杂环类

杂环类药物的分析,杂环含有非碳原子的环状有机物，常见有氧、氮和硫等原子。杂环类药物的分类是根据杂原子的种类（氧氮硫）和数目、环的元数（常见的五元环、六元环和七元环等）和环数（常见1、2和3环等）而进行。教材中介绍了吡啶类、苯并噻嗪类和苯并二氮杂类三种药物的结构、鉴别和含量测定方法。,共性： (1)杂环类药物是合成药物中所占比例最多的 一大类药物。 (2)多为五元环或六元环，单环或并合环. (3)杂环结构较稳定，不易开环，其性质受杂原子种类、数目、位置影响。 (4)杂环上取代基性质较活泼，常用于分析。 (5)含氮杂环，其碱性的强弱往往用于分析。,吡啶类,喹啉类,托烷类,苯并噻嗪类,苯并二氮杂类,杂环类药物,有机酸酯,本章重点介绍吡啶类（以异烟肼为主）苯并噻嗪类（以氯丙嗪为主）苯并二氮杂类（以氯氮、地西泮为主）,异烟肼,异烟肼与其它抗结核药联合，适用于各型结核病的治疗异烟肼单用适用于各型结核病的预防,开环反应,酰肼基结构具有较强的还原性，可与不同的氧化剂反应,可以和含有羰基的化合物发生缩合反应,白色结晶粉末易溶于水,尼克刹米,用于中枢性呼吸抑制及循环衰竭，对苯巴比妥类药的解救效力较好。可用于阿片类药物如吗啡中毒，严重传染病所致的呼吸衰竭的解救,酰胺基碱性可水解，生成NH(C2H5)2,用于鉴别和凯氏定氮,无色或淡黄色的澄明油状液体与水、乙醇、氯仿或乙醚混合,2.理化性质 1. 弱碱性 吡啶环上的氮原子有叔胺的性质，为一元碱性氮原子，吡啶环的pKb 值为8.8（水中）。尼可刹米除了吡啶环上氮外，位上被酰氨基取代。酰氨基化学性质不甚活泼，但遇碱水解后释放出具有碱性的二乙胺，故可以进行鉴别。吡啶环上的氮原子可以和沉淀试剂如重金属离子发生沉淀反应。,2.理化性质,2吡啶环的特性 吡啶环在一定条件下可发生开环反应。可用于吡啶类药物的鉴别 3还原性 异烟肼的吡啶环位上被具有还原性 酰肼取代，可以和氨制硝酸银等氧化试剂反应，还可与含羰基的化合物发生缩合反应。,二、鉴别试验,（一）吡啶环的开环反应 本反应适用于吡啶环的、位无取代基的异 烟肼和尼可刹米。,1. 戊烯二醛反应（kning 反应）,尼可刹米 + 溴化氰,H2O,戊烯二醛衍生物,苯胺,黄色,溴化氰与芳伯胺作用于吡啶环，使氮转为五价。环水解成戊烯二醛，与芳伯胺作用成有色的戊烯二醛衍生物。颜色随所用的芳胺的不同而有所差异。苯胺与联苯胺。,原理：,尼可刹米 ChP（2010） 【鉴别】取本品 1 滴，加水 50 ml，摇匀，分取 2 ml，加溴化氰试液 2 ml与 2.5% 苯胺溶液 3 ml，摇匀，溶液渐显黄色。,异烟肼：,异烟肼：需先氧化成异烟酸用于异烟肼鉴别时，应先用高锰酸钾或溴水氧化为异烟酸，再与溴化氰作用，然后再与芳伯胺缩合形成有色的戊烯二醛衍生物。,2二硝基氯苯反应（Vongerichten反应）,吡啶及其衍生物+2,4-二硝基氯苯,紫红色,无水条件,或混合,至熔融,操作方法：在无水的条件下，将吡啶及其某些衍生物与2，4二硝基氯苯混合共热或使其热至熔融，冷却后，加醇制氢氧化钾溶液将残渣溶解，溶液显紫红色。条件:本法鉴别异烟肼、尼可刹米,需做适当的处理,即将酰肼基氧化成羧基或将酰胺水解为羧基后进行鉴别，异烟肼氧化成羧基；尼克刹米水解成羧基,用于异烟肼鉴别时，可取其乙醇溶液加入硼砂及5%2,4-二硝基氯苯乙醇溶液，蒸干，继续加热10min，残渣加甲醇搅拌后，即显紫红色。,异烟肼不经处理的反应：,异烟肼 + 2，4-二硝基氯苯,乙醇,OH-,紫红色,也可不经处理，利用其酰肼基在乙醇溶液中与2,4-二硝基氯苯反应，加碱后，溶液也呈红紫色。,(二)酰肼基反应,银镜反应,原理：,还原性：异烟肼吡啶环位被酰肼所取代，有较强的还原性，可被不同的氧化剂氧化，也可与某些含有羰基的化合物发生缩合反应。,异烟肼+AgNO3,异烟酸银,+,N2,+,Ag,( 白色）,银镜,Chp（2010年版）： 取本品约10mg，置试管中，加水2ml溶解后，加氨制硝酸银试液1ml，即发生气泡与黑色浑浊，并在试管壁上生成银镜。,异烟肼+亚硒酸,硒,（红色）,2缩合反应 异烟肼的酰肼基与芳醛缩合形成腙，其有固定的熔点，可用以鉴别。ChP和BP均采用本法鉴别.,黄色结晶 mp为228231,Chp（2010年版）：异烟肼 取本品约0.1g，加水5ml溶解后，加10香草醛的乙醇溶液1ml，摇匀，微热，放冷，即析出黄色结晶；滤过，用稀乙醇重结晶，在105 干燥后，依法 测定（附录 C），熔点为228 231 ，熔融时同时分解。,3.酰胺基的分解反应,尼可刹米：除了吡啶环上的N原子外，吡啶环位被酰氨基取代，遇碱水解释放二乙胺,使湿润的红色石蕊试纸变蓝,尼可刹米异烟肼,+,无水Na2CO3Ca(OH)2,吡啶臭,尼可刹米+NaOH,二乙胺,烟酰胺的鉴别，其方法为：在供试品水溶液中加氢氧化钠试液后，缓缓煮沸，即发生氨臭。继续加热至氨臭除尽，放冷，加酚酞指示液12滴，用稀硫酸中和，再加硫酸铜试液，即缓缓析出烟酸铜的淡蓝色沉淀；滤过，取沉淀炽灼，即发生吡啶的臭气。,4.形成沉淀的反应,具有吡啶环的结构，可与重金属盐类及苦味酸等试剂形成沉淀。如,尼可刹米+CuSO4+硫氰酸铵,草绿色,尼可刹米异烟肼,+ HgCl2,白色,（五）紫外吸收光谱鉴别,芳杂环在紫外光区有特征吸收,所有的原料药都进行红外光谱图的鉴别,（六）红外吸收光谱鉴别,（一）异烟肼中游离肼的检查 杂质来源 原料引入、降解产生 1. TLC法 Ch.P中异烟肼及其注射剂,采用TLC法中杂质对照法。 对照品：硫酸肼0.20mg/ml（相当于游离肼50g） 薄层板：硅胶（用羧甲基纤维素钠溶液制备） 展开剂：异丙醇-丙酮（3 ：2） 显色剂：乙醇制对-二甲氨基苯甲醛试液 检测结果：供试品主斑点前方，不得显黄色斑点,三、有关物质检查,诱变剂和致癌物,杂质限量：0.02%,高效液相色谱法中国药典用高效液相色谱法对异烟肼中有关物质进行检查。取本品，加水分别制成每1ml中含0.5mg的供试品溶液与每1ml中含5g的对照溶液。照含量测定项下的色谱条件，取对照溶液10l注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%；再精密量取供试品溶液与对照溶液各10l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3.5倍。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，单个最大杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的1/3（0.33%），各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积（1.0%）。,2烟酰胺中有关物质的检查烟酰胺在生产和贮存过程中易引入杂质，中国药典规定进行有关物质的检查。检查方法为：取供试品，加乙醇制成40mg/mL的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加乙醇稀释制成200g/mL的溶液，作为对照溶液。吸取上述两种溶液各5L，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿-无水乙醇-水(48544)为展开剂，展开后，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深(0.5%)。,1.氧化还原滴定法：常用氧化剂有：碘、溴、溴酸钾、高锰酸钾、重铬酸钾、NaNO2、硫酸铈等。其中碘量法，溴量法，溴酸钾法最常用。,三、含量测定：（一）异烟肼的含量测定方法。,操作：,终点:稍过量的溴酸钾,反应摩尔比 32,讨论：a. 强酸性介质：适量的盐酸b. 缓缓滴定并充分振摇，防止局部浓度过高终点提前；c. 温度：18-25 Cd. 化学计量关系：3/2T=0.016673/2137.14=3.429c.测定异烟肼（原料、片、注射剂）；,3.非水滴定法 利用吡啶环的碱性，进行非水滴定 以冰醋酸-醋酐为溶剂 以玻璃-甘汞电极指示终点 以高氯酸为滴定剂 指示剂：结晶紫,取供试品约0.15 g，精密称定，加冰醋酸10mL与结晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定，至溶液显蓝绿色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1 mL高氯酸滴定液(0.1 mol/L)相当于17.82 mg的C10H14N2O。,3紫外分光光度法,中国药典采用吸收系数法测定尼可刹米注射液及烟酰胺片的含量，现以烟酰胺片为例，其含量测定方法为：取供试品20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量(约相当于烟酰胺60mg)，置100 mL量瓶中，加盐酸溶液(91000)75 mL，置水浴上加热15min并时时振摇，使烟酰胺溶解，放冷至室温，用同一溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5mL，置于200 mL量瓶中，用同一溶剂稀释至刻度，摇匀，在261nm的波长处测定吸收度，按C6H6N2O的吸收系数为430计算，即得。,3紫外分光光度法烟酰胺在水、乙醇和不同pH(pH=6，7，8)的磷酸盐缓冲液中，最大吸收峰均约在262 nm，吸收系数约为238；但在盐酸溶液(91000)中，最大吸收峰的波长为261.5 nm，吸收系数为423.4，该条件明显优于以水、乙醇和不同pH的磷酸盐缓冲液为溶剂，因此选用盐酸溶液(91000)为溶剂，在261 nm波长处测定其含量，吸收系数经试验校正为430。,4.高效液相色谱法,色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.02mol/L磷酸氢二钠溶液（用磷酸调pH值至6.0）-甲醇（85:15）为流动相；检测波长为262nm。理论板数按异烟肼峰计算不低于4000。测定法 取本品适量，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液，精密量取10l注入液相色谱仪，记录色谱图；另取异烟肼对照品适量，精密称定。同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。,99：79. 下列药物中，哪一个药物加氨制硝酸银能产生银镜反应A. 地西泮B. 阿司匹林C. 异烟肼D. 苯佐卡因E. 苯巴比妥,97：132用于吡啶类药物鉴别的开环反应有A. 茚三酮反应B戊烯二醛反应C坂口反应D. 硫色素反应E二硝基氯苯反应,例1. ChP（2005）异烟肼的测定方法为A. 溴酸钾滴定法B. 溴量法C. TLCD. NaNO2E. 比色法,例2. 能和2,4一二硝基氯苯发生呈色反应的药物是A. 异烟肼B. 硫酸奎宁C. 阿莫西林D. 四环素E. 炔孕酮,例3. 能和硫酸铜及硫氰酸铵反应，生成草绿色沉淀的药物为A. 对乙酰氨基酚B. 异烟肼C. 尼可刹米D. 地西泮E. 维生素E,例4. 经高锰酸钾或溴水氧化后，可发生开环形成戊烯二醛反应的药物为A. 葡萄糖B. 皮质酮C. 维生素CD. 土酶素E. 异烟肼,例5. 溴酸钾法测定异烟肼含量的方法是 A. 属于氧化还原滴定法 B. lmol溴酸钾相当于3/2mol的异烟肼 C. 采用永停滴定法指示终点 D. 在HCl酸性条件下进行滴定 E. 还可以用于异烟肼制剂的含量测定,例6. 异烟肼可由原料反应不完全或贮藏中的降解反应而引入哪种杂质A. 间氨基酚B. 水杨酸C. 对氨基苯甲酸D. 游离肼E. 其他甾体,例7. 可用于异烟肼鉴别的反应有A. 与氨制硝酸银的反应B. 戊烯二醛反应C. 坂口反应D. 硫色素反应E. 二硝基氯苯反应,第四节 吩噻嗪类药物,一、基本结构与化学性质（一）结构特点与典型药物,吩噻嗪类药物为苯并噻嗪的衍生物，分子结构中均含有硫氮杂蒽母核，基本结构如下：,典型药物：盐酸氯丙嗪、盐酸异丙嗪、奋乃静、盐酸氟奋乃静、癸氟奋乃静、盐酸三氟拉嗪和盐酸硫利达嗪等,奋乃静,盐酸氟奋乃静,（二）主要化学性质,碱性 上述药物的杂蒽母环氮原子上的取代基均具有碱性，临床上多使用其盐酸盐。易氧化呈色 硫氮杂蒽母核中的二价硫易氧化，遇不同氧化剂如硫酸、硝酸、三氯化铁试液及过氧化氢等，随着取代基的不同，而呈不同的颜色，可用于鉴别。,金属离子络合呈色 未氧化的硫可与金属钯离子形成配位化合物，而氧化产物亚砜、砜则不能，可用于鉴别和含有测定，具有专属性，可消除氧化产物的干扰。紫外吸收光谱特性 硫氮杂蒽母核为共轭三环的系统，紫外区三个吸收峰值，约205nm、254nm、300nm，最强多在254nm附近，根据2位、10位取代基不同，可引起最大吸收峰的位移。 当母核的二价硫被氧化为砜或亚砜，则呈现四个峰值。,200 300,254,205,300325,紫外吸收光谱受取代基的影响，特别是S被氧化的程度不同，有不同的改变，在紫移的同时在270附近产生一新的吸收。紫外吸收用于鉴别,270,成为四个峰,一些常用苯并噻嗪类药物与氧化剂的显色反应,鉴别试验呈色反应,盐酸异丙嗪 ChP（2005）鉴别 （1）取本品约 5mg，加硫酸5ml 溶解后，溶液显樱桃红色；放置后，色渐变深。（2）取本品约 0.1g，加水 3ml 溶解后，加硝酸 1ml，即生成红色沉淀；加热，沉淀即溶解，溶液由红色转变为橙黄色。,苯并噻嗪为一良好的电子给予体，当其遇不同的氧化剂如硫酸、硝酸、三氯化铁试液及过氧化氢等，由于相继失去电子及经历不同的氧化阶段，会形成一些自由基型产物和非离子型产物(砜、亚砜、3-羟基吩噻嗪)等，随着取代基的不同，各药物的氧化产物呈不同的颜色，可用于药物的鉴别和含量测定。中国药典据此对上述药物进行鉴别。如盐酸异丙嗪的水溶液加硝酸后，即生成红色沉淀；加热，沉淀即溶解，溶液由红色转变为橙黄色。盐酸氯丙嗪加硝酸即显红色，渐变淡黄色。,鉴别试验呈色反应,没有很专属性的反应，鉴别要配合IR、UV含量测定利用其还原性和取代基的碱性,鉴别试验,紫外吸收光谱鉴别,与钯离子络合显色 鉴别方法：取本品约50mg，加甲醇2ml溶解后，加0.1%氯化钯溶液3ml，既有沉淀生成，并显红色，再加过量的氯化钯溶液，颜色变深。,鉴别试验,利用分子结构中未被氧化的硫与金属钯离子络合形成有色络合物，如与癸氟奋乃静形成红色络合物。,有关物质检查,盐酸氯丙嗪（原料药、片剂、注射剂）中有关物质的检查 有关物质：其他烷基化吩噻嗪杂质及分解产物主要有：2-二甲氨基-1-丙醇；N,N,-三甲基-10H-吩噻嗪-10-乙胺异构体和结构不清的分解产物 。来源：生产、储存过程中产生 方法：TLC 高低浓度对比法 避光操作,检查,奋乃静的检查中国药典规定检查本品甲醇溶液的澄清度与颜色、干燥失重和炽灼残渣，并检查奋乃静片的溶出度和含量均匀度。,含量测定,比色法1.钯离子比色法,优点： 钯离子比色法可选择性地用于未被氧化的吩噻嗪类药物的测定。,红色 500nm,10分钟反应完全，呈色可稳定2小时，测定范围50250微克,盐酸氯丙嗪的含量测定：取氯化钯溶液(PdCl2 50mg溶于50mL盐酸中)0.5mL，加入 pH2的缓冲液5mL中，然后加入供试品水溶液1mL(含供试品50150g)，再加水至7mL，旋摇。15min后，置1cm吸收池中，以试剂为空白对照，在500nm处进行测定，即得。同时以对照品按同法测定后，进行计算。,含量测定,铁盐比色法 利用吩噻嗪类药物与三氯化铁试液呈色，可进行比色测定。方法系以供试品溶液与0.2%三氯化铁的盐酸(0.1mol/L)溶液，等体积混合后，在一定时间内进行测定。例如盐酸异丙嗪与铁盐呈色后的max为525nm，线性浓度范围为0.120g/mL；盐酸异丙嗪则为50加热10min后，在535nm是其呈色产物的最大吸收波长，线性范围为1.2515g/mL。,含量测定,2.非水滴定法苯并噻嗪类药物母核上的氮原子碱性极弱，不能进行滴定，但其10位取代基上的烃胺-NR2或 具有一定的碱性，可在非水介质中以高氯酸液滴定。非水滴定法在苯并噻嗪类原料药物的含量测定中，大多以冰醋酸为溶媒，以结晶紫为指示剂；也有采用丙酮为介质，甲基橙(丙酮饱和溶液)为指示剂或改用电位法指示终点。,含量测定,3紫外分光光度法,苯并噻嗪类药物在紫外光谱区具有特征的最大吸收，可在其最大吸收波长处测定吸收度，利用吸收系数计算；或与标准对照溶液同时测定、计算含量。此法更多用于本类药物制剂的含量测定。,1.直接紫外分光光度法,盐酸氯丙嗪片剂测定波长为254nm（ 为915）；以吸收系数法测定含量。,(二)萃取后分光光度法,盐酸氯丙嗪注射液,盐酸氯丙嗪,氨水碱化,氯丙嗪,乙醚提取,乙醚层,盐酸提取,盐酸氯丙嗪,max2541nm处测定A， E1cm1% 915,环庚三烯,苯并二氮杂类,典 型 药 物,1. 结 构,1930年代，瑞典化学家Leo Sternbach博士在研究hererocycles。发现其并没有染料的价值。因为政局动荡，Sternbach博士来到瑞士，最后进入罗氏工作。在二战期间，罗氏公司将部分资产和人员迁到了美国。于是Sternbach博士就这样来到位于美国Nutley（新泽西）的分公司。 1950年代，由于神经科学和精神病学的发展，许多药企关注神经精神类药物。1954年，罗氏作出了一项决定，研发镇静药。Sternbach博士也被分派到为这一战略组建的团队中。他开始希望从 杂环类化合物开始，因为他对杂环化合物非常熟悉，而且可以低成本大生产。这时他发现苯氮卓类化合物。于是他把其中一个化合物命名为Ro-50690，放到了实验室的架子上，没有进一步进行药理实验。 在随后几年中，Sternbach博士并没有取得太大的成绩，并且他受到了上司的指责。于是他下令要改变工作模式，并进行实验室的清理。在清理时，有一个研究人员把这一化合物找了出来，于是Sternbach博士抱着试试看的心态，把它送给了药理部。 没有多久，药理部反馈信息：这一化合物有镇静、抗焦虑、松弛肌肉的作用，比市场上的安宁、巴比妥等效果都要好！于是罗氏公司钉住Ro-50690展开了后续的研究。,氯氮卓有类似巴比妥的抗惊厥作用，但催眠作用较弱。42家医院中，包括慢性酒精中毒的众多精神和神经性疾病的患者接受了氯氮卓的治疗。患者的焦虑、紧张情绪得到了显著缓解。氯氮卓可以治疗感情混乱而不会影响到人的思维能力。帮助人们缓解上瘾情形。1959年，2000名内科医师用它治疗了2万名病人，效果显著。1960年，本品以氯氮卓（Librium）为商品名在英国上市。随后在世界范围内上市，并且销量节节攀升，迅速成为重磅炸弹品种。附： 罗氏公司在研发氯氮卓的过程中，合成了3000个相关的化合物，但只有氯氮卓和地西泮两个获得了成功。1963年，diazepam (Valium安定)地西泮上市。 惠氏公司也在氯氮卓的基础上，开发出了奥沙西泮（oxazepam）。而睡眠障碍由硝基安定治疗，商品名Mogadon，于1965年引入。替马西泮于1969年引入。盐酸氟胺安定，商品名Dalmane，于1973年上市。到了1983年，共有17种苯氮卓类药物上市，销量超过了30亿每年。而今天已经有29种同类药物上市了。对于焦虑、失落、失眠和压力大等症状，药物需要长期服用，甚至要数年。到1970年代，苯氮卓类药物成为临床上最常用的处方药，估计有5分之一的女性和10分之一的男性都服用它们。,结构特点：含氮杂原子、六元和七元环双环骈合而成，其中1,4-苯并二氮杂类药物是目前临床应用最广泛的抗焦虑、抗惊厥药。如：地西泮、硝基地西泮、艾司唑仑、氯氮、阿普唑仑、三唑仑、盐酸氟西泮、氯硝西泮和奥沙西泮等，其中，除了氯氮外，均为地西泮的衍生物。,1. 苯并二氮杂母核 弱碱性，UV 2. 结构中的环一般比较稳定，但在酸性溶液中可水解，形成相应的二苯甲酮衍生物可用于鉴别和比色测定.（氯氮水解生成芳伯胺基；地西泮水解生成芳仲胺基和甘氨酸）；,1.水解后呈芳伯胺反应 氯氮和奥沙西泮，其反应如下：,1.水解后呈茚三酮反应地西泮甘氨酸 紫色溶液 茚三酮,3. 硫酸-荧光反应 本类药物溶于硫酸后，在紫外光（365nm）下，显不同颜色的荧光。例如：,地西泮 黄绿色 黄色 氯氮 黄色 紫色 艾司唑仑 + H2SO4 亮绿色 + 稀硫酸 天蓝色 硝西泮 淡蓝色 蓝绿色 奥沙西泮 淡黄绿色,1。沉淀反应 氯氮 橙红色沉淀 阿普唑仑 橙红色沉淀 盐酸氟西泮 KBiI4 也生成橙红色沉淀 氯硝西泮 放置后，沉淀颜色变深， 因此可以相互区别。,阿普唑仑 + 遇硅钨酸 白色沉淀，药典中也用于鉴别。,（二）紫外特征吸收和红外吸收光谱 药物名称 溶 剂 浓度（g/ml） max（nm） A 地西泮 0.5%硫酸甲醇溶液 5 242 约0.51 282 约0.23 366 氯氮 盐酸溶液(91000) 7 245,308 阿普唑仑 盐酸溶液(91000) 12 264 盐酸氟西泮 硫酸甲醇(136) 10 2392,2842 比值1.952.50 3622 氯硝西泮 0.5%硫酸甲醇溶液 10 2392,3072 奥沙西泮 乙醇 10 229, 3152(较弱) 红外吸收光谱:已用于地西泮、阿普唑仑、艾司唑仑、盐酸氟西 泮、氯硝西泮和奥沙西泮的鉴别。,（三）TLC法 1.常用的五种苯并二氮杂类药物的TLC法 本类药物发展快，品种多，结构相似，不易分离、鉴别，薄层色谱法常被用于本类药物的系统鉴别。 氯氮的鉴别：按常规法点样10l于硅胶G薄层板上，以苯-丙酮（3 ：2）为展开剂,饱和15min，用上行法展开15cm，挥发溶剂，用稀硫酸喷雾，于105干燥30min，置紫外灯下检视荧光 斑点，,三、有关物质检查,1.地西泮中有关物质的检查 地西泮在合成过程中因其副反应，可能引入N-去甲基苯甲二氮及化学结构不清的有关物质，在贮存过程中液课分解产生2-甲氨基-5-氯-二苯甲酮等杂质。中国药典采用高效液相色谱法进行检查。色谱条件：C18 甲醇-水（70：30） 254nm各杂质峰面积的和不得大于对照液主峰面积的3/10,2.氯氮中有关物质的检查 USP(31)用TLC法检查氯氮卓中的 有关物质，并规定其分解产物2-氨基-5-氯-2-苯甲酮含量不得过0.01%；中间体7-氯-1，3-二氢-5-苯基-2H-1，4-苯并二氮杂卓-2-酮-4-氧化物含量不得过0.1%。,测定方法：取本品50.0mg，加丙酮2.5mL，振摇，待不溶颗粒下沉后，取其上清液50L与氨基物对照溶液(10g/mL)、氧化物对照溶液(100g/mL)各10L，分别点于同一硅胶薄层板上；以醋酸乙酯展开(不必预先饱和)，喷以1mol/L硫酸溶液并于105加热15min后，喷以亚硝酸钠溶液(11000)、氨基磺酸氨溶液(1200)及N-(1-萘基)乙二胺二盐酸盐(11000)溶液。供试品溶液所显任一斑点及其颜色均不得较对照溶液所显斑点更大、色泽更深。,一、非水溶液滴定法,含量测定,地西泮及氯氮等。基于这些药物分子结构中氮原子的弱碱性，可用非水溶液滴定法直接测定其含量。由于这些药物的碱性强弱不同，测定时所采用溶剂、指示剂及其指示终点的方法也不尽相同。 药物名称 取样量(g) 溶 剂 指示剂 终点颜色 地西泮 0.2 冰醋酸、酸酐10ml 结晶紫 绿色 氯氮卓 0.3 冰醋酸10ml 结晶紫 蓝色,(1)地西泮酸水解产物二苯甲酮衍生物的比色测定 地西泮原料药及其制剂经6mol/L盐酸液水解后，所生成的2-甲氨基-5-氯-二苯甲酮，以氯仿提取可得到黄色溶液，在410nm波长处测其吸收度。本法的线性范围为030g/mL；5次测定回收率为99.01.9%。盐酸吡哆醇及常用防腐剂(苯甲酸、苄醇)和色素等未见有干扰。,一、比色法,(2)地西泮酸水解产物甘氨酸的茚三酮比色法 地西泮的酸水解产物甘氨酸与茚三酮形成稳定的紫色，在570nm波长处有最大吸收。本法的线性范围为312g/mL，方法精密度和重现性较好。(3)氯氮酸水解后重氮化-偶合比色法 氯氮经酸水解产物2-甲氨基-5-氯-二苯甲酮具有芳伯氨基，经重氮化后与N-(1-萘基)-乙二胺偶合呈色，在540nm波长处有最大吸收，可以用比色法测定。,中国药典收载的本类药物只有奥沙西泮原料药采用本法，但其制剂或片剂均匀度与溶出度的测定均采用此法。(1)氯氮片的测定 取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于氯氮30mg)，置100mL量瓶中，加盐酸溶液(91000)70mL，充分振摇使氯氮溶解，用盐酸溶液(91000)稀释至刻度，摇匀，用干滤纸滤过，精密量取续滤液5mL，置另一100mL量瓶中，用盐酸溶