无名高热的理论及其解决思路

无名高热的理论及其解决思路,近年来猪越来越难养、病越来越多！,根本原因何在？,猪群的健康状态下降,两大免疫抑制性疾病,猪繁殖与呼吸综合征(蓝耳病PRRS),猪圆环病毒2型感染(PCV-2),猪蓝耳病(PRRS),1.PRRS的危害,2.目前的流行特点,3.关于病毒的血清型,4.如何诊断？,5.疫苗使用存在的问题？,6.PRRSV 致病机制,7.利用猪只免疫及攻毒试验测试 PRRS免疫营养剂的功效性,蓝耳病(PRRSV disease),呼吸与繁殖综合症Porcine respiratory disease complex (PRDC),母猪流产及死亡症状Sow Abortion and Mortality Syndrome (SAMs),仔猪多系统综合衰竭消耗症Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome (PMWS),蓝耳病毒的感染,哺乳期,怀孕期,保育期,育肥期,症状：发烧、嗜睡、厌食、无乳、发情不顺,链球菌、TGE圆环病毒,圆环病毒、猪瘟沙氏杆菌、巴氏杆菌副嗜血杆菌,圆环病毒、附红细胞体放线杆菌AP,除此而外，公猪也会感染PRRSV,已感染PRRS的精虫,未感染PRRS的精虫,PRRSV与猪瘟免疫,感染PRRSV后对猪瘟抗体有很大的免疫抑制性,泰国病理学家 Kesdangsakonwuti 等人(2005),也就是说,即使您打了猪瘟疫苗,因为PRRSV的侵袭,使猪瘟疫苗失去了保护力,用猪瘟病毒攻毒时,照样引起感染猪瘟而死亡!,结论：,PRRSV潜在的危害很大猪群的生产性能下降猪群免疫力下降呼吸道疾病发病率上升继发感染增多母猪发情障碍、滞后产现象增多,PRRS病毒的血清型,国际上分美洲型和欧洲型我国分离的毒株都属美洲型我国猪群中还未发现欧洲型毒株,如何诊断?,明确猪场各阶段猪群的蓝耳病病毒感染率（用ELISA试剂盒进行抗体监测）监测感染动态情况（每季度1次），是否升高或降低出现繁殖障碍问题，应同时检测（胎儿体内、母猪血清中）病毒和抗体，单纯的抗体阳性并不能说明就是由蓝耳病造成的繁殖障碍,当一个猪场符合以下3点时应诊断患PRRS,1.猪群表现典型的PRRS症状及有PRRS患病史,2.猪群出现PRRS病变,3.患病猪中找到PRRS病毒,如果仔猪出现典型的临床症状、病变、血液中有PRRS抗体时，又知该猪群没有注射PRRS疫苗的则可诊断患有PRRS。,疫苗使用存在的问题：,1.使用活疫苗造成蓝耳病暴发已是不争的事 实（国内外均有实例）,2.活疫苗的返强、变异、重组可产生新病毒,3.免疫接种猪造成疫苗毒的持续性感染和长 期带毒；引起免疫猪场和猪群处于长期感 染状态,PRRSV 致病机制,猪的肺泡巨噬细胞上的Heparinlike接受器与PRRS病毒母体蛋白的接合情况(Involvement of the Matrix Protein in Attachment of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus to a Heparinlike Receptor on Porcine Alveolar Macrophages),pSn = receptor for PRRSV,PRRSV,Sialo-adhesin protein(涎黏着蛋白),Heparinlike Receptor,Nucleus核,ORF5 ORF6,MhcII,MhcI,MhcI,MhcII,CD8+cell,CD4+cell,NT domain结合部位,Host cells, Antigen present cells,利用猪只免疫及攻毒试验测试 PRRS免疫营养剂的功效性,(1)猪只免疫及攻毒试验,组别,1st immunized 2nd 3rd challenge,高剂量低剂量空白组,2128 days,Half-dose,Half-dose,Full-dose,Immunization and challenge in pigs model,Group coating antigen IgM-ELISA titres (S/BK) IFA titres NT titres H dose group 310 1030 1632 1632 L dose group 3 10 16 832 BK groupNegative CTL 1 1 8 8,(2)各试验组免疫三次后2周(9周龄)之血清免疫力价分析,(3)攻毒后(14-DPC)临床症状及健康情形：,攻毒后之DPI-14之临床症状(P8),疫苗组，于攻毒后一至二天内都有一至二头发生40.5以上发烧反应，但是二周后大都回复原来之40.3以下，攻毒后(H)及(L)显然大多较活泼健康、不再咳嗽、皮毛渐渐恢复亮丽，而(BK)对照组之猪只咳嗽现象比较频繁。以下表为攻毒后114-DPC观察之将康状态及患病情形,健康状况与临床症状观察指标表,每只动物每日需作10项观察指标，每个观察项目正常为1点，每日总计正常为10点，最严重的临床症状为30点，死亡40点。,攻毒后之14-DPC依观察项目计分之临床症状,*：观察10项之临床症状，每一组6头猪分别给分后取其平均值后分别填入表格，T为10项临床症状之总分。,攻毒后之21-DPC依观察项目计分之临床症状,(4)试验猪只在免疫及攻毒后重量变化情形,攻毒,*:The blood samples of tested pigs can be detected PRRSV infected by RT-PCR running,(5)猪只攻毒试验后病毒血症检出情况,组别 疫苗名称 头数 2-DPC 7-DPC* 14-DPC 21-DPC,H 6 0 2 1 0,L 6 0 2 2 0,BK Placebo 6 1 3 6 3,(6)各试验组攻毒后21DPC解剖后肺脏之病变严重性分析,猪只攻毒后，第21天起进行试验猪只之屠体解剖，观察肺部之肉眼病变结果可知，空白组之6头猪都有明显的间质性肺炎，坏死病变症状之病变指数Lesion score约在15-40，高剂量组有一肺脏病变严重，可能有二次感染发生，其指数约在25左右，其他5头的指数都在15以下。,各组的6头猪只其肺脏病变指数,(7)各试验组攻毒后21DPC解剖后分析肺脏组织切片病理分析间质性肺炎之严重性,结论：,由猪只免疫及攻毒试验模式可知：,高剂量及低剂量的PRRS免疫营养剂经前二次半剂量及第三次全量免疫仔猪后，该免疫的猪只对于PRRSV（5 T-type1;TCID50 = 104)攻毒皆具有相当强的保护力！,PRRSV 感染途径与免疫营养增强剂的开发策略,多重感染路径：Step1. 上呼吸道及下呼吸道上皮细胞感染路径Step2. 呼吸道周边组织的monocyte（单核球）, macrophage（巨噬细胞）感染路径Step3. Antibody dependent enhancement (ADE) of phagocytosis,可以诱发产生较高的中和力价。减低PRRS vaccine 抗原过敏性问题。可以有效诱发T细胞免疫机制。 （1）诱发中和力价之液体或粘膜免疫反应机制 （2）诱发细胞免疫机制清除被感染的细胞,PRRSV 感染途径与免疫营养增强剂的开发策略,千呼万唤始出来,免疫营养增强剂制作原理,Procedure of V.S.P:,Effective DNA,免疫营养增强剂的特点:,1.明确、稳定、纯粹的抗原。,2.免疫反应高度的特意性，只有针对有效抗原产生 抗体，对无关抗原没有反应。,3.免疫应答可以精确检测出来。,4.采用的电脑合成技术很简便。,5.有高度的精确性（高抗体并非一定是有效的抗 体，蛋白抗体才是有效的高抗体）。,6.采用生化技术(非疫苗技术)，不会产生没必要的抗 原及抗体。,7.高度的重复性，每批产品成份一样，稳定性高。,强疫肽的使用方法（肌肉注射）：,后备母猪：进场（留种）-2 ml（一剂）,经产母猪：生产前6周 -