对氧磷酶1参与香猪高脂模型脂质代谢研究.doc

对氧磷酶1参与香猪高脂模型脂质代谢研究徐霖 李升，冉雪琴，王嘉福，（贵州大学动物科学学院，贵阳 ；贵阳学院生物与环境工程系，贵阳 ；贵州大学教育部绿色农药与农业生物工程重点实验室，贵阳 ）摘要：猪动脉粥样硬化形成过程和解剖特征与人极为相似，为研究动脉粥样硬化发病机理，建立了贵州小香猪高脂模型，并设了对照组。通过饲养试验，测定猪动脉粥样硬化形成过程中与脂质代谢密切相关的种关键因子，即血清总胆固醇（ ， ）、低密度脂蛋白（ ， ）、高密度脂蛋白（h ，）、超氧化物歧化酶 （ ， ） 及对氧磷酶 （， ）活性，研究pon1与脂质代谢之间的关系。研究结果显示，pon1在香猪高脂模型中活性降低。关键词：动脉粥样硬化（，as）；对氧磷酶1（）；脂质代谢；香猪；高脂模型 -1 p ， ， ， ，（ ， ， ， ； ， ， ， ； ， ， ， ， ）： ， closely （ ），（ ）， （h ）， （ d） （p） a ： a； -1； ； ； 近年来，越来越多的基础和临床研究进一步证实动脉粥样硬化（，as）是一种累及血管、代谢和免疫等多系统的炎症性疾病，但其确切病因及发病机理目前尚未完全阐明。对氧磷酶（，）因水解神经毒杀虫剂对氧磷（）而命名，血清是肝脏分泌的一种能够水解多种有机磷化合物的钙离子依赖性酯酶， 具有重要的抗氧化作用。在不同动物中有关对氧磷酶研究较多，但目前在大型牲畜中研究动脉粥样硬化发病机制还存在不少空白。猪动脉粥样硬化形成过程和解剖特征与人极为相似，本试验通过建立贵州小香猪动脉粥样硬化模型，测定与脂质代谢密切相关的4种关键因子：血清总胆固醇（ ， ）、低密度脂蛋白（ ， ）、高密度脂蛋白（h ，）、超氧化物歧化酶 （ ，）及对氧磷酶 （，）的活性，研究对氧磷酶与脂质代谢之间的关系，为研究动脉粥样硬化发病机制提供大型牲畜的模型数据参考。 材料与方法 材料试验用小香猪购自贵州榕江（头）。采血方法：上腔静脉窦采血， /头，血清测酶活性及各项指标。 方法 动脉粥样硬化模型建立 头小香猪分为对照组和试验组，每组头。对照组只喂给基础饲料，试验组于基础饲料中拌入蛋黄粉（或者猪油）、胆固醇。基础饲料平均按 （）分次给予。 一般临床观察 每日观察小香猪的一般临床表现，每月称 次体重。 、测定 分别用测定试剂盒、测定试剂盒、测定试剂盒、测定试剂盒（以上试剂盒均为南京建成生物工程有限公司生产）进行测定。 活性的测定 血清活性的测定采用连续测定方法，以对氧磷为底物，在 甘氨酸缓冲液（ ， ， ， ）中加入 的血清，血清中的可以催化对氧磷水解产生有色物质对硝基酚，通过紫外分光光度计在 波长处每隔 共 连续测定吸光度值，算出平均吸光度变化值，根据公式 1（）（ ）求出单位体积血清1活性。式中为每分钟吸光度变化值，为反应总体积（），为样本体积（），为比色杯光径（ ），是将换算成的系数，为对硝基酚在 波长处的摩尔消光系数 （）。 统计分析 测得数据用 软件处理后用（）表示，采用检验法检验组间及组内差异。 结果与分析 体重测定结果通过连续周的饲喂，对照组和高脂组体重均有增加（图）。对照组体重由（） 增加到（） ，增加，而高脂组体重从（） 增加到（） ，增重，增重程度显著高于对照组（）。 血脂水平变化情况本试验对对照组和高脂组的血清总胆固醇（）、高密度脂蛋白（）、低密度脂蛋白（）分别进行了监测（图），相对于对照组，高脂组的血清、和含量均在周之前增长迅速，与对照组相比差异显著（），在周时增幅均达到最大值，而对照组在整个试验过程中各指标变化无显著差异。高脂组的血清含量在周时为（） ，相对于对照组（）增加了，差异极显著（）；而高脂组的和含量在周时分别为（） 和（） ，分别为同时期对照组的倍和倍，统计学分析差异显著（）。在周后，高脂组中的、含量有所降低，但在周时，和含量仍明显高于对照组（），含量略高于对照组。根据以上个指标的变化，说明高脂饲料饲喂香猪周后可以显著增加其血脂水平。 血液中氧化水平相关指标测定为了进一步评价高脂饲料对猪体氧化水平的影响，本试验选取测定酶活性和酶活性来判断（图）。从图可以看出，相对于对照组，高脂组的酶活性和酶活性均明显降低，在周后下降趋势维持在一个稳定的状态。相对于对照组，高脂组中酶活性最低值出现在周，为（） ，仅为同时期对照组的（）；而酶活性最低值出现在周，为（） ，为同时期对照组的（）。香猪血液中的和酶活性的降低说明高脂饲料增加了猪体的氧化水平。 小结与讨论动脉粥样硬化（，）发病机理十分复杂，目前尚未完全阐明。越来越多的证据表明1在脂蛋白代谢中起着重要作用，并进而影响冠心病和动脉粥样硬化的发生。人类1在血液中结合而紧密固定在高密度脂蛋白颗粒上发挥抗氧化作用，抑制低密度脂蛋白氧化修饰以及水解溶血磷脂等具有生物活性的脂质过氧化物，是重要的抗氧化酶。动物试验表明剔除基因的实验鼠经过高脂喂食后，其高密度脂蛋白和低密度脂蛋白较对照鼠更易于受到氧化攻击，而过度表达的鼠类动脉粥样斑块明显减少。又据报道，在糖尿病和心血管系统等疾病中活性明显下降，也有力地支持1的抗氧化作用。可见在正常生理情况下，人体内存在许多抗氧化剂和抗氧化酶能够有效及时地清除氧自由基而维持动态平衡，但其分子机制有待进一步研究。猪动脉粥样硬化形成过程和解剖特征与人极为相似，可作为研究的理想模型。本试验中建立的贵州小香猪模型随着时间的推移，其体重、血清、均明显升高，说明高脂食品饲喂加速了小香猪动脉粥样硬化进程。在此过程中，高脂饲喂使香猪体内脂质过氧化物积聚，引发氧化应激反应，抑制、酶活性。另一方面，试验中观察到周为一分水岭，在周后，血清有小幅降低并维持在一个相对稳定的水平，、酶活性也不再下降，维持在一个相对稳定的状态，这是一种生理适应。因此，和 活性下降加速自由基产生，引发细胞内大分子物质核酸、蛋白质和脂肪酸发生一系列氧化损伤，可能是动脉粥样硬化的主要发病机制。本试验建立了贵州小香猪动脉粥样硬化模型，为研究作用与脂质代谢之间的关系提出了新的研究方法和思路。参考文献：