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文档简介

5 2多聚酶链式反应扩增DNA片段 课程标准尝试PCR技术的基本操作和应用 课标解读1 理解PCR技术的基本原理 2 知道PCR技术的基本操作过程 3 讨论PCR技术的应用 打开DNA双链 提供DNA复制的模板 合成子链的原料 催化合成DNA子链 使DNA聚合酶能够从引物的3 端开始连接脱氧核苷酸 细胞内DNA复制条件 DNA复制方向 DNA热变性 PCR反应过程 PCR反应过程 PCR实验操作 1 实验用具 1 PCR仪 该仪器能自动调控 实现DNA的扩增 如果没有PCR仪 可用3个代替 操作时按程序来回转移PCR反应的微量离心管 2 微量离心管 总容积为 实际上是进行的场所 3 微量移液器 用于 温度 恒温水浴锅 0 5mL 多聚酶链式反应 转移PCR配方中的液体 将微量离心管放在离心机上 离心约10s 目的是使反应液集中在离心管底部 3 DNA含量的测定 稀释 50倍 对照调零 蒸馏水作对照 测定 取DNA稀释液100uL 计算 DNA含量 g 50 x 260nm的读数 x稀释倍数 50 OD260 1相当于50 g ml双链DNA 概念 PCR全称为 是一项在生物 复制 的核酸合成技术 条件 原理 方式 以 方式扩增 即 n为扩增循环的次数 结果 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制 已知基因的核苷酸序列 前提 四种脱氧核苷酸 一对引物 耐热的DNA聚合酶 Taq酶 指数 2n 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 PCR总结 PCR技术扩增与DNA复制的比较 DNA双链复制 四种脱氧核苷酸 模板 能量 酶 引物 高温下变性解旋 解旋酶 体外 细胞核内 热稳定的DNA聚合酶 细胞内的DNA聚合酶 大量的DNA片段 形成整个DNA分子 1 PCR技术是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法 有关叙述不正确的是 A PCR技术是在实验室中以少量DNA制备大量DNA的技术B 反应中新合成的DNA又可以作为下一轮反应的模板C PCR技术中以核糖核苷酸为原料 以指数方式扩增D 应用PCR技术与探针杂交技术可以检测基因突变 C 2 2011江苏 请回答有关问题 1 利用PCR技术扩增目的基因 其原理与细胞内DNA复制类似 如下图所示 图中引物为单链DNA片段 它是子链合成延伸的基础 从理论上推测 第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占的比例为 在第 轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段 15 16 三 2 设计引物是PCR技术关键步骤之一 某同学设计的两组引物 只标注了部分碱基序列 都不合理 如下图 请分别说明理由 引物 和引物 局部发生碱基互补配对而失效 引物 自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效 3 PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶
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