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精品文档 1欢迎下载 铁离子还原法 FRAP 1 实验原理 基于氧化还原反应的比色法 在低 pH 的溶液中 Fe3 TPTZ Fe3 三吡啶三嗪 被抗氧化剂还原成 Fe2 TPTZ 使反 应液变成深蓝色 在 593 nm 处有最大光吸收 这样通过测 量样品吸光度的变化来测量其抗氧化能力 吸光值愈高表 示样品的还原力也就越强 2 溶液的配制 样品液 用乙醇配制浓度分别为 0 24 0 48 0 72 0 96 1 20 mg ml 各样品溶液和对照 BHT 溶液 40 mmol L 盐酸溶液 取浓盐酸 12 mol L 0 1 ml 加水至 30 ml 置于避光处 备用 0 3 mol L 醋酸钠缓冲溶液 称取醋酸钠 5 1 g 加冰醋酸 20 ml 用水稀释定容至 250 ml 置于避光处 备用 10 mmol L TPTZ 溶液 称取 TPTZ 样品 31 233 mg 用 40 mmol L 的盐酸定容至 10 ml 置于冰箱中冷藏备用 FRAP 工作液 2 5 ml 10 mmol L 的 TPTZ 溶液 2 5 ml 20 mmol L 的 FeCl3 6H2O 和 25 ml 0 3mol L 的醋酸缓冲液 pH3 6 混合均匀即得 精品文档 2欢迎下载 3 实验步骤 FeSO4标准曲线的绘制 准确称取 6 08 mg 硫酸亚铁 溶于 适量的水中 加入 18 mol L 的硫酸 0 25 ml 再加水稀释 至 50 ml 定容 并置入小铁钉 取上述溶液 5 ml 加入 5 ml 水 定容至 50 ml 即为 800 mol L FeSO4标准溶液 用该溶液配制梯度 FeSO4溶液 包括 400 mol L 200 mol L 100 mol L 50 mol L 和 25 mol L 于 593 nm 测定吸光值 绘制标准曲线 取样品 0 3 ml 加 2 7 ml 预热至 37 的 FRAP 工作液 摇 匀后放置 10 分钟 于 593 nm 测其吸光度值 以无水乙醇 代替样品加入 FRAP 工作液作为空白 每个浓度做 3 次 求 平均值 根据所得吸光值 在标准曲线上求得相应 FeSO4浓 度 定义为 FRAP 值 其值越大 抗氧化活性越强 BHT 做 为阳性对照 精品文档 3欢迎下载 欢迎您的下载 欢迎您的下载 资料
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