常用溶液的配制

常用溶液的配制常用溶液的配制 一 常规溶液 一 1 15mol L PBS 磷酸缓冲液 Phosphate Buffer Solution PBS 甲液 1 15mol L Na2HPO4溶液 Na2HPO4 9 465g 蒸馏水 加至 1000ml 乙液 l 15mol L KH2PO4溶液 KH2P04 9 07g 蒸馏水 加至 1000m1 分装在棕色瓶内 于 4 冰箱中保存 用时甲 乙两液各按不同比例混合 即可得所需 pH 的缓冲液 见下 表 pH 甲液 ml 乙液 mI pH 甲液 ml 乙液 mI 5 29 5 59 5 91 6 24 6 47 6 64 2 5 5 0 10 0 20 0 30 0 40 0 97 5 95 0 90 0 80 0 70 0 60 0 6 81 6 98 7 17 7 38 7 73 8 04 50 0 60 0 70 0 80 0 90 0 95 0 50 0 40 0 30 0 20 0 10 0 5 0 二 0 3 台盼兰染液 称取台盼兰 Trypan blue 粉 0 3 克 溶于 100ml 生理盐水中 加热使之完全溶解 用滤纸过滤除渣 装入瓶内室温保存 三 0 5 酚红指示剂 酚红 0 5g 0 1N 0 4 NaOH 15ml 双蒸水 85ml 将 0 5 克酚红置研钵中 缓漫滴加 0 1NNaOH 溶液边加边磨 并不断吸出已溶解的酚红液 直至全部 溶解 然后加入 85ml 双蒸水 颜色为深红 经粗滤纸过滤后使用 室温保存 四 5 6 NaHCO3溶液 称 NaHCO35 6 克 溶于 100ml 蒸馏水中 室温保存即可 如需要也可 10 磅 15 分钟高压灭菌 4 冰箱 保存 五 10 g ml 秋水仙素 秋水仙素 lOmg 生理盐水 100ml 装入茶色瓶中 为贮备液 4 冰箱中保存 甩时取贮备液 1ml 加生理盐水 9ml 即可 六 0 4 KCl 0 4 柠檬酸钠低渗液 将 0 4 KCl 和 0 4 柠檬酸钠两液等量混合即可 室温保存 七 2 柠檬酸钠 称取柠檬酸钠 2 克 加 100ml 双蒸水即可 室温保存 八 0 2 次甲基兰染液 称次甲基兰 Methylene blue 0 2 克 加蒸馏水 100ml 室温保存 九 0 5 醋酸洋红 Aceio Carmine 染液 洋红 lg 醋酸 90ml 蒸馏水 110ml 将 90ml 醋酸加入 110ml 蒸馏水煮沸 然后将火焰移去 立即加入 1 克洋红 使之迅速冷却过滤 加 饱和氢氧化铁 媒染剂 水溶液数滴 直到呈葡萄酒色 室温保存 加铁使洋红沉淀于组织而着色 此染液 室温存放时间越长效果越好 室温保存 十 1 甲苯胺兰 Toluidine blue 称取甲苯胺兰 1 克 加蒸馏水 lOOml 十一 1 3000 中性红染液 取中性红 Neutral red 0 1 克 加蒸馏水 300ml 室温保存 十二 Giemsa 染液 1 贮备液 Giemsa 粉 1g 纯甘油 66ml 甲醇 66ml 先将 Giemsa 粉置于研钵中加少量甘油 充分研磨 呈无颗粒的糊状 再将全部甘油加入 放入 56 温箱中 2 小时 然后加入甲醇 保存于茶色瓶中 一般两周后使用为好 2 工作液 临用时将贮备液与 pH6 8 的磷酸缓冲液按照 1 20 混合 十三 埃利希 Ehrlich 苏木精染液 苏木精 1 0g 乙醇 50ml 醋酸 5ml 甘油 50ml 硫酸铝钾 5g 蒸馏水 50ml 将苏木精溶于少量的乙醇中 再加醋酸并搅拌 以加速其溶解 当苏木精溶解后将甘油加入并摇动容 器 同时加入其余的乙醇 硫酸铝钾需研磨并加热 然后溶解于蒸馏水中 将其一滴滴地加入上边的溶液 并不断摇动 此液配好后 将瓶口用纱布盖好 置通风处 经常摇动以加速其成熟 成熟约需 4 周左右 成熟的染液为深红色 二 细胞化学和细胞组分分离溶液 一 M 一缓冲液 眯唑 Imidazole 3 404g KCI 3 7g MgCl2 6H2O 101 65mg ECTA 380 35mg EDTA 29 224mg 巯基乙醇 0 07ml 甘油 297ml 蒸馏水 加至 1000ml 用 lNHCl 调 pH 至 7 2 室温保存 二 2 Triton X 一 100 溶液 量取 2mlTriton X 一 100 聚乙二醇辛基苯基醚 液 加 M 缓冲液 98ml 即可 三 0 2 考马斯亮兰 R 250 染液 甲醇 46 5ml 醋酸 7 0ml 考马斯亮兰 0 2g 蒸馏水 加至 100ml 四 A 0 1 碱性固绿染液 pH8 0 8 5 1 0 1 固绿水溶液 固绿 Fast green 0 1g 蒸馏水 100ml 2 0 05 Na2C03溶液 Na2C03 50mg 蒸馏水 100ml 用时按 1 1 体积混合即可 B 0 1 酸性固绿染液 pH2 2 1 0 1 固绿水溶液 2 mol L 75 盐酸液 盐酸 比重 1 19 0 109ml 加蒸馏水至 100ml 用时按 l 1 混合 五 甲基绿一哌咯宁染液 1 1mol L 醋酸缓冲液 pH4 8 1 醋酸 17ml 蒸馏水 加至 200ml 2 醋酸水 13 5g 蒸馏水 加至 lOOml 用时分别取两液 40ml 60ml 混匀即可 2 甲基绿一哌咯宁 methyl green Pyrcnln 5 哌咯宁水溶液 6ml 2 甲基绿水溶液 6ml 蒸馏水 16ml lmol L 醋酸缓冲液 16ml lmol L 醋酸缓冲液临用时才可加入染液中 六 Schiff 试剂 将碱性品红 0 5 克加入 lOOml 沸水 持续煮沸 5 分钟 并随时搅拌 待冷却到 50 时过滤到棕色瓶 中 加 1N HC11O 毫升 冷却至 25 时加入 1 克 NaHSO3 此时需很好的振荡 避光过夜 次日取出 呈淡 黄色 加 0 25 克活性炭剧烈振荡 1 分钟 过滤后即得 Schiff 试剂 避光低温保存 七 联苯胺混合液 联苯胺 4 4 Diamino benzidine 0 2g 95 乙醇 lOOml 3 过氧化氢 2 滴 此液临用时配制 八 l 番红水溶液 番红 Safranin 1 0g 蒸馏水 100ml 九 1 SDS 十二烷基硫酸钠 Sodium dodecyl sulfate SDS SDS 10g 45 乙醇 100ml 十 1mol LTris 三羟甲基氨基甲烷 盐酸缓冲液 Trihydroxy methylaminomethane Tris HCL pH7 8 Tris 12 114g 蒸馏水 lOOml 先将 Tris 溶于少量蒸馏水 用 HCI 调 pH 至 7 8 然后加水至 100ml 十一 Ringer Solution 氯化钠 冷血动物用 0 65 克 0 9 克 氯化钾 0 042 克 氯化钙 0 025 克 蒸馏水 100ml 十二 淀粉肉汤培养基 蛋白 2g 淀粉 6g 牛肉汤 100ml 用 10 NaHCO3调 pH 至 7 0 7 2 十三 0 25mol L 蔗糖一 0 003mol L 氯化钙溶液 蔗糖 85 5g 氯化钙 0 33g 蒸馏水 1000ml 十四 1 詹纳斯绿 B 染液 取詹纳斯绿 Janus green B 1 0g Ringer 氏液 100ml 十五 1 刚果红染液 刚果红 1g 蒸馏水 100ml 十六 Gomori 硝酸铅作用液 0 05mol L 醋酸缓冲液 pH5 lOOml 0 6 醋酸加蒸馏水 200ml 取其 42ml 醋酸钠 1 36g 加蒸馏水 200ml 取其 158ml 共 200ml B 甘油磷酸钠 2g 醋酸铅 2g 5 氯化镁 5ml 以上作用液在临用时配制 最终在 pH5 5 2 过滤使用 王世藩 汇编 三 细胞培养和细胞融合溶液 一 0 01mol LPBS 磷酸盐缓冲液 Phosphate Buffer Saline PBS pH7 2 0 2mol L 磷酸氢二钠液 甲液 NaH2PO4 12H2O 35 814g 双蒸水 加至 500ml 0 2mol L 磷酸二氢钠液 乙液 NaH2PO4 12H2O 15 601g 双蒸水 加至 500ml 取甲液 36ml 乙液 14ml 和 NaCl8 2 克 加双蒸水至 1000ml 混匀待完全溶解分装 经高压灭菌后保 存于 4 冰箱备用 二 50 PEG 聚乙二醇 Polyethyleneglycol mwl500 称取 0 5 克 PEG 用前放入试管中在酒精灯火焰上熔化 加入等量 37 予热的 MEM 培养液 混匀 保 温在 37 水浴中待用 三 MEM 培养液 含 10 小牛血清 MEM 培养液 日本制药株式会社 9 4g 双蒸水 1000ml NaHCO3 1 5g 谷氨酰胺 L glutamin 0 292g 56 灭活 30 分钟的小牛血清 110ml MEM 粉末加水溶解后 用 NaHCO3调 pH 到 7 1 因在抽滤过程中 pH 升高 0 2 0 3 然后加灭活的小牛 血清和谷氨酰胺 待完全溶解后 立即用 G6抽滤除菌 分装 置 4 冰箱保存备用 四 0 25 胰蛋白酶一 0 02 EDTA 混合消化液 胰蛋白酶 Trypsin 粉 0 25g EDTA 粉 20 0mg 0 01mol L PBS 100ml 先用少量 PBS 溶解胰蛋白酶 然后将 EDTA 粉末和剩下的液体加入混合 置 37 水浴中 1 小时左右 待彻底溶解 液体呈透明为止 用 G5抽滤 分装置 4 冰箱中保存 五 Hanks 液 1 原液甲 NaCl 160g KCl 8g MgSO4 7H2O 2g MgCI2 6H2O 2g 溶于 800ml 馏水中 CaCl2 无水 2 8g 溶于 100ml 蒸馏水中 将两种液体混合后 加水至 1000ml 用滤纸滤过 再加 2ml 氯仿防腐 置 4 冰箱备用 原液乙 Na2HPO4 12H2O 3 04g KH2PO4 1 2g 葡萄糖 20 0g 溶于 800ml 蒸馏水中 用滤纸过滤 然后加 0 5 酚红 80ml 再加水至 1000ml 最后加入 2ml 氯仿 防腐 置 4 冰箱备用 2 使用液 甲乙两液各 1 份 双蒸水 18 份 混匀分装包扎好瓶口 经 10 磅 15 分钟高压灭菌后置 4 冰箱中保 存 使用时用 5 6 NaHCO3调 pH 值到所需要求 六 1640 培养液 含 lO 小牛血清 RPMI 1640 粉 10 39g 双蒸水 加至 1000ml 通入适量的 C02气体 边通入 CO2边慢慢搅拌 使其 呈透明 完全溶解 用 NaHCO31 5 克调 pH 值到 7 2 双抗 1 万 u ml 10ml 灭活小牛血清 110ml 混匀上述液体 立即用 G6抽滤除菌分装 置 4 冰箱备用 七 青 链霉素溶液 青霉素钠盐 40 万 u 瓶 5 瓶 链霉素 100 万 u 瓶 2 瓶 将两者溶于 200ml0 9 的无菌生理盐水 分装小瓶 30 保存 双抗在培养基中的终浓度为各 lOOu 为 宜 八 二甲基亚砜诱导 HL 60 细胞分化使用的终浓度为 1 4 九 BrdU 溶液 200ug m1 用无菌青霉素瓶 在室温下称取 1 0mg 在无菌条件下加入灭菌生理盐水 9 0ml 溶解 混匀 用黑 纸包严 避光置冰箱冰格中保存 最好用时现配 十 2 SSC 溶液 用分析天平称取氯化钠 17 53 克 柠檬酸钠 8 82 克溶于蒸馏水中 加蒸馏水至 1000 毫升 十一 3 琼脂 取琼脂粉 3 克 加入双蒸水到 100 毫升 搅匀 高压消毒后 15 磅 20 分钟 冷藏备用 使用前重新加热 煮沸 贮存时间不宜过长 四 制备电镜标本的溶液 一 2 5 戊二醛溶液 25 戊二醛 lOml 0 1mol L 二甲砷酸钠缓冲液 装入茶色瓶中 保存于 4 冰箱备用 二 0 1mol L 二甲砷酸钠缓冲液 二甲砷酸钠 10 70g 蒸馏水 500ml 将二甲砷酸钠置于 500ml 容量瓶中 先加水约 400ml 震荡使其溶解 用 HCl 调 pH 到 7 4 加入剩余 蒸馏水 4 冰箱保存 三 包埋剂 环氧树脂 Epon812 56 30g DDSA 十二烷基琥珀酸酐 Dodecenyl succinic anhydride DDSA 14 60g MNA 甲基内次甲基邻苯二甲酸酐 Methyl Nadic anhydride MNA 29 00g 混合上述三种包埋剂成分 搅拌 30 分钟使其充分混匀 再加加速剂 2 4 6 一三 二甲氨基甲基 苯酚 2 4 6 tridimethyl aminomethylphenol DMP 30 1 5ml 继续搅拌 30 分钟 置于干燥罐中 室温 备用 四 2 单宁酸 单宁酸 2g 双蒸水 100ml 溶解后过滤装茶色瓶中 4 冰箱保存 五 高锰酸钾固定剂 柠檬酸三钠 60mmol L 氯化钾 25mmol L 氯化镁 35mmol L 高锰酸钾 125mmol L pH 为 7 4 7 8 装茶色瓶中 4 冰箱中保存 有效期 2 个月左右 六 1 OsO4溶液 OsO4 0 5g 0 1mol L 二甲砷酸钠缓冲液 50ml OsO4一般为 0 5 或 1 克安瓶中封闭包装 配制时剥去商标 用自来水洗净 放洗涤液中泡 4 12 小 时后用水冲洗