冷冻保存同种异体血管研究进展

1 / 5冷冻保存同种异体血管研究进展随着现代免疫学、冷冻生物学、分子生物学的发展， 冷冻保护剂、 免疫抑制剂的应用以及注重移植结构及功能的完整。冷冻保存同种异体静脉无论是基础研究还是临床实践都获得相当经验，但存在移植物再狭窄及替代小口径动脉失败率高的 缺点。近年来，有关动脉作为血管替代物逐渐被重视，取得一些进展，但尚需继续长期地探 索和实践。1 血管移植免疫进展大量的实验和临床结果不但证实血管内皮细胞是移植排斥重要的靶器官，而且通过其抗 原递呈作用、表型变化和细胞因子合成等，主动参与移植排斥过程。EC 表达多种抗原，如： ABO 血型抗原，MHC 抗原和血管内皮细胞抗原系统。在排斥过程中，EC 上的抗原与其相应的抗 体结合形成抗原抗体复合物，激活补体释放趋化因子，白细胞在补体参与下溶解 EC，使基底 膜暴露，2 / 5激活凝血系统，形成血栓，激活的巨噬细胞释放白介素-1、肿瘤坏死因子等可提 高 EC 表面组织因子活性，增加纤溶酶激活物抑制因子和减少血栓调理蛋白，EC在细胞因子刺 激下可合成和分泌单核细胞趋化因子 MCP-1/JE，吸引单核巨噬细胞迁移至移植物局部。同 时表达 Class 抗原，提供所有激活 CD4+ T 细胞所必需的信号，并可产生各种细胞因子， 引 起表型的变化。另外内皮细胞膜还可作为血管紧张素转化酶场所，以使血管紧张素转化成 血管紧张素，使血管收缩。近来，一些学者发现血管平滑肌细胞也表达 Class 和 Class 抗原系统，参与排斥反应全过程1 。2 同种异体血管移植的基础研究进展移植前血管处理及冷冻复温技术制备供体选择来源于新鲜尸体及创伤性截肢患者，采用美国组织3 / 5库协会 制 定的标准2 。取血管应在死后 4 h 完成，所有操作均在无菌条件下进行。制备 技术的基本原则：从供体获取血管应严格遵循无创伤技术；获取血管前 1530 min，供体给 予平滑肌松弛剂及抗凝药物，以防止血管痉挛和血栓形成；保持制备液和室 温 37；灌注压100 mg。理论上以37自身含罂粟碱肝素化血液低压灌注可最好保持 血管的生物活性，但通常从供体获取血液是困难的。目前常采用 37的生物培养液，Brocdban12 下一页 k 等获得保存 24 h 后 80%内皮细胞存活率和平滑肌收缩度最大限度的保持 3 。冷冻复温随着冷冻保护剂二甲基亚砜和甘油的应用及控温冷冻技术的成熟 ，血管活性得以很好的保持。DMSO 因穿透力强，研究较多，其浓度以 15%为最佳。控温冷冻 第二步温值在-60-80之间，冷冻速率为1/min，复温采用 37水浴快速复温。经 过这样处理的静脉获得 80%的内皮细胞存活率4 / 5。Banbang 等证实这些内皮细胞具有与正常内皮 细胞相似的增值和抗凝血功能4 。Salomon 等也从冷冻保存静脉上获得表达 HLA 抗 原的平滑肌细胞1 。实验性同种异体移植与自体移植的比较性研究同种异体血管移植的 主要障碍是受体 的免疫排斥反应。因此，研究在免疫缺陷的情况下在体冷冻保存血管移植的变化是必需的。 这样自体冷冻血管不仅检验血管制备及宿主对移植物产生排斥反应的冷冻保存技术的效果， 而且通过与同种异体移植物移植后组织结构与功能的对比，了解同种异体移植物在整个过程 中的变化。自体移植物在移植过程中，可因离体缺血、牵拉、切割、吻合及在受体动脉高压冲 击下，内皮细胞可有不同程度的坏死，从而使位于内皮细胞下的结缔组织裸露于血流，使附 壁血栓形成。1 周后残留的附壁血栓向致密而平滑的纤维被膜演变，同时内皮细胞再生开始 。内膜增生和动脉粥样硬化是5 / 5发生在内皮下层两个相关联的病理现象，或许是不可避免的创 伤适应性改变。移植血管中膜可见平滑肌细胞坏死和纤维替代，外膜因部分胶原纤维束断裂 和血管滋养管栓塞，形成纤维瘢痕，移植后 72 h，新的滋养血管出现，2 个月后基本恢复正 常，神经再生于 24 周后开始。上述这些改变实质上是导致自体静脉移植后失败的病理基础 。相对于自体静脉移植的内膜增生，同种异体移植物动脉化主要是中膜增生5 。当在同种异体移植物中又观察到的内膜增生是由于局部血栓沉积后成纤维