器官移植和HLA配型.ppt

临床免疫学检验 器官移植与HLA分型检测技术 majorhistocompatibilitycomplex MHC 主要组织相容性复合体 人类白细胞抗原 humanleukocyteantigen HLA HLA复合体 MHC分子 MHC抗原 HLA的结构 HLA 类分子 HLA 类分子 公元4世纪罗马教堂 自体移植 同种同基因移植 同种异基因移植 异种移植 移植物抗原刺激受者的免疫系统 受者组织抗原刺激移植物中的免疫细胞诱发的免疫应答称为移植排斥反应 同种异型移植排斥反应 第1节MHC基因和遗传特点 复习 MHC基因的构成MHC基因的特性MHC基因的意义 一 MHC基因的构成 一 定位第6号染色体短臂 6p21 31 全长3600kb 共有224个基因座位 128个表达产物 二 基因区经典 类基因 B C A位点经典 类基因 DP DQ DR位点 类基因区 HLA复合体3600kb长度224基因座位 类基因区 ACB DRDQDP MHC 类分子 MHC 类分子 二 MHC基因遗传特点 一 HLA为高度多态性基因MHC基因复合体是由多个位置相邻的基因座位组成 可以编码相同或相似的MHC抗原 MHC为共显性表达 人群之中所有基因座位等位基因都相同的几率 126 23 81 24 559 3 851 276 506 1 1019 人群之中MHC抗原相同的几率 6 9 24 62 10 28 1 109 二 单体型和连锁不平衡性 意义 器官移植选择供体顺序 自身 同卵双生 兄弟姐妹 父母 亲属 无关人群 父母与子女完全相同的几率 父母与子女一半相同的几率 子女间完全相同的几率 子女间一半相同的几率 子女间完全不同的几率 0100 25 50 25 1 单体型遗传 1 单体型遗传 二 单体型和连锁不平衡性 2 连锁不平衡性 一 HLA为高度多态性基因 第2节HLA与器官移植 在三类HLA分子中 类分子是触发移植排斥反应的首要抗原 次要组织相容性抗原ABO血型抗原系统其他组织特异性抗原 主要组织相容性抗原 决定移植 成败 的抗原 一 器官移植的类型 1 自体移植 autograft 皮肤 骨髓 软骨和骨 2 同种同基因移植 syngraft 3 同种异基因移植 allograft 同种异型移植 4 异种移植 xenograft 一 同种异型排斥反应的识别机制受者对T细胞对供者的MHC分子的直接与间接识别 一 直接识别机制 直接识别 受者T细胞 受者T细胞直接识别的靶结构 同种异型抗原的直接识别及其效应 二 间接识别受者T细胞识别受者APC加工处理的供者的MHC分子在急性排斥反应中 晚期以及慢性排斥反应中起重要作用 识别方式 间接识别 同种异型抗原的间接识别 二 同种异型移植排斥反应的类型及效应机制 一 宿主抗移植物反应 hostversusgraftreaction HVGR 依据反应发生的时间及病理强度分为 1 超急性排斥反应 术后开始至几个小时 2 急性排斥反应 术后几天至几周 3 慢性排斥反应 术后数月至数年 超急性排斥反应发生示意图 二 移植物抗宿主反应 graftversushostreaction GVHR 更为严重的一种排斥反应原因 1 受者与供者HLA不相匹配 2 移植物中成熟的T细胞多 3 受者处于免疫功能极度低下的状态常见于 骨髓移植 造血干细胞移植 胸腺 脾移植及新生儿接受大量输血 三 同种异体移植排斥反应的防治 一 寻求与受者MHC相配的供者组织或器官是目前最为有效多见的方法 1 ABO血型抗原配型2 HLA抗原配型 供者与受者HLA A B相配的位点越多存活率越高 上述的基础上 HLA DR DQ尽可能的匹配 HLA DR类型对存活率影响较大 二 使用免疫抑制药物1 多为抑制T细胞药物环孢菌素A CsA FK 506 Rapamycin2 去氧精胍菌素等抗生素类 阻断T细胞的生长周期3 激素4 可溶性CK受体 抗CK抗体和抗粘附分子抗体 阻断协同刺激信号诱导T细胞失能 三 诱导对移植抗原的特异性耐受免疫抑制剂的毒副作用 致死性感染和肿瘤 理想方法是诱导特异性耐受 新方案 诱导凋亡 诱导T细胞无应答 anergy 包括输入可溶性CTLA 4及CD40L CD40 CD2 CD58等信息传递阻断 第3节HLA分型检测技术 分子生物学分型 血清学分型技术 细胞分型技术 20世纪60年代 20世纪80年代 20世纪70年代 一 血清学分型技术 1 原理 应用一系列已知HLA特异性的分型血清与待测的淋巴细胞反应 通过补体依赖的细胞毒性实验 来检测HLA抗原特异性 典型技术 定型板法 微量细胞毒实验 反应 结果测定 1 染料拒染法 台盼蓝 伊红 碘化丙啶7 AAD 2 流式细胞术 染料拒染法的判定标准 2 血清学分型可检测的抗原 SD抗原 HLA 类分子 HLA 类分子 B C A DR DQ B细胞为靶细胞 3 方法学评价 操作简便易行节约试剂 结果可靠 重复性好无需特殊设备 耗时长不同批号抗血清结果常有不同 优点 缺点 二 细胞学分型技术 LD抗原 1 原理 混合淋巴细胞培养 检测细胞增殖 mixedlymphocyteculture MLC 单向MLC双向MLC 阴性分型法 阳性分型法 1 单向MLC 刺激细胞 已知HLA型别的分型细胞 预处理 使其失去增殖能力 反应细胞 受检者外周血单个核细胞 具有增殖能力 淋巴细胞转化 形态学 3H TdR掺入法MTT还原法 1 阴性分型法 刺激细胞 HLA DP1 受者T淋巴细胞 增殖弱HLA DP1 非HLA DP1增殖强 纯合子细胞只表达HLA DP1 照射处理 2 阳性分型法 预致T敏细胞 非HLA DP1 待测B淋巴细胞 增殖弱非HLA DP1 HLA DP1增殖强 刺激细胞HLA DP1 除DP抗原外 其他HLA抗原相同 照射处理 2 双向MLC 遗传型不同的两个个体淋巴细胞在体外混合培养时 由于两者HLA不同 能相互刺激导致对方淋巴细胞增殖 故称双向MLC 方法学评价 不能分型 但可全面地反应供 受双方组织相容性 三 分子生物学分型技术 一 基本技术 1 限制性片断长度多态性分析 restrictionfragmentlengthpolymorphism RFLP 2 PCR SSP3 PCR SSCP分型法 4 序列特异性寡核苷酸 聚合酶链反应 PCR sequencespecificoligonucleotide PCR SSO 5 基于序列的HLA分型法 sequence basedHLAtyping SBT 芯片技术 原理 PCR SSO反向斑点或印渍法的微型化 二 集成技术 三 PCR SSCP分型法 原理 对ssDNA进行无变性剂的聚丙烯酰凝胶电泳 序列的差异可形成不同的空间构象而导致电泳迁移率的差异 如此可分辨出单一碱基的差异和检测出DNA多态性或点突变 单链非变性电泳迁移分析 病例介绍 一例链球群感染后肾炎 肾衰竭后肾脏移植 男 14岁 首诊前3个月 感冒发烧病史 首次就诊原因 头痛 乏力 眼睑浮肿 实验室检查 蛋白尿 尿红细胞阳性 抗炎症治疗1周 稍好 恢复上学 正常饮食 2月后 恶心 乏力 眼睑浮肿加重 24小时尿量减少 蛋白管型 住院治疗2个月 肾脏衰竭加重 每周透析3到4次 活检见肾小球内CIC沉淀 抗人IgA IgG阳性 建议 申请肾移植手术 亲属自愿做HLA配型 同时申请自无关人群寻找供体肾 半年后分配到合适供体肾 无关人群 检查身体 符合手术要求 进行肾脏移植手术 术后临床观察并服用移植排斥抑制药物 补充EPO 定期到医院检测血药浓度 检测免疫功能 移植后8年后生存状态良好 但长期服用抗移植排斥药物 病例介绍 一例链球群感染后肾炎 肾衰竭后肾脏移植 肾脏移植前选择供者的检查项目 传染性疾病病原学检查ABO血型配型HLA配型符合要求供受双方淋巴细胞混合培养阴性肾源选择的原则 以ABO血型完全相同者为好 选择最佳HLA配型的供者器官 供者无传染性疾病 移植后的临床观测 1 T细胞总数 CD4 CD8比值 IL 2及其受体的检测 判断排斥反应的发生和评估免疫抑制剂治疗效果 2 必要时做肾组织活检 3 血药浓度检测 指导合理用药 减肝 脏肾毒性和免疫抑制 1 ABO血型抗原一致 2 HLA配型主要做HLA DR A B3 混合淋巴细胞反应 阴性4 受者血清细胞毒性实验 阴性受者血清 供者细胞 移植前免疫学检测 HLA匹配与移植排斥反应 存活率 3位点6个基因均匹配时 移植肾的10年存活率为62 5基因为47 4基因为45 3基因为40 无1匹配时为33 说明HLA配型可减少移植物的同种异型抗原性 有助于提高移植物的长期存活率 HLA A B DR配型与肾移植术后10年存活率 6基因5基因4基因3基因无匹配 在三类HLA分子中 类分子是触发移植排斥反应的首要抗原 次要组织相容性抗原ABO血型抗原系统其他组织特异性抗原 主要组织相容性抗原 决定移植 成败 的抗原 思考题 按器官来源 器官移植可分为哪些类型