“影子”或点彩。 厚血膜由于用血量多，血膜小，细胞重迭，干燥缓慢，各期疟原虫的体积都略为缩小，其中只有大、小滋养体的形态有较大改变，而裂殖体和配子体的形态则无明显变化。小滋养体 胞浆呈环状或向核的一侧或两侧收缩，使环的中间断裂，或围绕核。间日疟原虫的环较大，常呈分号“；”和感叹号“！”状；而恶性疟原虫的环纤细，常呈冒号“：”、飞鸟“.”、V状和断环状。,疟原虫厚血膜镜检的主要形态变异：,厚血膜中四种人体疟原虫从主要鉴别要点,混合感染的鉴别,1、容易鉴别的混合感染1）同一血膜中发现间日疟各期原虫和恶性疟雌雄配子体。2）同一血膜中发现大量纤细的恶性疟环状体，并混有少量间日疟原虫。2、不易鉴别的混合感染1）间日疟各期原虫和粗环的恶性疟环状体。2）仅有间日疟和恶性疟的环状体。,厚血膜镜检出现误差和异常原因分类,1视野模糊不清 1.1镜油用量不足,沾污灰尘或含有气泡； 1.2油镜头破损,镜油或有霉班、灰尘； 1.3显微镜用光不足,包括反光镜、光圈、聚 光器未达到油镜使用的最佳限度； 1.4载波片不洁，毛玻璃样或有霉班； 1.5血片染色过度或血膜过厚,使背景过深造成的透光性差。,厚血膜镜检出现误差和异常原因分类,2 血膜脱落受损 2.1玻片有油污,未洗净或使用中被污染；2.2血膜涂制过厚，厚薄不均或出现冷凝集；2.3染色操作不当，包括操作时碰撞划破血膜、血膜未干透染色、直接对准厚血膜冲洗或随后用力甩干；2.4血膜被蝇虫舔食或被异物粘贴。,厚血膜镜检出现误差和异常原因分类,3 杂质偏多 3.1 采血操作不当，包括皮肤清洁不够或刮取血滴的力度过大，使皮肤污屑进入血样；3.2 血膜受污染，包括玻片不洁，血滴反复涂抹制片或血片存放场所灰尘多；3.3 染色的影响，包括稀释用水不洁、原液沉渣、杂质过多，或冲片时先弃染液使表层甘油膜沾附在厚血膜上。3.4 镜油不洁。,厚血膜镜检出现误差和异常原因分类,4 色度不佳4.1 未着色 包括血片受热、久放，误沾甲醇而使厚血膜固定不脱色、失效，血膜太厚或未干透染色。4.2 偏浅 原液存放过久或保存、使用不当出现沉淀，使浓度降低；原液和稀释液配制浓度不当，稀释好的染液不是现配现染，滴加量不够或流失；染色时间不足或未去除气泡，稀释用水硬度过高或不洁，载玻片有霉班或着色。4.3 偏深 染色液浓度高、染色时间过长。4.4 偏酸或偏减 主要是稀释用水或原液的pH不合要求所致。有时冲洗的pH 不当也有影响。,厚血膜镜检出现误差和异常原因分类,5 假象干扰5.1 血细胞 如网状红细胞、血小扳、着色不好的白细胞和粒细胞破损分离的单个核叶。5.2 体外细菌和原虫 如水生原虫、孤立的球菌、花粉孢子。5.3 杂质。包括制作全过程中沾污的并被染成红蓝色的与疟原虫成份相似的各种物质以及染液的沉渣。,厚血膜镜检出现误差和异常原因分类,6 形态失常 6.1疟原虫成份丢失 特别是小配子体胞浆。6.2成份增加 如在多虫感染；多核以及两虫或多虫重叠时疟原虫形态构造会有异于正常。6.3 色泽形态改变 主要是小配子体出现紫色的胞浆，恶性疟变成圆形的配子体和粗大的环状体。6.4 药物影响 如服用乙胺嘧啶后因抑制晚期滋养体细胞核的分裂而使核发生浑浊肿胀，状如小配子体的核。服氯喹后大滋养体胞浆出现发育停滞，失去阿米巴样形态，并发生粹解，疟色素颗粒粗大并相对集中等。,疟原虫镜检操作要点与注意事项,1 载玻片必须清洁无尘、无油污、霉班和色班，洗净后要妥善存放。 2 采血部位的皮肤必须清洁、无脂屑、污垢，刺血深度要适中，不宜过浅，以免多次挤血将皮肤上污物带入血样。推片每用过一次后都必须将残留的血迹擦净。 3 血片制作场所要保持清洁，以免尘埃沾污血膜，制作和存放过程要防止苍蝇、蟑螂、老鼠等舔食血膜，厚血膜干燥后方可收藏，以防互相粘贴或沾粘他物，造成血膜破损。存放时要防日晒与高温，以免血红蛋白固定，影响染色。4 厚血膜的厚度要适中，可将血膜覆盖报刊上，以清晰看见下面铅字为宜，如果过厚可立即用玻片一角沾取掉部分血样。过厚的血膜着色差，又因血红蛋不易彻底溶解而使其镜下的背景过深。,疟原虫镜检操作要点与注意事项,5 染色的稀释用水必须纯净无杂质，硬度不能过大，否则影响着色度。PH以7.07.2最佳，偏酸时细胞着色差，甚至不着色；ph过高胞浆会呈深蓝色而使内部结构和疟色素不清晰。对偏碱的血片可待干后浸于生理盐水中数分钟来校正，偏酸血片可置碱溶液中浸泡，放置时间久的蒸溜水往往会偏酸。冲片用水亦需要用清洁的中性水，冲洗时间不宜过长。6 染色须在厚血膜干透后进行，血片不宜久放，应尽量在当天染色，一般不超过48小时，尤其是在夏季高温时，厚血膜若过厚或放置较久，染色前应先行溶血。7 配制吉氏染色原液时要充分研磨，最好经过滤再使用。分发基层宜用小的磨口棕色瓶灌装，密封存放。日常使用另装入棕色磨口滴瓶，其滴管不可触及稀释用水。滴稀释液的滴管亦不能接触原液，以免使原液沉淀变质。8 稀释染液必须临用时配制，现配现染，一次用完，用不完的应倒掉，不可留着再用，更不能配一次用一天或使用多次。因吉氏染粉为醇溶性，遇水容易产生沉淀，导致染色效果不理想。,疟原虫镜检操作要点与注意事项,9 切实掌握染液浓度与染色时间成反比的规律，浓度越高染色所需时间越短；反之则越长。用浓度低、时间较长的染色方法，着色细致、结构清晰；用浓度高、时间较短的方法，着色粗糙、间日疟的薛氏小点明显。从全局来看，稍深的血膜比稍浅好看，偏碱的比偏酸要好，厚血膜偏薄的比偏厚的着色要好，染色时间稍长的比稍短好，对染色太深的血片可厚血膜上滴加少量甲醇然后迅速置水中冲洗脱色。注意此法可将薛氏小点去掉，偏浅的可复染。一般门诊上染色宜用1：20（5）浓度染20分钟或稍长些，其优点是着色力度较好，结构比较清晰，易染出薛氏点，在血膜较薄的边缘部分还可见到红细胞阴影。数量较多的批量染色可用23浓度染4030分钟。对每批原液要试染，以取得最佳的浓度与时间比。10 要熟悉显微镜结