免疫细胞治疗(1季度培训).ppt

克利斯蒂娜的世界 45岁进入了肿瘤发病高峰 且肿瘤风险随年龄增加呈几何倍数上升65岁的老年人患肿瘤的几率是25岁年轻人的50多倍 40岁后肿瘤发病率逐年增长 恶性肿瘤离我们有多远 我国每年新发肿瘤病例约为312万例平均每天8550人 全国每分钟有6人被诊断为癌症 肺癌 肝癌 胃癌 结直肠癌 食管癌 胰腺癌 白血病 淋巴瘤 脑肿瘤和乳腺癌 肿瘤的治疗 攻克癌症人类的第一次 手术1809年德国医生McDowell第一次用手术切除卵巢癌 并取得36年生存期的良好效果 放疗1895年伦琴发现了X线 1896年即用X线治疗了第1例晚期乳腺癌 化疗化学治疗上世纪40年代用氮芥治疗恶性淋巴瘤取得显著疗效 自此开始了肿瘤的化学治疗 50年代以环磷酰胺 氟尿嘧啶合成为标志是化疗的第二里程碑 70年代顺铂及阿霉素进入临床并得以广泛应用是化疗的第三里程碑 90年代以后 抗肿瘤的新药不断推出 ChesterSoutham 在五十年代首次给志愿者注射活的癌细胞 结果 注射的癌细胞在健康人体内不生长 注射的癌细胞在癌症病人体内可长成大肿瘤 结论 癌症病人体内失去健康人所具有广谱抗癌活性 研究项目受到伦理学及法律的极大挑战 研究结果为抗癌界带来极大提示 1968年被推选成全美抗癌学会主席 Science 1957年一月125 158 160 首次证明人体内天然抗癌活性的存在 人体免疫与肿瘤的发生 临床信息部 肿瘤细胞免疫治疗 免疫器官 免疫细胞 免疫分子 免疫系统是人体的防御体系 一方面清除细菌 病毒等外来异物 另一方面清除体内衰老的无功能细胞以及发生突变的细胞 一个人身上每天有数万亿个细胞在复制 在复制中 约有万分之一到百万分之一的细胞会出现差错 也就是说 每天约有50 100万个细胞可发生突变 有的突变细胞进一步变为癌细胞 免疫系统免疫防御 免疫监视 免疫自稳 Inlarge long livedanimals likemostofthewarm bloodedvertebrates inheritablegeneticchangesmustbecommoninsomaticcellsandaproportionofthesechangeswillrepresentasteptowardmalignancy Itisanevolutionarynecessitythatthereshouldbesomemechanismforeliminatingorinactivatingsuchpotentiallydangerousmutantcellsanditispostulatedthatthismechanismisofimmunologicalcharacter SirFrankMacfarlaneBurnet诺贝尔生理学或医学奖1960 肿瘤免疫治疗理论 免疫监视 理论 ImmuneSurveillanceTheory 肿瘤免疫编辑 TumorImmunoediting Elimination 免疫消除Equilibrium 免疫平衡Escape 免疫逃逸 发病时 健康时 肿瘤的潜伏期长达10年以上 癌细胞反复进行分裂 约30次后大小约0 7cm时 初次被影像学识别为 癌症 早期癌症被发现时的大小约是1cm 重量约是1g 其中癌细胞的个数约是10亿个 据统计 肿瘤发展到临床诊断 所经过的时间约为10年 这期间是防治的黄金时间 肿瘤的治疗 临床信息部 FDA批准第一个免疫细胞 树突状细胞在抗肿瘤免疫中发挥重要作用 2010 4 29美国食品药品管理局批准Provenge sipuleucel T 作为一种治疗晚期前列腺癌患者的免疫活性细胞 这标志着癌症进入一种新的治疗 自身免疫活性细胞治疗 Provenge诱导作用是通过抗原提呈细胞 APCs 负载前列腺癌酸性磷酸酶 PAP 抗原 继而激活肿瘤特异的CD8 T细胞 诱导抗前列腺癌免疫应答 这是FDA首次批准的自体免疫细胞用于治疗肿瘤 发病率高 病情进展缓慢 肿瘤相关抗原表达 化疗疗效有限 非必需 组织 前列腺癌细胞免疫治疗获得成功的原因 PSA PAP等 内分泌治疗无效的患者 此时肿瘤负荷较小 机体具有一定的抗肿瘤能力 NatRevImmunol 2010 10 580 593 Provenge疫苗治疗晚期前列腺癌的机制 治疗结果 受试者 512名总体生存期 对照组 21 7个月 治疗组 25 8个月 3年存活率 治疗组32 对照组23 副作用 主要是发烧 发冷 疲劳和疼痛 2011年诺贝尔生理学或医学奖 BruceA BeutlerJulesA HoffmannRalphM Steinman 2011年诺贝尔生理学或医学奖揭晓 美国 法国三位科学家因在免疫学方面的发现获奖 其中一半的奖金归于BruceA Beutler和JulesA Hoffmann 获奖理由是在 Toll样受体和先天免疫激活方面的发现 另一半奖金归于RalphM Steinman 获奖理由是 发现树突状细胞及其在获得性免疫中的作用 美籍科学家比尤特勒和卢森堡籍科学家霍夫曼是因为发现 Toll样受体 Toll likeReceptors TLRs 及其配体 获得2011年诺贝尔生理学或医学奖 肿瘤的免疫治疗时代已经来临 权威医学杂志纷纷刊文 高度评价免疫细胞治疗技术的前景 肿瘤的免疫治疗时代已经来临 癌症免疫疗法是2013年最值得关注的六大科学领域之一 DC细胞治疗技术正走进肿瘤免疫治疗的前沿 临床信息部 个体化体细胞免疫治疗方案 根据不同肿瘤的生物学特性 肿瘤类型 分期和肿瘤的免疫源性 患者的遗传背景 是否具有家族倾向 目前的病情状况 体质 免疫状况 前期治疗方法 年龄等 在常规治疗的基础上 制定出适合病人的个体化体细胞免疫治疗方案 一 针对老年肿瘤晚期患者 体质弱 免疫功能极度低下采取抽少量血多次回输的治疗方案 抽血30 40ml外周血 第1天 第3次CIK回输 第2次CIK回输 第4天 第8天 第12天 第14天 第16天 开始下一个疗程的治疗 第1次CIK回输 二 化疗联合细胞治疗的增效方案 化疗前1天抽血50ml 进行CIK或D CIK免疫细胞培养 第一周 第二周 7天 第1次开始化疗 第2次开始化疗 回输CIK或D CIK等细胞 化疗前1天抽血50ml 进行CIK或D CIK免疫细胞培养 三 体细胞免疫治疗联合放疗的增效方案 放疗前抽外周血50ml 上午放疗前 放疗 放疗 放疗 两周后 当天放疗后回输免疫细胞 第2天周二 第3天周三 第1天周一 第4天周四 第6天周六 第7天周日 第5天周五回输培养的CIK NK D CIK等细胞 休息 休息 四 抗肿瘤效应细胞交替使用方案 第二周D CIK 第三周NK 第四周D CIK 抽血30ml 回输NK 抽血50ml 抽血30ml 回输NK细胞 抽血50ml 回输D CIK细胞 第五周NK 第六周D CIK 回输D CIK 第一周NK 临床信息部 细胞产品 一 CIK细胞 CIK细胞 Cytokine InducedKiller CIK 即细胞因子诱导的杀伤细胞 是一种新型的免疫活性细胞 该细胞对肿瘤细胞的识别能力很强 如同 细胞导弹 能精确 点射 肿瘤细胞 但不会伤及 无辜 的正常细胞 尤其对手术后或放化疗后患者效果显著 能消除残留微小的转移病灶 防止癌细胞扩散和复发 提高机体免疫力 DC细胞寻找肿瘤细胞的 雷达 DC又称树突状细胞 它是目前发现的功能最为强大的专职抗原递呈细胞 也是唯一能激活幼稚T细胞的抗原递呈细胞 在免疫应答的诱导中具有独特地位 经临床研究的结果显示 DC细胞可促使患者T细胞增殖分化 还可激活B淋巴细胞 全面启动抗体免疫系统产生高效而特异的抗肿瘤效应 帮助重建肿瘤患者对肿瘤细胞的免疫监视功能 DC细胞的功能如同 雷达 通过在体内随着血液全身各处主动搜索 识别肿瘤细胞 并把信息传递给免疫活性细胞 促进其激活和大量繁殖 二 DC细胞 三 DC CIK 通过负载肿瘤抗原的DC与CIK的有机结合 即DC CIK细胞 能产生特异性和非特异性的双重抗肿瘤效应 二者具有一定的互补作用 DC CIK细胞不仅能激发 增强肿瘤患者特异性抗肿瘤免疫应答 有效清除体内残留病灶 且在患者体内诱发免疫记忆 从而获得长期的抗瘤效应 DC CIK自体细胞免疫治疗可以有效杀灭术后的残留肿瘤细胞 防治复发和转移 减轻放化疗的毒副作用 减轻患者痛苦 提高患者自身免疫机制和生活质量 延长患者生命 扩增活化的自体淋巴细胞 AutologousImmunotherapyLymphocytes AIL 又称为高效CIK细胞 是从患者自体外周血 50 100ml 中分离单个核细胞 经过体外激活扩增培养 得到的一种在生理条件下能够杀伤肿瘤细胞的细胞群 主要效应细胞包括MHC限制性效应细胞 CD3 CD8 细胞毒性T细胞 CD3 CD4 辅助性T细胞 非MHC限制性效应细胞 CD3 CD56 细胞 CD3 CD56 NK细胞 可有效辅助恶性肿瘤的治疗 四 AIL细胞 AIL与CIK培养方法比较 50ml外周血 PBMC A培养法 B培养法 A培养法 传统CIK DI IFN 1000U ml 1D2 OKT3mAb 100ng ml 1 IL 21000U ml 1 PHA100ug ml 1 B培养法 AIL DI IFN 1000U ml 1D2 OKT3mAb 100ng ml 1 IL 21000U ml 1 PHA100ug ml 1 AIL扩增试剂 自然杀伤细胞 Naturalkillercell NK 是一种细胞质中具有大颗粒的细胞 来源于骨髓 主要存在于外周血 脾脏和骨髓中 对靶细胞杀伤时既不需特异性抗体参加 也不需抗原预先致敏 自然杀伤细胞可在接触病原体或肿瘤细胞后 立即发挥非特异性杀伤靶细胞的作用 尤其是对多种肿瘤细胞有迅速杀伤和溶解作用 因此 NK细胞对癌症的监视作用已越来越受到重视 五 NK细胞 一 NK细胞是人体内抗癌活性的第一道防线 可直接杀死癌细胞 抑制肿瘤的生长及扩散 二 NK细胞会抑制肿瘤附近新血管的增生 因此可限制肿瘤取得所需要的养份进而限制肿瘤生长 三 NK细胞可直接改善并调节患者的免疫力及神经系统 间接提高患者之生活品质 四 副作用低或几乎无副作用 NK细胞作用原理 六 iAPA 细胞 SOCS1是维持机体免疫耐受的重要分子 Si YiChenetal 发现 SOCS1 SuppressorofCytokineSignaling1 是一种重要的免疫负调节因子 antigenpresentationattenuator APA 对DC细胞的抗原呈递起负调节作用 限制抗原呈递的时间和强度 从而限制自体抗肿瘤免疫反应 该研究第一次提出了抑制免疫负调控因子来增强DC疫苗的概念 NatureBiotechnol 2004 22 1521 2评述 NatureBiotechnol 2004 22 1546 53J Clin Invest 2006 116 90 100 STAT SOCS1 JAK Cytokine IFN IFN IL 2 IL 3 IL 4 IL 6 IL 12 IL 7 IL 15 M CSF etc LPS MyD88 TRAF6 IKK IKK RelA p50 I B IKK IRAK Mal SOCS1 TLR配体 TAA s Flagellin SOCS1 siRNA 解除DC免疫耐受 persistentandenhancedSignals2 3 肿瘤相关抗原 tumor associatedantigen TAA intracellularSurvivin Tcells surfaceMUC1 TcellsandAb 分泌型FliC TLR5ligandauto andparacrineactivationofAPCs enhancedSignals2 3 siSOCS1 TT iAPA技术治疗肿瘤 iAPA 细胞 与传统免疫细胞治疗相比 iAPA技术的优势 结构新颖 iAPA因子包含抑制SOCS1的siRNA 肿瘤抗原 Survivin muc1 和鞭毛蛋白 机制新颖 iAPA技术不但针对性增强DC免疫活性 而且去除了免疫负性调控因素 从而更有效的增强了免疫效应 创新靶点 iAPA技术作用的靶点独创性针对免疫活化通络上的关键性分子iAPA分子 SOCS1 44 45 2020年3月27日星期五 iAPA 技术完全打破了传统的免疫治疗理念与方法 代表了免疫学理论的一场新的革命 为国际首创 世界一流 许多研究成果已分别发表在国际一流权威杂志 包括 Naturebiotechnology Naturemedicine 与 JCI 等 基础研究 国际首创世界一流为国际医学界所公认 CTL CytotoxicTLymphocyte 细胞毒性T细胞 其表面标志是CD8 这些细胞的功能就像一个 杀手 它们可以直接攻击带有特殊抗原的靶细胞 在抗病毒感染和抗肿瘤免疫中具有极其重要的用 细胞毒性T细胞也被称为杀手T细胞 七 CTL细胞 肿瘤浸润淋巴细胞 TumorInfiltratingLymphocytes TIL 是通过采集患者胸腔积水或者腹水 经过体外激活扩增培养 得到的一种在生理条件下能够杀伤肿瘤细胞的细胞群 它是新一代的特异性免疫活性细胞疗法 具有高效 特异 副作用小等优点 可有效辅助恶性肿瘤的治疗 八 TIL细胞 T