实验不同因素对家兔离体肠肌收缩的影响

1 51 实验实验 5 5 不同因素对家兔离体肠肌运动的影响不同因素对家兔离体肠肌运动的影响 浙江中医药大学第二临床医学院 摘要摘要 目的目的 观察盐酸 HCl 氢氧化钠 NaOH 温度 肾上腺素 E 乙酰 胆碱 Ach 缺空气对家兔离体肠肌运动的影响 方法方法 分别给予离体家兔肠肌标本 HCl NaOH 低温 肾上腺素 乙酰胆碱 缺氧刺激 完成每次刺激并出现明显现象后用 37 台氏液冲洗肠肌标本 观察 其收缩活动的特点并记录 结果结果 滴加 Ach NaOH 后 肠肌运动张力和频率都增大 滴加 E HCl 阿托 品后肠肌运动张力与频率迅速降低 停止通空气后 肠肌运动张力先迅速增强 后逐渐降低和频率逐渐降低 结论结论 HCl 和肾上腺素可抑制离体肠肌的运动 NaOH 乙酰胆碱和阿托品可增 强离体肠肌的运动 1 材料和方法材料和方法 1 1 实验材料 家兔 1 2 实验仪器 恒温浴槽 木槌 麦氏浴槽 棉线若干 手术剪 氧气泵 微 机生物信号采集处理系统 张力传感器 缝针 培养皿 1 3 实验药品 台式液 乙酰胆碱 肾上腺素 氢氧化钠溶液 盐酸溶液 1 4 离体家兔肠肌制备 取家兔一只 将其倒提 用木锤猛击后脑勺 使之昏迷 将其仰卧位固定 用 手术剪从剑突下沿腹部白线向耻骨联合方向剪开皮肤约 5cm 长 打开腹壁 暴露腹腔 顺着胃找到与胃相连的十二指肠 沿十二指肠向空肠的方向取出 小 肠段约 30cm 放入一小手术盘中 用注射器抽取预冷台氏液冲洗肠内容物 直至冲洗干净为止 将干净的小肠段放入另一盛有预冷台氏液的小手术盘中 用手术刀刮去肠管外的血管和系膜 将小肠段切割成小段 每小段肠约 2cm 长 并在小段肠的两端 距断端约 1mm 处各穿约 30cm 长的线 1 5 标本固定 1 5 1 取出固定架 将肠段的下端的线头尽量靠近并牢固地绑紧在固定架的 小钩 将固定架放回内槽 使小钩尽量靠近槽底 尽量减少台式 液的使用 重新用张力微调器固定固定架 将空气泵重新连接至 固定架 并通过固定架将空气输入内槽的台氏液中 1 5 2 将肠段的上端的线头与张力换能器的应变梁连接 用张力微调器缓慢 升降拉线 保持线有一定紧张度 肠段 线应与地平面垂直 同时 肠段及上端的线头不得碰及槽壁和固定架 1 5 3 换液 打开灌流槽的内槽排水阀门 排去原来的台氏液 用 20ml 注 射器从恒温水泵的小烧杯中抽取被加温的台氏液放入灌流槽的内槽 中 其每次用量以淹过肠段的量为准 调节位于固定架尾部的空气 流量调节旋钮 使气泡即细小 均匀 又不影响肠段的运动 1 6 实验观察 1 6 1 记录一段 37 的台氏液环境中小肠平滑肌收缩活动曲线 观察其收缩 活动的特点 2 52 1 6 2 待肠活动恢复后 向台氏液中加入 0 01 乙酰胆碱 Ach 1 滴 观 察小肠收缩活动的改变 待反应稳定后冲洗 1 遍 再加入等量的 37 的台氏液 1 6 3 待肠活动恢复后 向台氏液中加入 0 01 肾上腺素 E 1 滴 观察小 肠活动的改变 待反应稳定后冲洗 1 遍 再加入等量的 37 的台氏 液 1 6 4 待肠活动恢复后 向台氏液中加入 NaOH 1 滴 观察小肠收缩活动的 改变 待 反应稳定后冲洗 1 遍 再加入等量的 37 的台氏液 1 6 5 待肠活动恢复后 向台氏液中加入 HCl 1 滴 观察小肠收缩活动的改 变 反应稳定后冲洗 1 遍 再加入等量的 37 的台氏液 1 6 6 待肠活动恢复后 停止空气泵的工作 观察肠活动的改变 待其收缩 活动改变明显时反应稳定后冲洗 1 遍 再加入等量的 37 的台氏液 1 6 7 待肠活动恢复后 向台氏液中加入 Ach1 滴 再加入阿托品 1 滴 观 察小肠收缩活动的改变 反应稳定后冲洗 1 遍 终止实验 2 实验结果实验结果 图一 正常状态下的肠肌运动 图二 滴加乙酰胆碱后的肠肌运动 3 53 图三 滴加肾上腺素后的肠肌运动 图四 滴加氢氧化钠后的肠肌运动 图五 滴加盐酸后的肠肌运动 图六 缺氧及恢复供氧后的肠肌运动 4 54 图七 滴加阿托品后的肠肌运动 滴加 Ach NaOH 后 肠肌运动张力和频率都增大 滴加 E HCl 阿托品 后肠肌运动张力与频率迅速降低 停止通氧后 缺氧后肠肌开始一段有增强的 现象 而后肠肌运动张力和频率逐渐恢复正常 恢复通氧后 肠肌运动张力和 频率先降低而后恢复正常 3 分析与讨论分析与讨论 3 1 Ach 可明显兴奋胃肠道平滑肌 故 收缩频率增高 Ach 与肌膜上的 M 受体结合 使生电性钠泵活动减弱 从而使静息电位升高 平滑肌兴奋性 提高 收缩幅度增加 平滑肌钙离子专用通道开放 钙离子内流 一方 面使收缩频率增加 另一方面可以增加肌浆钙离子浓度 3 2 肾上腺素作用于肌膜 一方面使生电性钠泵活动增强 另一方面结合膜受 体 其中 受体使钾离子外流增加 受体使钾 钙离子外流增加 同 时增强钙泵活动 其中生电性钠泵活动增强 钾 钙离子外流增加导致细 胞膜超级化 平滑肌兴奋性降低 收缩频率降低 钙离子外流 钙泵活动 增强导致肌浆钙离子浓度下降 收缩幅度下降 3 3 消化道平滑肌对化学刺激敏感 小肠的 PH 约为 7 0 8 0 过高或过低的 PH 都会影响肠肌的收缩 滴加 NaOH 后 台氏液的 PH 值处于 7 0 8 0 之间 处于肠肌收缩的最适 PH 肠肌运动加强 由于 H 浓度降低 使钙离子通道活性受抑制减弱 钙离子内流 平滑肌兴奋性增高 故收缩 频率增高 收缩幅度增强 肌浆网钙离子释放增加 平滑肌收缩幅度增 强 张力曲线而后下降 说明肠肌对 PH 值变化有一定的适应力 3 4 消化道平滑肌对化学刺激敏感 滴加 HCl 后 台氏液的 PH 低于最适范围 7 0 8 0 胞外 H 升高 抑制钙通道的活性 钙离子内流减少 肌 肉收缩减弱 干扰肌肉的代谢和肌丝滑行的生化过程 氢离子与钙离子 竞争钙调蛋白的结合位点而使肌球蛋白 ATP 酶活性降低 使肌原纤维对 钙离子的敏感性和钙离子从肌质网的释放量减少 收缩减弱 5 55 3 5 停止通氧后 肠肌运动得不到能量供给 故肠肌运动在缺氧开始一段时间 代偿性增强 由于 ATP 有限 故随后运动张力和收缩幅度减弱 恢复通 氧后 肠肌得到能量供给 肠肌代偿运动消失 故造成运动张力和频率短 暂降低 由于 ATP 充足 故随后运动张力和频率逐渐升高 3 6 阿托品是拮抗剂 可明显抑制肠肌的活动 出现收缩曲线的频率减慢 振 幅减小 4 结论结论 一一定浓度 Ach