如何通过实验室技术鉴定临床有意义

如何通过实验室技术 鉴定临床有意义的血型抗体， 确保安全输血,莫秋红南宁输血医学研究所,南宁输血医学研究,南宁输血医学研究,南宁输血医学研究,临床有意义的抗体,临床有意义的抗体：使红细胞寿命缩短，短时间内大量红细胞破坏，引起病人发生不良反应，如溶血性输血反应、新生儿溶血病。在37中和间接抗球蛋白试验（IAT）中有反应。,南宁输血医学研究,临床有意义的抗体,自身抗体温自身抗体型、冷自身抗体型同种抗体ABO、Rh等抗体,南宁输血医学研究,临床有意义的血型抗体,英国血液学标准委员会British Committee for Standards in Haematology BCSH Secretary, British Society for Haematology,Milkins .et al,2012,Guidelines for pre-transfusion compatibility procedures in blood transfusion laboratories,南宁输血医学研究,临床有意义的血型抗体,通常认为在25以下不反应的抗体，是没有临床意义的抗体，如抗-P1是常见冷抗体, 但也有极少抗-P1在37反应,并引起严重的急性或迟发性输血反应。抗体没有临床意义是相对的。,南宁输血医学研究,易产生同种抗体的病人,反复输血的病人，如地中海贫血，再生障碍性贫血，阵发性夜间血红蛋白尿（PNH）,骨髓增生异常综合症（MDS）等。具有妊娠史的病人。,南宁输血医学研究,抗体筛查和抗体鉴定,目的原理试剂和材料实验方法结果的解释抗原鉴定,南宁输血医学研究,抗体筛查和抗体鉴定,目的发现有临床意义的血型抗体，为患者提供相应抗原阴性的血液，减少或避免同种抗体引起的输血反应。,南宁输血医学研究,抗体筛查和抗体鉴定,原理运用已知血型抗原的O型红细胞, 检测病人血清中的未知抗体。,南宁输血医学研究,试剂和材料,筛选细胞 通常由2或3个人份O型红细胞组成，要求DAT阴性，单人份/瓶，2-5%的红细胞悬，配有反应格局表。 谱细胞（Panel red cell) 是由不少于8人份O型红细胞配套组成的红细胞试剂，要求DAT阴性，单人份/瓶，2-5%的红细胞悬液,配有反应格局表。,南宁输血医学研究,试剂和材料,筛选细胞和谱细胞包含抗原要求：1, 8-16种不同常见抗原：D,C,c,E,e,K,k,Fya,Fyb,Jka,Jkb,M,N,S,s,P1,Lea,Leb2,至少含有一个纯合子表达的抗原：Fya,Fyb, Jka,Jkb,S,s,3, Dia,Dib,南宁输血医学研究,试剂和材料,盐水、白蛋白、低离子介质（LISS）、酶、聚乙烯乙二醇（PEG） 、聚凝胺（Polybrene）、抗球蛋白等试剂和微柱凝胶卡等，可按抗体的血清学特征和实验的具体条件选择。,南宁输血医学研究,实验方法,试管技术（盐水、白蛋白、Liss、酶、和PEG、抗球蛋白、凝聚胺）微柱凝胶技术Solid-phase systems(SP) 固相凝集技术 Erythroctye-magnetized technology(EMT) 红细胞磁化技术,南宁输血医学研究,实验方法的比较,微柱凝胶技术，灵敏度高，优于试管的IAT ，不用洗涤细胞，操作简单，可实现自动化；但是对于假阳性和非临床意义的抗体检测率也高，并且价格昂贵。试管IAT技术的特异性最好( Weisbach et al.,2006)，并且价格便宜；缺点是操作繁琐，耗时长。,南宁输血医学研究,微柱凝胶技术,南宁输血医学研究,实验方法的比较,58 个AABB免疫血液学参比实验室常用的主要的方法中，49个实验室用试管法，7个用凝胶法，2个用固相法。对于参比实验室，试管凝集法是检测临床有意义的抗体首选的方法。利用多种实验技术，相互补充。 （Haywood.et al. 2011.Determination of optimal method for antibody identificaton in a reference laboratory）,南宁输血医学研究,结果的解释,阴性排除法,通过查看无反应的红细胞的抗原谱，可排除一些特异性抗体，同时可以估计有可能存在的抗体,以防有临床意义的抗体漏检，因为一个阳性反应格局可能是两种或多种抗体共同存在的格局。,南宁输血医学研究,抗原鉴定,病人血清中检测出一种抗体或多种抗体，红细胞上应该不携带相应的抗原。如病人血清中含有抗-M，红细胞上应不带有M抗原。 用血型结果，可排除一些抗体,并核对抗体鉴定的结果。,南宁输血医学研究,流程,抗体筛查,抗体筛查,抗体鉴定,抗原鉴定,抗体特异性,阳性,阴性排除,明确,临床意义,有,相应抗原阴性的血液,判断,南宁输血医学研究,案例1,病人血型：CCDEe 献血者血型ccDEE,或ccDEe,南宁输血医学研究,抗体筛查的假阴性,假阴性：交叉配血不合或发生溶血性输血反应，抗体筛查的结果为阴性。,南宁输血医学研究,假阴性原因,1，人员操作过程、记录错误、标本错误；2 ，低频抗原，红细胞不含有某些抗原；3，陈旧，抗原性减弱；4，弱抗体，如抗-Jka， (Jka+Jkb-)细胞w+，(Jka+Jkb+)细胞，无反应；5，补体抗体，需要新鲜的血清；6，实验方法的灵感度不够高。,南宁输血医学研究,复杂的反应格局（1）,1,所有的细胞都凝集，强弱一致原因:自身免疫性抗体；针对高频抗原的抗体或抗-HI；实验方法的特异性低（如）LISS、PEG、酶的非特异性抗体。,南宁输血医学研究,解决方法（1）,1,所有的细胞都凝集，强弱一致方法:自身对照；自身和DAT阴性，可能是高频抗原的抗体，如抗-HI，常见于非O型的病人，排除方法：血浆与病人血型相同的细胞不反应或弱反应（A型、B型反定型细胞）；非LISS、 PEG、酶的IAT实验方法。,南宁输血医学研究,复杂的反应格局（2）,2,反应格局不符合任何一个单一抗体的格局，凝集强弱不一原因1，2种或以上的混合抗体；2，抗原强弱不一，纯合子和杂合子；3， 细胞过于陈旧，抗原减弱；4， 实验方法的灵敏度不高。,南宁输血医学研究,解决方法（2）,2,反应格局不符合任何一个单一抗体的格局，强弱不一样方法1，选择某一抗体的抗原阴性，其他抗体的抗 原阳性的谱细胞来排除其他抗体；2，多个血型系统的抗原鉴定,排