杨燕军实验3离体蛙心灌流.ppt

生理学实验课程 杨燕军752253 666 OM yang712100 实验三 电刺激及化学因素对心脏活动的影响 实验三 电刺激及化学因素对心脏活动的影响 实验目的 实验原理 实验对象 蟾蜍器材和药品 实验步骤 1 制备离体蛙心 2 仪器连接 记录正常曲线期前收缩和代偿间歇 单刺激 1V 0 65 NaCl置换任氏液1 CaCl21 2滴3 乳酸1 2滴0 01 Adr1 2滴0 01 Ach1 2滴82 CaCl25 6滴 注意事项 观察项目 下次实验 膈神经放电 实验目的 3 观察Na K Ca2 Adr Ach对心脏活动的影响 理解内环境理化因素相对恒定对维持心脏正常活动的重要性 1 学习离体蛙心灌流方法 2 观察在心脏活动的不同时期给予刺激所引起的期前收缩和代偿间歇 实验原理 心肌具有4个特性 兴奋性 自律性 传导性和收缩性 有效不应期 收缩期 舒张早期 期前收缩 在正常节律性兴奋到达之前 在心脏舒张的中期后 给心脏一个额外有效刺激 可引起一个提前出现的收缩 Na K Ca2 Adr Ach对心脏活动的影响 实验原理 代偿间歇 当正常起搏点的兴奋到达心脏时 常常落在期前收缩的有效不应期中 因而不能引起心肌的兴奋与收缩 使期前收缩后出现一个较长时间的间歇期 心肌细胞动作电位 心肌收缩曲线 超常期 相对不应期 有效不应期 生物机能实验系统 RM6240 张力换能器1 刺激电极1 蛙类手术器械一套 铁支架1 双凹夹2 蛙心套管1 蛙心夹1 烧杯2 滴管2 实验器材 任氏液 0 65 NaCl 1 CaCl2 1 KCl 0 01 ch0 01 Adr2 CaCl2 药品 制备离体蛙心 1 捣毁脑和脊髓 暴露心脏 1 2 3 1 2 3 4 心室 动脉圆锥 左心房 右心房 左主动脉 右主动脉 右心房 左心房 心室 静脉窦 2 蛙心插管 1 2 3 4 仪器连接 1 2 3 4 描记正常蛙心收缩曲线曲线疏密 代表心跳频率 曲线的规律性 代表心室的节律性 曲线的顶点水平 代表心室收缩的程度 曲线的基线 代表心室舒张的程度 期前收缩和代偿间歇 吸出插管内全部任氏液 置换等量0 65 NaCl 观察心缩曲线变化 待效应明显后 吸出灌流液 用新鲜任氏液换洗3次 直至心缩曲线恢复正常 置换等量0 65 NaCl 灌流液中无Ca2 进入细胞内Ca2 胞浆内Ca2 心肌收缩力 心肌的兴奋 收缩耦联 加入1 2滴1 CaCl2于新换入的任氏液中 观察心缩曲线的变化 待出现效应后 用新鲜任氏液换洗3次至曲线恢复正常 细胞外Ca2 Ca2 内流 Ca2 与肌钙蛋白的结合 心肌收缩力 但舒张不完全 收缩基线上移 加1滴3 乳酸 细胞外H H 内流 H 和Ca2 离子竞争性结合肌钙蛋白的结合位点 抑制Ca2 离子与肌钙蛋白结合 心肌收缩力 心率 加入1 2滴0 01 Adr于任氏液中 待效应出现后 用任氏液换洗至曲线恢复正常 Adr与心肌受体 1 结合 心率 心肌收缩力 慢通道Ca2 通透性 4期自动去极速度 慢反应细胞 0期Ca2 内流 AP上升速度和幅度 房室交界兴奋传导 复极相K 外流 复极过程加速 平台期进入细胞内Ca2 房室交界慢反应细胞AP幅度 最大复极电位负值增加 离阈电位距离 加入1 2滴0 01 Ach于任氏液中 待效应出现后 用任氏液换洗至曲线恢复正常 Ach与M受体结合 抑制钙通道 Ca2 内流 膜对K 的通透性 AP2 3期缩短 Ca2 内流 心肌收缩力 心率 舒张期自动去极速度 兴奋传导速度减慢 加入5 6滴2 CaCl2于新换入的任氏液中 观察心缩曲线的变化 待出现效应后 用新鲜任氏液换洗3次至曲线恢复正常 细胞外Ca2 Ca2 内流 Ca2 与肌钙蛋白的结合 心肌收缩力 但舒张不完全 收缩基线上移 当细胞内Ca2 时 Ca2 与肌钙蛋白得不到解离 心肌持续收缩 停止于收缩状态 钙僵 注意事项 制备标本时 应按指导试探着插管 避免损伤心脏 包括静脉窦 每次换液时 插管内的液面均应保持恒定高度 本实验所用药品种类较多 吸任氏液的吸管 吸心插管内溶液的吸管和各种药物的吸管要分开 不可混淆 互相污染 以免影响结果 药物作用不明显时 可加量 随时滴加任氏液于心脏表面使之湿润 固定换能器时应稍向下倾斜 以免自心脏滴下的水流入换能器内造成短路 部分结果分析 0 65 NaCl 心跳减弱心肌收缩活动有Ca2 触发 心肌肌浆网不发达 因此其收缩强弱依赖于细胞外Ca2 浓度 灌流液中缺乏Ca2 心肌细胞内Ca2 大大减少 心肌兴奋 收缩藕联过程减弱 心肌收缩活动减弱 高K 任氏液 心跳明显减弱甚至停跳于舒张状态 部分结果分析 K 与Ca2 有竞争性拮抗作用 细胞外K 浓度增加可抑制细胞膜对Ca2 的转运 从而使进入胞内的Ca2 减少 心肌兴奋 收缩藕联过程减弱 心缩力降低甚至停于舒张状态 高Ca2 心缩加强 舒张不完全 甚至停于收缩状态 部分结果分析 心肌舒缩活动取决于胞内Ca2 浓度 当Ca2 升高到0 01mM 肌钙蛋白可结合足够Ca2 发生构型改变而触发心肌收缩 当胞内Ca2 浓度降到0 0001mM时则可解离发生心肌舒张 高Ca2 使肌钙蛋白与Ca2 不能解离而造成心肌持续收缩 部分结果分析 肾上腺素 心脏正性作用并且舒张完全 1 肾上腺素与心肌细胞膜 受体结合 使心肌细胞膜上腺苷酸环化酶活化作用于ATP产生cAMP cAMP的作用 1 激活Ca2 内流 2 肌浆网释放Ca2 因此心肌收缩加强 2 肾上腺素使Ca2 泵活动增强 肌浆网摄取Ca2 向细胞外转运 胞内Ca2 减少 心肌舒张过程加快 舒张完全 乙酰胆碱 心缩减弱 心率减慢 兴奋传导速度变慢 部分结果分析 乙酰胆碱与心肌M受体结