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人类姐妹染色单体色差染色标本的制备和观察 姐妹染色单体交换 sisterchromatidexchange SCE 在机体内外有害因素的作用下 染色体的两条姐妹染色单体的片段会发生等位点交换 称为姐妹染色单体交换 由于SCE频率是DNA损伤的灵敏指标 而且观察方便 故该技术已成为检测致突变物对人染色体诱变效应大小的常用手段 原理 当细胞在加有Brdu 5 溴脱氧尿核苷 培养基中进行分裂时 Brdu能取代胸腺嘧啶核苷酸掺入到新复制的DNA核苷酸链中 经过两个生长周期后 这种细胞的同一染色体的两条姐妹染色单体一条是由单股含Brdu的DNA链所组成 另一条是由双股都含有Brdu的DNA链所组成 而这种双股都含有Brdu的DNA链具有螺旋化程度较低的特性 在热盐溶液中受光的照射后更易于水解 从而影响了与Giemsa染料的亲和力 因此染成较浅的颜色 而单股含Brdu的DNA链所组成的染色单体则着色深 这样根据两条姐妹染色单体所显示的深浅不同的颜色 可以区别中期染色体的姐妹染色单体 即在普通显微镜下可见到两条姐妹染色单体显出深浅不同的颜色 实验准备 器械 恒温水浴箱 15W 24寸 紫外灯 染色缸 刻度吸管 滴头试剂 500 g mlBrdu溶液 5mgBrdu溶于10ml生理盐水 2 SSC溶液 实验方法 每3ml培养液中加入Brdu60微升 10 g ml 避光培养48小时 培养结束前4小时加秋水仙素 其后步骤同传代培养细胞染色体标本的制备 常规方法制片 37 烤片1天以上 标本片放在2 SSC溶液中 并置于60 水浴 紫外灯照射30分钟 灯与玻片的距离5cm 1 10Giemsa染液染色8分钟 蒸馏水冲洗后干燥 镜检 分裂周期分析 1 染色体的两个单体均为深染的细胞记为第一次分裂周期的细胞 2 染色体的两个单体一深一浅的细胞记为第二次分裂周期的细胞 3 染色体的两个单体染色都为浅色的细胞为第三次分裂周期的细胞 SCE的计数 1 凡是在染色单体端部出现互换记为1
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